| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-35页 |
| 1.1 禾谷缢管蚜的发生、危害及抗药性现状 | 第19-20页 |
| 1.1.1 禾谷缢管蚜的发生与危害 | 第19页 |
| 1.1.2 禾谷缢管蚜的抗药性 | 第19-20页 |
| 1.2 害虫抗性机制 | 第20-24页 |
| 1.2.1 行为抗性 | 第21页 |
| 1.2.2 表皮穿透性下降 | 第21-22页 |
| 1.2.3 代谢抗性 | 第22-24页 |
| 1.2.4 靶标抗性 | 第24页 |
| 1.3 细胞色素P450 | 第24-28页 |
| 1.3.1 细胞色素P450 的定义 | 第24-25页 |
| 1.3.2 细胞色素P450 的命名 | 第25页 |
| 1.3.3 细胞色素P450 的结构特征 | 第25-26页 |
| 1.3.4 细胞色素P450 介导昆虫抗药性的机制 | 第26-28页 |
| 1.4 NADPH-细胞色素P450 还原酶 | 第28-31页 |
| 1.4.1 细胞色素P450 还原酶的结构 | 第29页 |
| 1.4.2 细胞色素P450 还原酶的功能 | 第29-31页 |
| 1.4.3 细胞色素P450 还原酶的突变 | 第31页 |
| 1.5 羧酸酯酶 | 第31-32页 |
| 1.5.1 羧酸酯酶的结构和水解机制 | 第31-32页 |
| 1.5.2 羧酸酯酶介导的抗药性机制 | 第32页 |
| 1.6 抗性相关基因的功能验证 | 第32-33页 |
| 1.6.1 RNA干扰 | 第33页 |
| 1.6.2 昆虫代谢抗性相关基因的体外表达 | 第33页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第33-35页 |
| 第二章 禾谷缢管蚜细胞色素P450 基因鉴定、克隆及其在异丙威抗性中的作用 | 第35-59页 |
| 2.1 材料与方法 | 第35-46页 |
| 2.1.1 禾谷缢管蚜品系 | 第35页 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器 | 第35-36页 |
| 2.1.3 禾谷缢管蚜P450 基因获取数据来源 | 第36页 |
| 2.1.4 禾谷缢管蚜总RNA的提取 | 第36-37页 |
| 2.1.5 cDNA合成 | 第37页 |
| 2.1.6 P450 基因的获取和PCR扩增 | 第37-41页 |
| 2.1.7 序列分析及系统发育树的构建 | 第41页 |
| 2.1.8 生物测定 | 第41-42页 |
| 2.1.9 P450 酶活测定 | 第42页 |
| 2.1.10 异丙威诱导处理 | 第42页 |
| 2.1.11 P450 定量分析 | 第42-45页 |
| 2.1.12 RNA干扰禾谷缢管蚜P450 CYP4CJ1 基因 | 第45页 |
| 2.1.13 CYP4CJ1 基因干扰后对氨基甲酸之类杀虫剂敏感性测定 | 第45页 |
| 2.1.14 CYP4CJ1 氨基酸序列分析和三维结构模拟 | 第45-46页 |
| 2.2 结果与分析 | 第46-56页 |
| 2.2.1 禾谷缢管蚜基因组P450 基因的鉴定 | 第46-51页 |
| 2.2.2 禾谷缢管蚜异丙威抗性筛选及交互抗性研究 | 第51页 |
| 2.2.3 禾谷缢管蚜敏感品系和异丙威抗性品系P450 酶活分析 | 第51-52页 |
| 2.2.4 P450 基因在禾谷缢管蚜异丙威抗性和敏感品系中表达差异 | 第52-53页 |
| 2.2.5 禾谷缢管蚜P450 基因在异丙威处理后的相对表达量差异 | 第53-54页 |
| 2.2.6 禾谷缢管蚜CYP4CJ1 基因RNAi和生物测定 | 第54-55页 |
| 2.2.7 禾谷缢管蚜CYP4CJ1 序列分析 | 第55-56页 |
| 2.3 结论与讨论 | 第56-59页 |
| 2.3.1 小结 | 第56-57页 |
| 2.3.2 讨论 | 第57-59页 |
| 第三章 禾谷缢管蚜CYP6CY3-3 基因的克隆和转录调控机制研究 | 第59-72页 |
| 3.1 材料与方法 | 第59-64页 |
| 3.1.1 禾谷缢管蚜品系 | 第59页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第59页 |
| 3.1.3 禾谷缢管蚜总RNA的提取 | 第59页 |
| 3.1.4 cDNA合成 | 第59页 |
| 3.1.5 禾谷缢管蚜CYP6CY3-3 基因全长的扩增 | 第59-60页 |
| 3.1.6 禾谷缢管蚜CYP6CY3-3 序列分析 | 第60-61页 |
| 3.1.7 禾谷缢管蚜CYP6CY3-3 基因在不同品系中的表达差异比较 | 第61页 |
| 3.1.8 禾谷缢管蚜CYP6CY3-3 基因5′侧翼区的克隆 | 第61-62页 |
| 3.1.9 序列分析 | 第62-63页 |
| 3.1.10 禾谷缢管蚜CYP6CY3-3 基因5'侧翼区的调控元件分析 | 第63页 |
| 3.1.11 质粒构建 | 第63页 |
| 3.1.12 无内毒素重组质粒的提取 | 第63-64页 |
| 3.1.13 真核细胞转染实验 | 第64页 |
| 3.1.14 双荧光素酶活性检测 | 第64页 |
| 3.2 结果与分析 | 第64-69页 |
| 3.2.1 禾谷缢管蚜CYP6CY3-3 基因序列 | 第64-65页 |
| 3.2.2 禾谷缢管蚜CYP6CY3-3 基因在吡虫啉抗性品系和敏感品系中的表达差异 | 第65-66页 |
| 3.2.3 禾谷缢管蚜CYP6CY3-3 基因5'侧翼区的获得和多态性分析 | 第66-67页 |
| 3.2.4 禾谷缢管蚜CYP6CY3-3 基因5'侧翼区的调控元件分析 | 第67-68页 |
| 3.2.5 禾谷缢管蚜CYP6CY3-3 基因的5'侧翼区活性分析 | 第68-69页 |
| 3.3 结论与讨论 | 第69-72页 |
| 3.3.1 小结 | 第69页 |
| 3.3.2 讨论 | 第69-72页 |
| 第四章 禾谷缢管蚜NADPH-细胞色素P450 还原酶基因克隆、表达模式和多态性研究 | 第72-83页 |
| 4.1 材料与方法 | 第72-74页 |
| 4.1.1 禾谷缢管蚜品系 | 第72页 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器 | 第72页 |
| 4.1.3 禾谷缢管蚜RNA提取 | 第72页 |
| 4.1.4 cDNA合成 | 第72页 |
| 4.1.5 RpCPR基因克隆 | 第72-73页 |
| 4.1.6 qRT-PCR | 第73页 |
| 4.1.7 禾谷缢管蚜田间不同个体CPR基因多态性检测 | 第73-74页 |
| 4.2 结果与分析 | 第74-80页 |
| 4.2.1 禾谷缢管蚜CPR基因扩增和序列分析 | 第74-75页 |
| 4.2.2 禾谷缢管蚜CPR基因与同源基因系统发育树 | 第75-76页 |
| 4.2.3 禾谷缢管蚜CPR基因在不同龄期的表达量变化 | 第76-77页 |
| 4.2.4 禾谷缢管蚜CPR基因在敏感品系和抗性品系中的相对表达量差异 | 第77-78页 |
| 4.2.5 禾谷缢管蚜CPR基因在农药诱导下的相对表达量变化 | 第78页 |
| 4.2.6 禾谷缢管蚜田间个体CPR基因多态性 | 第78-80页 |
| 4.3 结论和讨论 | 第80-83页 |
| 4.3.1 小结 | 第80-81页 |
| 4.3.2 讨论 | 第81-83页 |
| 第五章 羧酸酯酶在禾谷缢管蚜抗异丙威和氯氟氰菊酯中的作用 | 第83-97页 |
| 5.1 材料与方法 | 第83-89页 |
| 5.1.1 禾谷缢管蚜品系 | 第83页 |
| 5.1.2 主要试剂和仪器 | 第83页 |
| 5.1.3 禾谷缢管蚜羧酸酯酶酶活测定 | 第83-84页 |
| 5.1.4 禾谷缢管蚜总RNA的提取 | 第84页 |
| 5.1.5 cDNA合成 | 第84页 |
| 5.1.6 禾谷缢管蚜抗性相关羧酸酯酶基因确定 | 第84-85页 |
| 5.1.7 羧酸酯酶基因RpCarE扩增 | 第85页 |
| 5.1.8 RpCarE序列分析 | 第85页 |
| 5.1.9 RpCarE表达质粒构建 | 第85页 |
| 5.1.10 RpCarE原核表达 | 第85页 |
| 5.1.11 细胞收集及蛋白获取和纯化 | 第85-86页 |
| 5.1.12 聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western-blot检测 | 第86-87页 |
| 5.1.13 RpCarE蛋白对α-萘酯乙酸(α-NA)的酶活及动力学曲线测定 | 第87-88页 |
| 5.1.14 高效液相色谱法(HPLC)测定RpCarE纯化蛋白对农药的代谢降解活性 | 第88页 |
| 5.1.15 RpCarE结构模拟和药物分子对接 | 第88-89页 |
| 5.2 结果与分析 | 第89-94页 |
| 5.2.1 禾谷缢管蚜不同品系羧酸酯酶酶活 | 第89页 |
| 5.2.2 禾谷缢管蚜羧酸酯酶基因在敏感品系和抗药品系中的相对表达水平分析 | 第89-90页 |
| 5.2.3 禾谷缢管蚜羧酸酯酶基因cDNA全长克隆 | 第90-91页 |
| 5.2.4 禾谷缢管蚜RpCarE基因的原核表达及Western blot分析 | 第91-92页 |
| 5.2.5 RpCarE重组蛋白对α-NA的酶促动力学测定 | 第92页 |
| 5.2.6 RpCarE重组蛋白对异丙威和氯氟氰菊酯的代谢活性 | 第92-93页 |
| 5.2.7 RpCarE与异丙威和氯氟氰菊酯的分子对接 | 第93-94页 |
| 5.3 结论与讨论 | 第94-97页 |
| 5.3.1 小结 | 第94页 |
| 5.3.2 讨论 | 第94-97页 |
| 第六章 全文总结和研究展望 | 第97-99页 |
| 6.1 全文主要结论 | 第97-98页 |
| 6.2 下一步工作展望 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-112页 |
| 附录 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113-115页 |
| 作者简介 | 第115-116页 |
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