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当前位置:教育论文中心首页--博士论文--OY-TES-1表达对肿瘤生物学行为的影响及其抗体血清学分析
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OY-TES-1表达对肿瘤生物学行为的影响及其抗体血清学分析
 
     论文目录
 
英文缩略词第1-11页
中文摘要第11-14页
英文摘要第14-18页
前言第18-22页
第一部分 OY-TES-1 对肝癌细胞生物学行为影响的体外实验研究第22-78页
 一、构建真核表达载体及筛选用于转染的细胞株第22-47页
  1 材料第22-25页
   ·质粒、菌种和细胞株第22-23页
   ·主要试剂及工具酶第23-24页
   ·主要仪器设备第24页
   ·试剂及溶液配制第24-25页
  2 方法第25-38页
   ·构建 pEGFP-N1/OY-TES-1 真核表达载体第25-31页
     ·引物的设计及合成第25页
     ·质粒的扩增与提取第25-26页
     ·目的基因片段的PCR 扩增第26-27页
     ·目的基因及质粒的酶切处理第27页
     ·质粒 DNA 的去磷酸化处理第27-28页
     ·酶切片段的纯化回收第28-29页
     ·目的基因片段与pEGFP-N1 质粒的连接第29页
     ·质粒转化宿主菌第29-30页
     ·重组质粒的筛选与鉴定第30-31页
   ·筛选用于转染的肿瘤细胞株第31-38页
     ·细胞的常规培养第31-34页
     ·RT-PCR第34-38页
  3 结果第38-45页
   ·质粒DNA 的提取第38页
   ·OY-TES-1 的 PCR 扩增第38-39页
   ·pEGFP-N1 质粒的酶切处理第39页
   ·酶切产物的纯化回收第39页
   ·连接反应体系的确定第39-40页
   ·重组质粒的DNA 提取及电泳第40页
   ·重组质粒的PCR 鉴定第40页
   ·质粒测序及序列比对第40-44页
   ·OY-TES-1 转染细胞株的筛选第44-45页
  4 讨论第45-47页
 二、pEGFP-N1/ OY-TES-1 转染肝癌细胞及其鉴定第47-62页
  1 材料第47页
   ·细胞株第47页
   ·主要试剂及培养基第47页
   ·主要仪器设备第47页
   ·试剂及溶液配制第47页
  2 方法第47-54页
   ·无内毒素质粒的扩增及提取第47-49页
   ·细胞的常规培养第49页
   ·G418 筛选浓度的确立第49页
   ·质粒DNA 的转染第49-52页
     ·转染条件的优化第49-50页
     ·质粒DNA 的稳定转染第50-51页
     ·转染细胞的单克隆化第51-52页
   ·鉴定稳定转染的细胞第52-54页
     ·mRNA 水平的鉴定第52页
     ·蛋白水平的鉴定第52-54页
  3 结果第54-60页
   ·质粒DNA 的提取第54页
   ·G418 筛选浓度的确立第54-55页
   ·转染条件的优化第55页
   ·转染细胞的形态观察第55页
   ·转染效率的评价第55页
   ·质粒DNA 的稳定转染第55-58页
   ·稳定转染细胞的鉴定第58-60页
     ·mRNA 水平的鉴定第58页
     ·蛋白质水平的鉴定第58-60页
  4 讨论第60-62页
 三、OY-TES-1 转染对肝癌细胞的生长、增殖及迁移的影响第62-78页
  1 材料第62页
   ·细胞第62页
   ·主要试剂第62页
   ·主要仪器设备第62页
   ·试剂及溶液配制第62页
  2 方法第62-66页
   ·稳定转染后细胞的形态观察第62-63页
   ·观察细胞的生长情况第63-64页
     ·细胞计数法第63页
     ·MTT 比色法第63-64页
   ·平板克隆形成实验第64-65页
   ·流式细胞仪检测细胞周期第65页
   ·划痕修复实验第65-66页
  3 结果第66-76页
   ·稳定转染后的细胞形态第66页
   ·稳定转染后的细胞生长情况第66-69页
     ·细胞计数法绘制生长曲线第66-68页
     ·MTT 比色法绘制生长曲线第68-69页
   ·平板克隆形成实验第69-71页
   ·细胞周期的检测第71-73页
   ·划痕修复实验第73-76页
  4 讨论第76-78页
第二部分 OY-TES-1 在结直肠癌和脑膜瘤的表达及临床意义分析第78-100页
 一、OY-TES-1 在结直肠癌的表达及临床意义分析第78-93页
  1 材料第78-79页
   ·标本第78页
   ·临床病理资料第78-79页
   ·主要试剂及工具酶第79页
   ·主要仪器设备第79页
   ·试剂及溶液配制第79页
  2 方法第79-81页
   ·RT-PCR第79-80页
   ·组织切片染色第80页
     ·免疫组织化学第80页
     ·HE 染色第80页
   ·统计分析第80-81页
  3 结果第81-90页
   ·结直肠癌和腺瘤组织总RNA 的检测第81页
   ·结直肠癌和腺瘤OY-TES-1mRNA 的检测第81-82页
   ·结直肠癌和腺瘤 OY-TES-1 蛋白的检测第82-88页
   ·结直肠癌中 OY-TES-1mRNA 和蛋白的表达第88页
   ·结直肠癌表达 OY-TES-1 的临床意义第88-90页
  4 讨论第90-93页
 二、OY-TES-1 在脑膜瘤的表达及临床意义分析第93-100页
  1 材料第93页
   ·标本第93页
   ·临床病理资料第93页
   ·主要试剂及工具酶第93页
   ·主要仪器设备第93页
   ·试剂及溶液配制第93页
  2 方法第93页
  3 结果第93-98页
   ·脑膜瘤组织总RNA 的检测第93-94页
   ·脑膜瘤 OY-TES-1mRNA 的检测第94页
   ·脑膜瘤 OY-TES-1 蛋白的检测第94页
   ·脑膜瘤 OY-TES-1mRNA 与蛋白的表达第94-97页
   ·脑膜瘤OY-TES-1 表达的临床意义第97-98页
  4 讨论第98-100页
第三部分 结直肠癌和脑膜瘤患者血清 OY-TES-1 抗体的检测第100-123页
 1 材料第100-101页
   ·标本第100页
   ·临床病理资料第100-101页
   ·主要试剂及工具酶第101页
   ·主要仪器设备第101页
   ·试剂及溶液配制第101页
 2 方法第101-107页
   ·MBP/OY-TES-1 融合蛋白的制备第101-104页
     ·感受态细胞的制备(TSB 法)第101-102页
     ·重组质粒的转化第102页
     ·融合蛋白的诱导表达第102页
     ·融合蛋白的分离纯化第102-103页
     ·融合蛋白的电泳鉴定第103-104页
     ·融合蛋白的定量第104页
   ·间接ELISA 操作流程第104-105页
   ·抗原包被浓度和血清稀释度的测定第105页
   ·二抗和酶标记物最佳工作浓度的确定第105-106页
   ·血清的检测方法第106页
   ·血清OD 值的计算第106页
   ·阳性血清的判断第106页
   ·ELISA 重复性实验第106-107页
   ·统计分析第107页
 3 结果第107-119页
   ·MBP/OY-TES-1融合蛋白的电泳鉴定第107页
   ·抗原和血清最佳稀释度第107-110页
   ·二抗和酶标记物最佳工作浓度第110-112页
   ·正常人血清的检测第112页
   ·阳性血清的判断第112页
   ·结直肠癌患者血清 OY-TES-1 抗体检测结果第112-113页
   ·结直肠癌患者血清ELISA 重复性实验第113-114页
   ·脑膜瘤患者血清 OY-TES-1 抗体检测结果第114-115页
   ·脑膜瘤患者血清重复性实验第115-116页
   ·OY-TES-1 血清抗体与其表达的关系第116-119页
 4 讨论第119-123页
全文小结第123-124页
正文参考文献第124-135页
附录第135-140页
综述一 肝细胞癌免疫治疗的新靶标——CT 抗原第140-159页
 正文第140-149页
 参考文献第149-159页
综述二 癌-睾丸抗原 NY-ESO-1 抗原肽 表位特性鉴定及其多肽疫苗研究第159-169页
 正文第159-166页
 参考文献第166-169页
致谢第169-170页
攻读学位期间发表的论文目录第170页

 
 
论文编号BS420589,这篇论文共170
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