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当前位置:教育论文中心首页--博士论文--真菌第五家族纤维素酶的基因挖掘与分子改良研究
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真菌第五家族纤维素酶的基因挖掘与分子改良研究
 
     论文目录
 
摘要第3-5页
ABSTRACT第5-6页
论文主要引用符号的中英文缩略词第7-16页
1 引言第16-31页
    1.1 糖普水解酶第16页
    1.2 纤维素第16-18页
        1.2.1 纤维素结构组成第16-17页
        1.2.2 降解纤维素的微生物第17-18页
    1.3 纤维素酶第18-23页
        1.3.1 纤维素酶的组成第18页
        1.3.2 GH5纤维素酶第18-23页
    1.4 基因挖掘策略第23-24页
        1.4.1 基因组测序分析法第23页
        1.4.2 简并引物扩增法第23-24页
        1.4.3 质谱分析法第24页
        1.4.4 构建表达文库法第24页
    1.5 蛋白质分子改造第24-26页
        1.5.1 氨基酸序列比对第25页
        1.5.2 蛋白质结构预测第25页
        1.5.3 蛋自质-配体分子对接第25-26页
        1.5.4 分子动力学模拟第26页
    1.6 蛋白表达系统第26-27页
        1.6.1 毕赤酵母表达系统第26页
        1.6.2 里氏木霉表达系统第26-27页
    1.7 纤维素酶应用第27-29页
        1.7.1 纤维素酶在动物饲料中的应用第27-28页
        1.7.2 纤维素酶在食品行业中的应用第28页
        1.7.3 纤维素酶在造纸行业中的应用第28页
        1.7.4 纤维素酶在纺织行业中的应用第28-29页
        1.7.5 纤维素酶在能源中的应用第29页
    1.8 研究目的、意义及主要研究内容第29-31页
        1.8.1 研究目的及意义第29页
        1.8.2 主要研究内容第29-31页
2 GH5纤维素酶基因的克隆、表达及性质分析第31-62页
    2.1 引言第31页
    2.2 实验材料第31-34页
        2.2.1 质粒与菌株第31页
        2.2.2 培养基第31-32页
        2.2.3 试剂和缓冲液第32-33页
        2.2.4 工具酶与试剂盒第33页
        2.2.5 底物、缓冲液的配置第33页
        2.2.6 实验仪器第33-34页
        2.2.7 引物合成与测序第34页
    2.3 实验方法第34-46页
        2.3.1 真菌基因组DNA的提取第34页
        2.3.2 真菌RNA的提取及反转录第34-35页
        2.3.3 GH5纤维素酶基因的克隆第35-42页
        2.3.4 GH5纤维素酶基因的表达与纯化第42-44页
        2.3.5 GH5重组纤维素酶的酶学性质分析第44-46页
    2.4 结果与分析第46-59页
        2.4.1 纤维素酶基因序列分析第46-49页
        2.4.2 GH5纤维素酶酶学性质分析第49-59页
    2.5 讨论第59-61页
    2.6 本章小结第61-62页
3 纤维素酶SoCel5的耐热性改良第62-83页
    3.1 引言第62页
    3.2 实验材料第62-64页
        3.2.1 PCR模板、菌株和质粒第62页
        3.2.2 引物设计、合成与核酸序列测定第62页
        3.2.3 培养基及其配置第62页
        3.2.4 试剂及缓冲液第62页
        3.2.5 工具酶和试剂盒第62-64页
    3.3 实验方法第64-71页
        3.3.1 序列比对与结构模拟第64页
        3.3.2 分子动力学模拟第64-65页
        3.3.3 突变体设计第65-68页
        3.3.4 杂合酶的构建与筛选第68-70页
        3.3.5 野生型及杂合酶的耐热性分析第70-71页
    3.4 结果与分析第71-80页
        3.4.1 野生型及杂合酶蛋白表达结果第71页
        3.4.2 野生型SoCel5、TeEgl5A及杂合酶酶学性质分析第71-75页
        3.4.3 TeEgl5A的N端结构普适性研究第75-77页
        3.4.4 分子动力学模拟分析第77-80页
    3.5 讨论第80-82页
    3.6 本章小结第82-83页
4 纤维素酶BaCel5的催化效率改良第83-93页
    4.1 引言第83页
    4.2 实验材料第83-84页
        4.2.1 菌株、质粒及引物第83页
        4.2.2 引物设计、合成与核酸序列测定第83-84页
        4.2.3 培养基及其配置第84页
        4.2.4 试剂及缓冲液第84页
        4.2.5 工具酶和试剂盒第84页
    4.3 实验方法第84-86页
        4.3.1 TeEgl5A和BaCel5杂合酶设计第84页
        4.3.2 序列比对与结构模拟第84页
        4.3.3 分子动对接第84-85页
        4.3.4 分子动力学模拟第85-86页
        4.3.5 突变体的构建与筛选第86页
    4.4 结果与分析第86-91页
        4.4.1 SDS-PAGE分析第86页
        4.4.2 BaCe5及两个杂合酶酶学性质分析第86-88页
        4.4.3 BaCe5及两个杂合酶比活值分析第88页
        4.4.4 BaCel5及杂合酶催化效率分析第88-89页
        4.4.5 分子动力学模拟分析第89-91页
    4.5 讨论第91-92页
    4.6 本章小结第92-93页
5 纤维素酶GtCel5的催化效率改良第93-109页
    5.1 引言第93页
    5.2 实验材料第93-94页
        5.2.1 菌株、质粒及引物第93页
        5.2.2 引物设计、合成与核酸序列测定第93页
        5.2.3 培养基及其配置第93页
        5.2.4 试剂及缓冲液第93页
        5.2.5 工具酶和试剂盒第93-94页
    5.3 实验方法第94-98页
        5.3.1 GtCel5饱和突变位点的确定第94-95页
        5.3.2 序列比对与结构模拟第95页
        5.3.3 分子动对接第95-96页
        5.3.4 分子动力学模拟第96页
        5.3.5 突变体的构建与筛选第96-98页
    5.4 结果与分析第98-106页
        5.4.1 基因序列的进化关系分析第98-99页
        5.4.2 SDS-PAGE分析第99页
        5.4.3 比活性及催化效率分析第99-100页
        5.4.4 GtCe5及突变体酶学性质分析第100-101页
        5.4.5 TeEgl5A及SoCel5反向突变研究第101-103页
        5.4.6 分子动力学模拟分析第103-106页
    5.5 讨论第106-107页
    5.6 本章小结第107-109页
6 具有纤维素酶活性的膨胀素蛋白的相关研究第109-123页
    6.1 引言第109页
    6.2 实验材料第109-110页
        6.2.1 菌株和质粒第109页
        6.2.2 培养基、试剂第109-110页
        6.2.3 工具酶与试剂盒第110页
        6.2.4 底物及缓冲液的配置第110页
        6.2.5 实验仪器第110页
        6.2.6 引物合成与测序第110页
    6.3 实验方法第110-113页
        6.3.1 基因组模板DNA的提取第110页
        6.3.2 真菌RNA的提取及反转录第110页
        6.3.3 膨胀素蛋白TlSWO的基因克隆第110页
        6.3.4 TlSWO基因的表达与纯化第110-112页
        6.3.5 TlSWO的酶学性质分析第112页
        6.3.6 产物分析第112页
        6.3.7 TlS WO处理微晶纤维素第112页
        6.3.8 TlS WO与纤维素酶协同作用分析第112-113页
    6.4 结果与分析第113-119页
        6.4.1 TlS WO基因及表达结果分第113页
        6.4.2 TlS WO酶学性质分析第113-114页
        6.4.3 TlS WO比活值分析第114-115页
        6.4.4 TlS WO产物分析第115-116页
        6.4.5 TIS WO对微晶纤维素的作用效果第116-117页
        6.4.6 TlS WO与纤维素酶的协同作用第117-119页
    6.5 讨论第119-122页
    6.6 本章小结第122-123页
7 全文总结与展望第123-126页
    7.1 全文总结第123-124页
    7.2 创新点第124页
    7.3 展望第124-126页
参考文献第126-138页
个人简介第138-139页
导师简介第139-140页
获得成果目录清单第140-141页
致谢第141页

 
 
论文编号BS4398589,这篇论文共141
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