摘要 | 第7-9页 |
ABSTRACT | 第9-11页 |
缩略语 | 第12-14页 |
1 前言 | 第14-37页 |
1.1 基因毒性抗生素简述 | 第14-15页 |
1.2 基因毒性抗生素的研究进展 | 第15-26页 |
1.2.1 杰多霉素 | 第15-18页 |
1.2.2 柔红霉素和阿霉素 | 第18-20页 |
1.2.3 博来霉素 | 第20-22页 |
1.2.4 Enediynes | 第22-24页 |
1.2.5 丝裂霉素C | 第24-26页 |
1.3 阿嗪霉素B的研究进展 | 第26-32页 |
1.3.1 阿嗪霉素B的发现及其化学结构 | 第26页 |
1.3.2 作用机制 | 第26-27页 |
1.3.3 生物合成途径的研究 | 第27-31页 |
1.3.4 抗性因子的研究 | 第31-32页 |
1.4 基因毒性抗生素产生菌的自抗性机制 | 第32-35页 |
1.4.1 转运蛋白 | 第32-33页 |
1.4.2 药物失活 | 第33-35页 |
1.4.3 损伤修复 | 第35页 |
1.5 研究目的与意义 | 第35-37页 |
2 材料与方法 | 第37-61页 |
2.1 实验材料 | 第37-50页 |
2.1.1 质粒和菌株 | 第37-39页 |
2.1.2 引物序列 | 第39-45页 |
2.1.3 培养基 | 第45-46页 |
2.1.4 主要生化试剂 | 第46-49页 |
2.1.5 主要仪器 | 第49-50页 |
2.2 实验方法 | 第50-61页 |
2.2.1 菌株的培养及保藏 | 第50页 |
2.2.2 基因组DNA提取 | 第50-51页 |
2.2.3 PCR扩增基因片段 | 第51-52页 |
2.2.4 DNA胶回收 | 第52页 |
2.2.5 醋酸钠纯化DNA | 第52页 |
2.2.6 酶连反应 | 第52页 |
2.2.7 大肠杆菌感受态的制备及DNA转化 | 第52-53页 |
2.2.8 大肠杆菌质粒提取 | 第53页 |
2.2.9 两亲本属间接合转移 | 第53-54页 |
2.2.10 抗生素阿嗪霉素B的提取 | 第54页 |
2.2.11 发酵产物生物活性检测 | 第54页 |
2.2.12 S.sahachiroi菌株发酵产物的HPLC及 LC-MS检测 | 第54-55页 |
2.2.13 目的蛋白的表达及纯化 | 第55-56页 |
2.2.14 荧光淬灭 | 第56页 |
2.2.15 微量热泳动检测AziN与配体的结合 | 第56-57页 |
2.2.16 RNA抽提及反转录 | 第57-58页 |
2.2.17 荧光定量PCR | 第58-59页 |
2.2.18 荧光蛋白显微镜观察 | 第59页 |
2.2.19 凝胶阻滞迁移实验(EMSA) | 第59页 |
2.2.20 阿嗪霉素B介导的DNA交联 | 第59页 |
2.2.21 AziN的体外修复交联DNA | 第59-60页 |
2.2.22 Nick封闭实验 | 第60-61页 |
3 结果与分析 | 第61-107页 |
3.1 类核酸酶AziN的发现及鉴定 | 第61-88页 |
3.1.1 前期研究基础 | 第61-62页 |
3.1.2 生物信息学分析表明AziN可能是一种新的抗生素结合蛋白 | 第62-63页 |
3.1.3 AziN能够特异性结合阿嗪霉素B | 第63-68页 |
3.1.4 AziN的结合对阿嗪霉素B活性的影响 | 第68-69页 |
3.1.5 AziN能够赋予宿主对阿嗪霉素B的抗性 | 第69-73页 |
3.1.6 AziN在阿嗪霉素B产生菌中的表达 | 第73-75页 |
3.1.7 AziN能够特异性识别阿嗪霉素B交联的DNA | 第75-76页 |
3.1.8 AziN可切割阿嗪霉素B交联的DNA | 第76-83页 |
3.1.9 AziN切割位点的分析 | 第83-88页 |
3.2 未知功能基因orf8和orf10 的研究 | 第88-92页 |
3.2.1 orf8和orf10 的生物信息学分析 | 第88-89页 |
3.2.2 异源表达菌株的构建及分析 | 第89-92页 |
3.3 外排蛋白AziE的功能分析 | 第92-97页 |
3.3.1 AziE的生物信息学分析 | 第92页 |
3.3.2 异源表达菌株的抗性检测 | 第92-93页 |
3.3.3 aziE运输阿嗪霉素B的功能检测 | 第93-94页 |
3.3.4 AziE的亚细胞定位 | 第94-97页 |
3.4 抗性蛋白AziF的研究 | 第97-107页 |
3.4.1 AziF的生物信息学分析 | 第97-98页 |
3.4.2 AziF为阿嗪霉素B产生菌中所必须的抗性基因 | 第98-102页 |
3.4.3 AziF抗性机制的探究 | 第102-107页 |
4 讨论 | 第107-111页 |
4.1 外排蛋白AziE | 第107页 |
4.2 AziF蛋白的抗性作用 | 第107-108页 |
4.3 类核酸酶AziN的发现 | 第108-109页 |
4.4 阿嗪霉素B产生菌的自抗性系统 | 第109-111页 |
5 总结与展望 | 第111-113页 |
5.1 总结 | 第111页 |
5.2 展望 | 第111-113页 |
参考文献 | 第113-124页 |
附录 论文发表情况 | 第124-125页 |
致谢 | 第125页 |