| 中文摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 研究的目的意义 | 第12-13页 |
| 1 引言 | 第13-31页 |
| ·磷脂信号途径 | 第13-16页 |
| ·植物磷脂酶C 研究进展 | 第16-22页 |
| ·PLC 的类型及结构 | 第16-19页 |
| ·植物磷脂酶C 的活性调节 | 第19-20页 |
| ·植物磷脂酶C 的纯化、基因克隆及表达特征 | 第20-21页 |
| ·植物磷脂酶C 的信号途径 | 第21-22页 |
| ·植物PLC 的生理功能 | 第22-31页 |
| ·参与渗透调节和气孔开关 | 第22-24页 |
| ·参与激素信号转导 | 第24-25页 |
| ·参与光信号 | 第25页 |
| ·参与尖端生长的调节 | 第25-26页 |
| ·参与胁迫反应 | 第26-27页 |
| ·感受重力刺激及其他生理过程 | 第27-28页 |
| ·参与植物防卫反应 | 第28-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-47页 |
| ·试验材料 | 第31-35页 |
| ·酶及生化试剂 | 第31页 |
| ·培养基的配制 | 第31-33页 |
| ·蛋白激发子ParA1 的制备 | 第33页 |
| ·烟草黑胫病菌游动孢子悬浮液的制备 | 第33页 |
| ·烟草赤星病菌分生孢子悬浮液的制备和接种 | 第33-34页 |
| ·烟草悬浮细胞 | 第34页 |
| ·供试植物 | 第34页 |
| ·PCR 引物 | 第34-35页 |
| ·菌株与质粒 | 第35页 |
| ·试验方法 | 第35-47页 |
| ·烟草悬浮细胞的诱导处理 | 第35页 |
| ·Real Time-PCR | 第35-38页 |
| ·烟草悬浮细胞及组织总RNA 的提取和纯度测定 | 第35-36页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第36页 |
| ·PCR 反应体系及程序 | 第36-37页 |
| ·Real Time-PCR 结果分析 | 第37-38页 |
| ·NtPLC4 基因的获得 | 第38-40页 |
| ·RNA 的提取 | 第38页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第38-39页 |
| ·PCR 反应体系及程序 | 第39-40页 |
| ·琼脂糖凝胶中DNA 片段的回收 | 第40页 |
| ·DNA 片段与克隆载体的连接 | 第40-41页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第41页 |
| ·大肠杆菌的转化及筛选 | 第41-42页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA | 第42-43页 |
| ·克隆载体的酶切鉴定 | 第43页 |
| ·DNA 序列的测定 | 第43页 |
| ·烟草NtPLC4 基因正义、反义表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·正义（反义）NtPLC4 基因全长的获得 | 第43页 |
| ·正义（反义）片段与pEASYTM-T3 载体的连接及转化 | 第43-44页 |
| ·正义（反义）NtPLC4 表达载体的连接及转化 | 第44页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第44-45页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第44-45页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第45页 |
| ·农杆菌介导法转化烟草 | 第45-46页 |
| ·转基因植株的分子检测 | 第46页 |
| ·CTAB 法提取烟草总DNA | 第46页 |
| ·PCR 检测 | 第46页 |
| ·烟草赤星病菌离体叶片接种 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-63页 |
| ·四个PLC 基因在烟草植株不同组织中的表达模式 | 第47-48页 |
| ·烟草四个PLC 基因在环境胁迫下的表达模式 | 第48-50页 |
| ·烟草四个PLC 基因在生物胁迫下的表达模式 | 第50-51页 |
| ·NtPLC4 基因的克隆 | 第51-52页 |
| ·RNA 的提取、检测及反转录 | 第51-52页 |
| ·NtPLC4 基因的克隆 | 第52页 |
| ·NtPLC4 基因测序及序列分析 | 第52-55页 |
| ·烟草NtPLC4 核苷酸序列及推导的氨基酸序列 | 第52-54页 |
| ·烟草NtPLC4 氨基酸保守域分析 | 第54-55页 |
| ·烟草NtPLC4 基因植物表达载体构建 | 第55-58页 |
| ·根癌农杆菌LBA4404 的转化 | 第58-59页 |
| ·农杆菌介导的基因转化植株再生及T_0 代转基因植株的筛选 | 第59-61页 |
| ·农杆菌介导的基因转化植株的再生 | 第59-60页 |
| ·T_0 代转基因植株的PCR 检测和生长表型观察 | 第60-61页 |
| ·T_0 代转基因烟草的NtPLC4 基因表达量测定 | 第61-62页 |
| ·T_0 代转基因烟草的抗病性分析 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-67页 |
| ·烟草四个PLC 基因具有不同的组织表达特异性和功能分化 | 第63-64页 |
| ·NtPLC4 基因正义、反义植物表达载体的构建及烟草转化 | 第64-65页 |
| ·PLC 在植物抗病防卫反应中的作用 | 第65-67页 |
| 5 总结与展望 | 第67-68页 |
| ·全文总结 | 第67页 |
| ·研究展望 | 第67-68页 |
| 6 参考文献 | 第68-81页 |
| 7 致谢 | 第81-82页 |
| 8 攻读学位期间发表论文情况 | 第82-83页 |
| 硕士学位论文内容简介及自评 | 第83页 |
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