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S型短链脱氢酶的克隆、鉴定及其催化制备S-CHBE的研究 |
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论文目录 |
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致谢 | 第1-6页 | 摘要 | 第6-7页 | Abstract | 第7-8页 | 目录 | 第8-12页 | 1. 绪论 | 第12-22页 | ·生物催化的意义及研究进展 | 第12-14页 | ·短链脱氢酶超家族概述 | 第14-15页 | ·4-氯-3-羟基丁酸乙酯的不对称合成 | 第15-16页 | ·非生物法 | 第15-16页 | ·微生物法 | 第16页 | ·酶法 | 第16页 | ·定点突变技术 | 第16-19页 | ·寡核苷酸引物介导的定点突变 | 第17-18页 | ·PCR介导的定点突变 | 第18页 | ·盒式突变 | 第18-19页 | ·酶耦联反应 | 第19-20页 | ·研究目的与内容 | 第20-22页 | 2 近平滑假丝酵母的短链脱氢酶基因(CPE)的克隆和表达 | 第22-49页 | ·引言 | 第22页 | ·材料与方法 | 第22-25页 | ·实验材料 | 第22-23页 | ·仪器及设备 | 第23页 | ·试剂 | 第23-24页 | ·主要溶液配制 | 第24-25页 | ·实验方法 | 第25-34页 | ·基因组DNA的提取 | 第25-26页 | ·PCR引物的设计 | 第26页 | ·PCR反应 | 第26-27页 | ·PCR产物的回收 | 第27页 | ·CPE-T质粒的构建 | 第27-28页 | ·表达质粒的构建 | 第28-30页 | ·基因的表达与纯化 | 第30-33页 | ·COBE的转化反应 | 第33-34页 | ·结果与分析 | 第34-46页 | ·基因组DNA的提取 | 第34页 | ·基因CPE的获得及测序结果 | 第34-36页 | ·CPE的表达 | 第36页 | ·蛋白浓度的测定 | 第36-37页 | ·纯化后的蛋白 | 第37-39页 | ·目的蛋白活性检测 | 第39-40页 | ·目的蛋白的酶学性质测定 | 第40-42页 | ·CPE对CHBE的转化反应 | 第42-46页 | ·讨论 | 第46-49页 | 3 近平滑假丝酵母的短链脱氢酶基因CPE的定点突变 | 第49-69页 | ·引言 | 第49页 | ·材料、仪器与试剂 | 第49-51页 | ·试验材料 | 第49页 | ·主要仪器及设备 | 第49页 | ·主要试剂 | 第49-50页 | ·主要溶液配置 | 第50-51页 | ·实验所用程序及软件 | 第51页 | ·实验方法 | 第51-57页 | ·CPE序列分析 | 第51页 | ·氨基酸定点突变 | 第51-53页 | ·突变基因的获得 | 第53-54页 | ·突变基因表达载体的构建 | 第54-55页 | ·突变基因的表达 | 第55页 | ·突变蛋白表达产物的鉴定及蛋白浓度测定 | 第55页 | ·突变蛋白纯化 | 第55页 | ·突变蛋白与原蛋白底物谱的比较 | 第55页 | ·突变蛋白与蛋白转化效率及手性的比较 | 第55-57页 | ·突变蛋白反应体系的优化 | 第57页 | ·结果与分析 | 第57-67页 | ·CPE序列分析 | 第57-60页 | ·突变工程菌的构建 | 第60页 | ·突变蛋白的表达 | 第60-61页 | ·突变蛋白的纯化 | 第61-62页 | ·突变后蛋白与CPE性质比较 | 第62-65页 | ·突变后蛋白与CPE转化率比较 | 第65-66页 | ·部分突变蛋白的优化 | 第66-67页 | ·讨论 | 第67-69页 | 4 构建葡萄糖脱氢酶和短链脱氢酶的共表达体系 | 第69-85页 | ·引言 | 第69页 | ·材料、仪器与试剂 | 第69-71页 | ·试验材料 | 第69页 | ·主要仪器及设备 | 第69-70页 | ·主要试剂 | 第70页 | ·主要溶液配置 | 第70-71页 | ·试验方法 | 第71-74页 | ·葡萄糖脱氢酶质粒的获得 | 第71-72页 | ·CPE-PET21d质粒获得 | 第72页 | ·表达载体的构建 | 第72-73页 | ·重组基因的表达 | 第73页 | ·重组基因的蛋白表达 | 第73页 | ·共表达体系转化反应 | 第73-74页 | ·结果与分析 | 第74-84页 | ·葡萄糖脱氢酶质粒的获得 | 第74-75页 | ·重组质粒的鉴定 | 第75-77页 | ·重组基因的蛋白表达 | 第77-79页 | ·共表达体系的转化反应 | 第79-84页 | ·讨论 | 第84-85页 | 5 结论与展望 | 第85-87页 | ·结论 | 第85页 | ·近平滑假丝酵母Candida parapsilosis的短链脱氢酶基因的克隆和表达 | 第85页 | ·近平滑假丝酵母Candida parapsilosis的短链脱氢酶基因的定点突变 | 第85页 | ·构建葡萄糖脱氢酶和短链脱氢酶的共表达体系 | 第85页 | ·论文的创新与意义 | 第85-86页 | ·论文的展望 | 第86-87页 | 已发表论文 | 第87-88页 | 参考文献 | 第88-93页 |
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