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当前位置:教育论文中心首页--博士论文--毛白杨CRTISO的ABA顺反异构功能与酶学特性研究—附:植物激素等次生代谢物分析方法
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毛白杨CRTISO的ABA顺反异构功能与酶学特性研究—附:植物激素等次生代谢物分析方法
 
     论文目录
 
摘要第3-5页
ABSTRACT第5-7页
主要符号对照表第12-14页
1. 文献综述第14-30页
    1.1. 毛白杨次生代谢物季节性积累第14-15页
    1.2. 类胡萝卜素第15-18页
        1.2.1. 类胡萝卜素的性质与功能第15-16页
        1.2.2. 类胡萝卜素的生物合成第16-17页
        1.2.3. 类胡萝卜素的基因工程进展第17-18页
    1.3. ABA等多种植物激素的研究背景第18-24页
        1.3.1. 脱落酸第20页
        1.3.2. 独脚金内酯、油菜素内酯是新发现的植物激素第20-21页
        1.3.3. 细胞分裂素等传统植物激素第21-22页
        1.3.4. 水杨酸、茉莉酸是新确认的植物激素第22-24页
    1.4. 类胡萝卜素异构酶CRTISO研究进展第24-25页
    1.5. 植物小分子物质分析方法的研究进展第25-26页
    1.6. ABA的前体物质-萜烯类化合物第26-27页
    1.7. 本研究的目的、意义第27-28页
    1.8. 技术路线第28-30页
2. PtCRTISO基因克隆与生物信息学分析第30-44页
    2.1. 实验材料第30-32页
        2.1.1. 实验试剂和仪器第30-31页
        2.1.2. 试剂配制第31-32页
    2.2. 实验方法第32-36页
        2.2.1. 目的基因的序列分析与引物设计第32页
        2.2.2. 植物样品总RNA的提取第32页
        2.2.3. RNA的反转录与cDNA文库的构建第32-33页
        2.2.4. PCR扩增第33页
        2.2.5. 琼脂糖凝胶电泳与目的基因的回收第33-34页
        2.2.6. 目的基因的分子亚克隆第34-35页
        2.2.7. 生物信息学分析方法第35-36页
    2.3. 结果与分析第36-43页
        2.3.1. PtCRTISO生物信息学分析第36-40页
        2.3.2. PtCRTISO与ABA分子对接第40-43页
    2.4. 讨论第43-44页
3. PtCRTISO、AtCRTISO原核表达第44-60页
    3.1. 实验材料第44-45页
        3.1.1. 载体、菌株与试剂盒第44页
        3.1.2. 试剂配制第44-45页
    3.2. 实验方法第45-51页
        3.2.1. 载体酶切位点的选择第45-46页
        3.2.2. 构建原核表达载体第46-47页
        3.2.3. IPTG诱导目的蛋白的高效表达第47页
        3.2.4. SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳第47-48页
        3.2.5. Ni-NTA纯化目的蛋白第48-49页
        3.2.6. GST标签重组蛋白纯化第49页
        3.2.7. MBP标签重组蛋白纯化第49-50页
        3.2.8. 凝血酶Thrombin切除蛋白标签第50页
        3.2.9. 蛋白浓度的测定第50-51页
    3.3. 结果与分析第51-57页
        3.3.1. pQE30载体的蛋白表达第51-52页
        3.3.2. pET28a载体的蛋白表达第52页
        3.3.3. pCold I载体的蛋白表达第52-53页
        3.3.4. GST标签的融合蛋白表达第53-54页
        3.3.5. MBP标签的融合蛋白的表达第54-55页
        3.3.6. NusA标签的融合蛋白的表达第55-56页
        3.3.7. 重组蛋白NusA标签的酶切与纯化第56-57页
    3.4. 讨论第57-60页
4. PtCRTISO的酵母表达与酶活分析第60-72页
    4.1. 实验材料第60-62页
        4.1.1. 菌株与试剂盒第60页
        4.1.2. 试剂配制第60-62页
    4.2. 实验方法第62-65页
        4.2.1. 载体构建第62页
        4.2.2. 酵母细胞的转化第62-63页
        4.2.3. 阳性转化子的筛选第63-64页
        4.2.4. 目的蛋白的浓缩与纯化第64-65页
        4.2.5. 目的蛋白的浓度测定第65页
        4.2.6. 酶活反应体系第65页
    4.3. 结果与分析第65-70页
        4.3.1. 酵母GS115表达目的蛋白第65-66页
        4.3.2. 蛋白浓度测定第66-67页
        4.3.3. PtCRTISO酶活分析第67-69页
        4.3.4. PtCRTISO最适反应条件第69-70页
        4.3.5. PtCRTISO酶活参数第70页
    4.4. 讨论第70-72页
5. PtCRTISO在植物中的功能研究第72-82页
    5.1. 实验材料第72-73页
        5.1.1. 载体与菌株第72页
        5.1.2. 实验试剂第72页
        5.1.3. 实验仪器第72页
        5.1.4. 毛白杨季节性叶片样品的采集第72-73页
    5.2. 实验方法第73-75页
        5.2.1. PtCRTISO基因正义植物表达载体的构建第73页
        5.2.2. pBI121-CRTISO重组质粒转化农杆菌第73-74页
        5.2.3. 农杆菌介导的烟草转化第74页
        5.2.4. CTAB法提取转基因烟草总DNA第74页
        5.2.5. 转基因烟草RNA提取与荧光定量PCR检测第74-75页
        5.2.6. ABA的检测方法第75页
    5.3. 结果与分析第75-80页
        5.3.1. pBI121-PtCRTISO重组质粒与转化农杆菌的分子鉴定第75-76页
        5.3.2. 转基因烟草的分子鉴定第76-77页
        5.3.3. 转基因植株的荧光定量PCR鉴定第77-78页
        5.3.4. 转基因植株的ABA积累量检测第78-79页
        5.3.5. PtCRTISO在毛白杨中的季节性表达第79-80页
    5.4. 讨论第80-82页
6. 包含ABA的多种类植物激素同时高效检测第82-100页
    6.1. 实验材料第83-84页
        6.1.1. 实验仪器与药品试剂第83页
        6.1.2. 植物材料第83-84页
    6.2. 实验方法第84-88页
        6.2.1. 植物样品的提取方法第84-86页
        6.2.2. 高效液相色谱分离方法第86页
        6.2.3. 气体乙烯分析方法第86-87页
        6.2.4. 萜烯类化合物质谱检测方法第87页
        6.2.5. 植物激素质谱检测方法第87-88页
    6.3. 结果与分析第88-98页
        6.3.1. 九大类植物激素及其氘标化合物的色谱分离图谱、质谱图与裂解结构图第88-94页
        6.3.2. 九大类植物激素的标准曲线与最低检测限第94页
        6.3.3. 九大类植物激素的加样回收率第94-95页
        6.3.4. 激素分析方法用于检测不同物种中的内源植物激素的含量第95-97页
        6.3.5. 气相色谱分析乙烯与其前体ACC的线性关系第97页
        6.3.6. 植物中内源萜烯类化合物含量分析第97-98页
    6.4. 讨论第98-100页
7. 全文总结第100-102页
参考文献第102-112页
个人简介第112-114页
导师简介第114-118页
获得成果目录第118-120页
致谢第120-121页

 
 
论文编号BS4398604,这篇论文共121
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