| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-37页 |
| ·G蛋白与细胞信号转导 | 第11-12页 |
| ·RAS基因及其蛋白产物 | 第12-14页 |
| ·CAMP信号通路的组成及作用 | 第14-15页 |
| ·蛋白质的可逆磷酸化 | 第15-17页 |
| ·蛋白激酶及蛋白磷酸酶 | 第15-16页 |
| ·蛋白质可逆磷酸化对信号转导的调节方式及意义 | 第16-17页 |
| ·酿酒酵母CAMP信号转导通路 | 第17-26页 |
| ·G蛋白偶联的受体体系（Gp11-Gpa2） | 第18-19页 |
| ·Ras-cAMP 信号通路组成 | 第19-25页 |
| ·Ras 蛋白 | 第19-21页 |
| ·Cdc25 和Sdc25 | 第21-22页 |
| ·Ira1 和Ira2 | 第22-23页 |
| ·Cdc35/Cy11 | 第23页 |
| ·Cap | 第23-24页 |
| ·Pde1 和Pde2 | 第24-25页 |
| ·cAMP途径的主要靶标--cAMP依赖的蛋白激酶PKA | 第25-26页 |
| ·酿酒酵母RAS－CAMP信号通路的反馈抑制作用 | 第26-28页 |
| ·酿酒酵母细胞中CAMP途径的生理作用 | 第28-30页 |
| ·葡萄糖诱导的cAMP信号途径的激活对碳代谢的影响 | 第28-29页 |
| ·葡萄糖激活cAMP信号通路的生理作用 | 第29-30页 |
| ·RAS-CAMP途径和发酵生长培养基诱导的途径（FGM途径） | 第30-32页 |
| ·在葡萄糖和非发酵碳源上生长的细胞显示出相反表型 | 第30-31页 |
| ·FGM途径与Ras-cAMP途径的重叠靶标特异性 | 第31-32页 |
| ·RAS-CAMP途径/PKA活性与胁迫抗性 | 第32-36页 |
| ·酿酒酵母的通用胁迫响应 | 第32-33页 |
| ·胁迫抗性的获得与Ras-cAMP途径 | 第33-36页 |
| ·cAMP-PKA途径与胁迫响应之间的关系 | 第33-34页 |
| ·胁迫响应元件STRE | 第34-35页 |
| ·STRE的结合因子M5112p和M5114 | 第35页 |
| ·胁迫条件与M5112p和 M5114p功 | 第35-36页 |
| ·STRE调控基因和通用胁迫响应的生理任务 | 第36页 |
| ·本研究的目的和内容 | 第36-37页 |
| 第二章 材料与方法 | 第37-63页 |
| ·实验材料 | 第37-46页 |
| ·质粒、菌株与引物 | 第37-41页 |
| ·质粒 | 第37-38页 |
| ·菌株 | 第38-39页 |
| ·引物 | 第39-41页 |
| ·主要实验仪器 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41-43页 |
| ·培养基 | 第43-44页 |
| ·主要溶液 | 第44-46页 |
| ·实验方法 | 第46-63页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第46-47页 |
| ·CaC1_2 法 | 第46页 |
| ·电转化法 | 第46-47页 |
| ·小规模提取大肠杆菌质粒法（CTAB法） | 第47-48页 |
| ·酵母染色体的快速分离 | 第48页 |
| ·PCR扩增反应 | 第48-49页 |
| ·定点诱变PCR | 第49-50页 |
| ·融合PCR | 第50页 |
| ·DNA的限制酶消化 | 第50-51页 |
| ·DNA的连接反应 | 第51-52页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第52页 |
| ·从琼脂糖中回收DNA | 第52页 |
| ·酵母细胞的转化方法 | 第52-53页 |
| ·质粒缺口修复（Gap-Repair） | 第53页 |
| ·酵母中质粒的回收 | 第53-54页 |
| ·酵母交配型的验证 | 第54页 |
| ·不同交配型酵母细胞之间的杂交 | 第54页 |
| ·产孢及四分体孢子拆分 | 第54-55页 |
| ·Dilution实验方法 | 第55页 |
| ·热击实验方法 | 第55-56页 |
| ·水浴热击 | 第55页 |
| ·固体培养热击 | 第55-56页 |
| ·cAMP定量测量 | 第56-58页 |
| ·cAMP定量测量原理 | 第56页 |
| ·样品采集 | 第56-57页 |
| ·待测cAMP样品制备 | 第57页 |
| ·试剂制备（Cyclic AMP[3H]分析系统试剂盒） | 第57页 |
| ·cAMP系列浓度标准溶液制备 | 第57页 |
| ·测定方案 | 第57-58页 |
| ·数据处理 | 第58页 |
| ·蛋白质浓度的定量（Bio-Rad方法） | 第58-59页 |
| ·玻璃珠法提取酿酒酵母总蛋白 | 第59页 |
| ·免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP) | 第59-60页 |
| ·大肠杆菌BL21 中GST-RAD的诱导表达及总蛋白的超声提取 | 第60页 |
| ·Sepharose Beads-GSH与融合蛋白GST-RAD结合 | 第60-61页 |
| ·亲合产物与酵母总蛋白中Ras2-GTP的Pulldown | 第61页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶的制备 | 第61-62页 |
| ·Western blot蛋白免疫实验 | 第62-63页 |
| 第三章 RAS/PKA活性对细胞质粒保持性的影响 | 第63-77页 |
| ·概述 | 第63页 |
| ·实验结果与讨论 | 第63-76页 |
| ·Ras/PKA活性在热击胁迫条件下对细胞质粒保持性的影响 | 第63-68页 |
| ·质粒YCplac22-Ras2 和YCplac22-Ras2Va119 的构建 | 第63-65页 |
| ·采用质粒缺口修复技术克隆Ras2 和Ras2Va119 | 第65-67页 |
| ·Ras/PKA活性对热击胁迫条件下细胞质粒保持性的影响 | 第67-68页 |
| ·Ras/PKA活性对氮源饥饿及泠击胁迫下细胞质粒保持性的影响 | 第68-70页 |
| ·载体与Ras/PKA活性对热击胁迫下细胞质粒保持性的影响 | 第70-74页 |
| ·质粒载体选择标记的影响 | 第70-72页 |
| ·质粒载体类型的影响 | 第72-74页 |
| ·细胞PKA水平对质粒保持性的影响 | 第74-76页 |
| ·本章小结 | 第76-77页 |
| 第四章 磷酸化作用对酿酒酵母RAS-CAMP信号途径反馈抑制 | 第77-110页 |
| ·概述 | 第77-78页 |
| ·实验结果与讨论 | 第78-108页 |
| ·Ras2 蛋白磷酸化位点突变对细胞表型的影响 | 第78-89页 |
| ·质粒和菌株的构建 | 第78-84页 |
| ·Ras2 蛋白磷酸化位点突变对细胞表型的影响 | 第84-89页 |
| ·Ras2 蛋白磷酸化位点突变对Ras2-GTP相对含量的影响 | 第89-96页 |
| ·大肠杆菌表达质粒的构建及融合蛋白的表达、纯化和功能验证.. | 第89-94页 |
| ·Ras2 蛋白磷酸化位点突变对Ras2-GTP相对含量的影响 | 第94-96页 |
| ·PKA活性对Ras2-GTP相对含量的影响 | 第96-99页 |
| ·碳源及PKA活性对Ras2-GTP相对含量的影响 | 第99-100页 |
| ·碳源及PKA活性对Cdc25-Ras2 相互作用的影响 | 第100-102页 |
| ·葡萄糖诱导下PKA的激活对Ras2-GTP水平及Cdc25-Ras2 相互作用的影响 | 第102-103页 |
| ·磷酸化位点突变及PKA活性对Ras2 蛋白定位的影响 | 第103-108页 |
| ·YCplac22-GFP-Ras2 等位基因质粒的构建 | 第103-105页 |
| ·磷酸化位点突变及PKA活性对Ras2 蛋白定位的影响 | 第105-108页 |
| ·本章小结 | 第108-110页 |
| 第五章 RAS蛋白启动子对蛋白表达及细胞表型的影响 | 第110-121页 |
| ·概述 | 第110-111页 |
| ·实验结果与讨论 | 第111-120页 |
| ·不同基因背景下RAS1 或Ras2 对细胞热击敏感性和碳代谢的影响 | 第111-112页 |
| ·菌株的构建 | 第111页 |
| ·不同基因背景下RAS1 或Ras2 对细胞热击胁迫抗性和碳代谢的影响 | 第111-112页 |
| ·RAS1 与Ras2 启动子效率的比较研究 | 第112-120页 |
| ·质粒的构建 | 第113-117页 |
| ·不同启动子对细胞在非发酵碳源上生长情况的影响 | 第117-119页 |
| ·RAS1p，Ras2p在葡萄糖激活Ras-cAMP 信号途径中的作用 | 第119-120页 |
| ·Westen实验检验启动子对蛋白表达量的影响 | 第120页 |
| ·本章小结 | 第120-121页 |
| 第六章 总结与展望 | 第121-124页 |
| ·主要工作总结 | 第121-122页 |
| ·相关工作的展望 | 第122-124页 |
| 参考文献 | 第124-136页 |
| 附录1 生化名词缩写 | 第136-137页 |
| 附录2 基因及其相应编码产物 | 第137-138页 |
| 致谢 | 第138页 |
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