| 中文摘要 | 第4-6页 |
| 英文摘要 | 第6页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 绪论 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-44页 |
| 1．1 引言 | 第15页 |
| 1．2 蛋白质折叠复性研究的必要性 | 第15-21页 |
| 1．2．1 基因工程蛋白在E．coli中的表达和折叠复性 | 第16-18页 |
| 1．2．2 解读第二遗传密码 | 第18-19页 |
| 1．2．3 蛋白质分子设计和蛋白质工程 | 第19-20页 |
| 1．2．4 治疗蛋白质错误折叠导致的疾病 | 第20-21页 |
| 1．3 蛋白质折叠复性的方法学基础 | 第21-25页 |
| 1．3．1 蛋白质的变复性 | 第21-22页 |
| 1．3．2 蛋白质折叠复性的路径 | 第22-23页 |
| 1．3．3 折叠过程中的聚集体 | 第23-25页 |
| 1．4 包涵体蛋白质的体外折叠复性方法 | 第25-35页 |
| 1．4．1 包涵体的制备 | 第25页 |
| 1．4．2 包涵体蛋白的变性溶解 | 第25-26页 |
| 1．4．3 包涵体蛋白的体外折叠复性方法 | 第26-35页 |
| 1．4．3．1 透析和稀释复性法 | 第26-27页 |
| 1．4．3．2 折叠促进剂协助复性 | 第27-28页 |
| 1．4．3．3 反向微团复性法 | 第28-29页 |
| 1．4．3．4 双水相复性法 | 第29-30页 |
| 1．4．3．5 分子伴侣介导的复性法 | 第30-31页 |
| 1．4．3．6 层析折叠复性 | 第31-34页 |
| 1．4．3．7 结合上游技术的蛋白质复性方法 | 第34-35页 |
| 1．5 蛋白质折叠研究的实验技术和复性蛋白质的检测 | 第35-36页 |
| 1．6 研究思路 | 第36-38页 |
| 参考文献 | 第38-44页 |
| 第二章 溶菌酶变性条件的研究 | 第44-58页 |
| 2．1 引言 | 第44-46页 |
| 2．2 实验材料 | 第46页 |
| 2．3 分析方法 | 第46-49页 |
| 2．3．1 溶菌酶活性的测定—F．I．P．法 | 第46-47页 |
| 2．3．2 溶菌酶自由巯基含量测定—DTNB法或Ellman's法 | 第47-48页 |
| 2．3．3 蛋白质含量的测定—考马斯亮蓝法 | 第48-49页 |
| 2．4 溶菌酶的变性 | 第49页 |
| 2．5 结果与讨论 | 第49-55页 |
| 2．5．1 变性液中DTT浓度的确定 | 第49-52页 |
| 2．5．1．1 不同浓度DTT对变性溶菌酶自由巯基数的影响 | 第49-50页 |
| 2．5．1．2 溶菌酶浓度对DTT还原二硫键作用的影响 | 第50-51页 |
| 2．5．1．3 DTT对溶菌酶稀释复性过程的影响 | 第51-52页 |
| 2．5．2 脲对溶菌酶的变性作用 | 第52-55页 |
| 2．5．2．1 无DTT时溶菌酶的脲变性 | 第52-53页 |
| 2．5．2．2 DTT存在下溶菌酶的脲变性 | 第53-54页 |
| 2．5．2．3 溶菌酶变性时间对其复性的影响 | 第54-55页 |
| 2．6 本章小结 | 第55-58页 |
| 第三章 溶菌酶在高浓度下的稀释、流加及体积排阻层析复性研究 | 第58-84页 |
| 3．1 引言 | 第58-60页 |
| 3．2 实验材料和方法 | 第60-62页 |
| 3．2．1 实验材料和仪器 | 第60页 |
| 3．2．2 溶菌酶的变性 | 第60页 |
| 3．2．3 复性缓冲液的配制 | 第60页 |
| 3．2．4 变性溶菌酶的稀释复性 | 第60页 |
| 3．2．5 流加操作方式的溶菌酶复性 | 第60-61页 |
| 3．2．6 体积排阻层析复性 | 第61页 |
| 3．2．7 SDS-PAGE | 第61页 |
| 3．2．8 酶活和蛋白质浓度的测定 | 第61页 |
| 3．2．9 疏水色谱和紫外光谱扫描分析重折叠的蛋白质 | 第61-62页 |
| 3．3 结果与讨论 | 第62-81页 |
| 3．3．1 稀释复性法 | 第62-66页 |
| 3．3．1．1 氧化还原环境（GSH／GSSG）对复性的影响 | 第62-63页 |
| 3．3．1．2 蛋白质初始浓度与稀释倍数对复性的影响 | 第63-64页 |
| 3．3．1．3 脲对低浓度和高浓度溶菌酶复性的影响 | 第64-66页 |
| 3．3．2 流加变性酶操作方式的稀释复性 | 第66-69页 |
| 3．3．2．1 复性液中加入天然溶菌酶对变性酶折叠的影响 | 第66页 |
| 3．3．2．2 脲对流加变性酶折叠复性的影响 | 第66-67页 |
| 3．3．2．3 高浓度下流加变性酶的折叠复性 | 第67-68页 |
| 3．3．2．4 流加变性酶次数对折叠复性的影响 | 第68-69页 |
| 3．3．2．5 分批和流加两种操作方式的复性效果比较 | 第69页 |
| 3．3．3 体积排阻层析复性溶菌酶 | 第69-81页 |
| 3．3．3．1 体积排阻层析复性蛋白质的机理和实验操作 | 第69-71页 |
| 3．3．3．2 凝胶介质及柱高的选择 | 第71-72页 |
| 3．3．3．3 GSSG／GSH和脲浓度对溶菌酶复性的影响 | 第72-73页 |
| 3．3．3．4 流速对溶菌酶复性的影响 | 第73-74页 |
| 3．3．3．5 上样量对溶菌酶复性的影响 | 第74-76页 |
| 3．3．3．6 SEC复性溶菌酶的连续操作 | 第76页 |
| 3．3．3．7 溶菌酶复性方法的比较 | 第76-78页 |
| 3．3．3．8 再折叠溶菌酶的结构特性分析 | 第78-81页 |
| 3．4 本章小结 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-84页 |
| 第四章 溶菌酶复性动力学及脲促进复性的机理研究 | 第84-101页 |
| 4．1 引言 | 第84-86页 |
| 4．2 溶菌酶复性动力学研究 | 第86-96页 |
| 4．2．1 溶菌酶折叠复性的实验结果 | 第86页 |
| 4．2．2 动力学模型的提出 | 第86-88页 |
| 4．2．3 动力学模型的求解 | 第88-89页 |
| 4．2．4 实验结果与动力学模型分析 | 第89-94页 |
| 4．2．4．1 数据拟合及求解动力学常数 | 第89-91页 |
| 4．2．4．2 脲对动力学常数k_2、k_3比值及活性收率的影响 | 第91页 |
| 4．2．4．3 脲与动力学常数k_2、k_3值的关系 | 第91-92页 |
| 4．2．4．4 折叠复性收率的预测及复性条件的优化 | 第92-94页 |
| 4．2．5 脲促进SEC复性溶菌酶的机理 | 第94-96页 |
| 4．2．5．1 层析折叠过程溶菌酶表观斯托克斯半径的求算 | 第94-95页 |
| 4．2．5．2 脲对溶菌酶表观斯托克斯半径的影响与促进折叠 | 第95-96页 |
| 4．3 本章小结 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-99页 |
| 附录 | 第99-101页 |
| 第五章 重组人干扰素-γ包涵体的复性研究 | 第101-133页 |
| 5．1 引言 | 第101-104页 |
| 5．2 实验材料和方法 | 第104-108页 |
| 5．2．1 实验材料和仪器 | 第104页 |
| 5．2．2 培养基和溶液的配制 | 第104-105页 |
| 5．2．3 实验方法 | 第105-108页 |
| 5．2．3．1 工程菌种的培养及摇瓶发酵 | 第105页 |
| 5．2．3．2 菌体收集与破碎 | 第105页 |
| 5．2．3．3 包涵体的洗涤与纯化 | 第105页 |
| 5．2．3．4 包涵体的变性溶解 | 第105-106页 |
| 5．2．3．5 变性IFN-γ的稀释和SEC法复性 | 第106页 |
| 5．2．3．6 游离分子伴侣复性IFN-γ | 第106页 |
| 5．2．3．7 固定化分子伴侣复性IFN-γ | 第106页 |
| 5．2．3．8 再折叠IFN-γ的活性测定—细胞致病效应抑制微量测定法 | 第106-108页 |
| 5．3 结果与讨论 | 第108-130页 |
| 5．3．1 IFN-γ包涵体的发酵制备 | 第108-110页 |
| 5．3．1．1 工程菌种的生长曲线 | 第108页 |
| 5．3．1．2 目标蛋白IFN-γ表达为包涵体 | 第108-109页 |
| 5．3．1．3 升温诱导IFN-γ表达的时间 | 第109-110页 |
| 5．3．1．4 IFN-γ包涵体的释放和收集 | 第110页 |
| 5．3．2 IFN-γ包涵体的洗涤纯化 | 第110-117页 |
| 5．3．2．1 脲浓度对包涵体洗涤效果的影响 | 第111-112页 |
| 5．3．2．2 包涵体洗涤纯化的正交试验 | 第112-115页 |
| 5．3．2．3 Triton-X100和温度对包涵体的洗涤纯化作用 | 第115-116页 |
| 5．3．2．4 包涵体的洗涤时间 | 第116-117页 |
| 5．3．2．5 包涵体的变性溶解 | 第117页 |
| 5．3．3 IFN-γ的折叠复性 | 第117-122页 |
| 5．3．3．1 pH对IFN-γ复性的影响 | 第117-118页 |
| 5．3．3．2 SEC复性的同时对IFN-γ的纯化 | 第118-119页 |
| 5．3．3．3 脲对IFN-γ复性的影响 | 第119-120页 |
| 5．3．3．4 上样方式对IFN-γ复性的影响 | 第120-121页 |
| 5．3．3．5 IFN-γ包涵体的制备和复性工艺 | 第121-122页 |
| 5．3．4 新型分子伴侣协助IFN-γ体外折叠 | 第122-130页 |
| 5．3．4．1 小分子伴侣的Ni-NTA亲和层析 | 第122-124页 |
| 5．3．4．2 温度对游离分子伴侣协助IFN-γ复性的影响 | 第124-125页 |
| 5．3．4．3 脲对游离分子伴侣复性IFN-γ | 第125-126页 |
| 5．3．4．4 小分子伴侣与底物IFN-γ的摩尔比对复性的影响 | 第126页 |
| 5．3．4．5 固定化小分子伴侣实验装置的设计 | 第126-128页 |
| 5．3．4．6 固定化小分子伴侣复性IFN-γ | 第128-129页 |
| 5．3．4．7 固定化小分子伴侣的重复使用 | 第129-130页 |
| 5．4 本章小结 | 第130-131页 |
| 参考文献 | 第131-133页 |
| 第六章 结论与建议 | 第133-136页 |
| 6．1 结论 | 第133-134页 |
| 6．2 建议 | 第134-136页 |
| 致谢 | 第136-137页 |
| 作者简历 | 第137-138页 |
| 攻读博士学位期间发表论文情况 | 第138页 |
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