| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 略语表 | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第15-29页 |
| ·生物农药研究概况 | 第15-16页 |
| ·苏云金芽胞杆菌制剂概述 | 第16-18页 |
| ·苏云金芽胞杆菌简介 | 第16-17页 |
| ·苏云金芽胞杆菌制剂的发展 | 第17-18页 |
| ·苏云金芽胞杆菌制剂存在的问题 | 第18页 |
| ·线虫及棉铃虫概述 | 第18-20页 |
| ·秀丽隐杆线虫简介 | 第18-19页 |
| ·根结线虫简介 | 第19-20页 |
| ·棉铃虫简介 | 第20页 |
| ·几丁质酶研究概述 | 第20-23页 |
| ·几丁质酶的简介 | 第20-21页 |
| ·几丁质酶的应用 | 第21-23页 |
| ·酶的固定化 | 第23-24页 |
| ·纳米材料作为载体的应用 | 第24-25页 |
| ·细菌表面展示技术 | 第25-28页 |
| ·细菌表面展示技术简介 | 第25-27页 |
| ·细菌表面展示技术的应用 | 第27-28页 |
| ·研究目的及意义 | 第28-29页 |
| 2 实验材料和方法 | 第29-46页 |
| ·实验材料和仪器 | 第29-35页 |
| ·菌株及生测对象 | 第29-30页 |
| ·引物及质粒 | 第30-31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·所用试剂 | 第31-34页 |
| ·纳米SiO_2表面基团修饰 | 第31页 |
| ·几丁质酶的表达、纯化和SDS-PAGE | 第31-32页 |
| ·抽提质粒、制备感受态和质粒快检 | 第32-33页 |
| ·PCR、酶切、酶连、DNA回收和琼脂糖凝胶电泳 | 第33页 |
| ·几丁质酶活性测定试剂 | 第33页 |
| ·以棉铃虫为试虫的生物测定试剂 | 第33-34页 |
| ·以秀丽隐杆线虫为试虫的生物测定试剂 | 第34页 |
| ·免疫荧光观察所用试剂 | 第34页 |
| ·主要实验仪器 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-46页 |
| ·技术路线 | 第35页 |
| ·纳米SiO_2的改性及表征 | 第35-36页 |
| ·纳米的基团修饰 | 第35-36页 |
| ·傅里叶红外光谱测定 | 第36页 |
| ·纳米粒径及Zeta电位的测定 | 第36页 |
| ·扫描电镜观察 | 第36页 |
| ·几丁质酶的制备 | 第36-38页 |
| ·几丁质酶的表达与纯化 | 第36页 |
| ·几丁质酶的SDS-PAGE | 第36-37页 |
| ·几丁质酶比活力测定 | 第37-38页 |
| ·几丁质酶的固定化 | 第38-39页 |
| ·苏云金芽胞杆菌原粉的制备 | 第39-40页 |
| ·常规分子生物学操作技术 | 第40-42页 |
| ·PCR扩增突变50位氨基酸的chi9602基因片段 | 第40页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳及产物回收 | 第40-41页 |
| ·pMB334质粒的提取 | 第41页 |
| ·双酶切目的基因及pMB334质粒 | 第41页 |
| ·酶切产物的连接 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第42页 |
| ·质粒的快速检测 | 第42页 |
| ·苏云金芽胞杆菌YBT-881感受态制备及电转化 | 第42-43页 |
| ·免疫荧光显微观察 | 第43-44页 |
| ·表面展示免疫荧光显微镜观察 | 第43页 |
| ·线虫免疫荧光显微镜观察 | 第43-44页 |
| ·样品的生物测定 | 第44-46页 |
| ·测试样品对秀丽隐杆线虫的生物测定 | 第44页 |
| ·测试样品对南方根结线虫的生物测定 | 第44页 |
| ·测试样品对棉铃虫的生物测定 | 第44-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-75页 |
| ·纳米SiO_2表面基团的修饰与对几丁质酶的固定化 | 第46-54页 |
| ·纳米SiO_2表面基团与几丁质酶的结合 | 第46-48页 |
| ·几丁质酶的纯化 | 第48页 |
| ·基团化纳米SiO_2的红外光谱表征分析 | 第48-50页 |
| ·基团化纳米SiO_2及固定化几丁质酶的Zeta电位分析 | 第50-51页 |
| ·基团化纳米SiO_2的扫描电镜表征分析 | 第51-52页 |
| ·基团化纳米SiO_2的粒径分析 | 第52-53页 |
| ·基团化纳米SiO_2及其固定化酶悬浮状态观察 | 第53-54页 |
| ·几丁质酶的固定化分析 | 第54-59页 |
| ·几丁质酶固定化量及酶比活力分析 | 第54-56页 |
| ·纳米SiO_2-NH_2/Chi9602的酶学稳定性 | 第56-59页 |
| ·热稳定性 | 第56-57页 |
| ·pH稳定性 | 第57-58页 |
| ·抗紫外线稳定性 | 第58-59页 |
| ·纳米SiO_2-NH_2/Chi9602与Bt复配杀虫活性分析 | 第59-66页 |
| ·几丁质酶Chi9602与YBT-020复配杀线虫活性分析 | 第59-60页 |
| ·纳米固定化几丁质酶与Bt复配的杀虫活性 | 第60-62页 |
| ·纳米化几丁质酶与YBT-020复配杀虫时间分析 | 第62-63页 |
| ·固定化几丁质酶在线虫体内分布分析 | 第63-66页 |
| ·突变型几丁质酶Chi9602W50A与Bt复配混合物杀虫活性分析 | 第66-69页 |
| ·几丁质酶Chi9602W50A的表达纯化 | 第66页 |
| ·几丁质酶Chi9602W50A与YBT-020胞晶混合物复配杀线虫活性分析 | 第66-68页 |
| ·几丁质酶Chi9602W50A与YBT-1520胞晶混合物复配杀棉铃虫活性分析 | 第68-69页 |
| ·表面展示Chi9602W50A重组菌的构建与杀虫活性分析 | 第69-75页 |
| ·重组质粒的构建及几丁质酶Chi9602W50A的表面展示分析 | 第69-72页 |
| ·重组菌单独作用及与YBT-020复配对秀丽隐杆线虫活性分析 | 第72-74页 |
| ·表面展示几丁质酶重组菌对棉铃虫及南方根结线虫活性分析 | 第74-75页 |
| 4 讨论 | 第75-79页 |
| ·纳米SiO_2表面基团修饰状况 | 第75-76页 |
| ·基团化纳米SiO_2固定几丁质酶的性能 | 第76页 |
| ·纳米几丁质酶与Bt复配的杀虫效果 | 第76-77页 |
| ·几丁质酶Chi9602W50A与Bt复配的杀虫效果 | 第77-79页 |
| 5 结论 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 附录 | 第89页 |
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