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当前位置:教育论文中心首页--硕士论文--重组乳酸克鲁维酵母发酵制取牛凝乳酶
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重组乳酸克鲁维酵母发酵制取牛凝乳酶
 
     论文目录
 
摘要第8-10页
Abstract第10-12页
1 综述第13-23页
    1.1 凝乳酶研究进展第13-18页
        1.1.1 凝乳酶来源多样性第13-16页
        1.1.2 牛凝乳酶分子特性及凝乳机理第16-18页
    1.2 乳酸克鲁维酵母表达系统第18-21页
        1.2.1 乳酸克鲁维酵母表达系统优点第18页
        1.2.2 乳酸克鲁维酵母表达载体第18-19页
        1.2.3 高效表达外源蛋白策略第19-21页
    1.3 本研究的内容与意义第21-23页
        1.3.1 研究内容第21-22页
        1.3.2 意义第22-23页
2 材料与方法第23-36页
    2.1 实验材料第23-25页
        2.1.1 表达载体与菌株第23页
        2.1.2 主要工具酶与试剂第23-24页
        2.1.3 主要仪器与设备第24页
        2.1.4 主要培养基及配方第24-25页
        2.1.5 主要缓冲液及其组成第25页
        2.1.6 PCR引物第25页
        2.1.7 蛋白质电泳试剂第25页
    2.2 牛凝乳酶原基因表达第25-30页
        2.2.1 牛凝乳酶原基因合成第25-26页
        2.2.2 重组质粒Bchymo290-1的构建第26页
        2.2.3 线性化重组质粒制备第26页
        2.2.4 Klactis GG799感受态制备第26-27页
        2.2.5 电转化K. lactis GG799第27页
        2.2.6 重组子筛选第27页
        2.2.7 多拷贝重组酵母菌株的筛选及PCR鉴定第27-29页
        2.2.8 酶活性的测定第29页
        2.2.9 表达产物的SDS-PAGE电泳检测第29-30页
    2.3 发酵培养基优化第30-32页
        2.3.1 Plackett-Burman设计第30-31页
        2.3.2 最陡爬坡实验第31页
        2.3.3 Box-Behnken设计第31页
        2.3.4 模型验证第31-32页
    2.4 重组菌株发酵工艺优化与5L发酵罐高密度发酵第32-34页
        2.4.1 1L四联体发酵罐发酵培养第32页
        2.4.2 菌体浓度的测定第32页
        2.4.3 还原糖测定第32-33页
        2.4.4 pH对重组乳酸克鲁维酵母发酵的影响第33页
        2.4.5 溶氧浓度对重组乳酸克鲁维酵母发酵的影响第33页
        2.4.6 5L发酵罐高密度发酵第33-34页
    2.5 粗酶制剂的制取与活性测定第34-36页
        2.5.1 粗酶液制备第34页
        2.5.2 超滤法纯化第34-35页
        2.5.3 SDS-PAGE凝胶电泳检测第35页
        2.5.4 粗酶制剂活性测定第35-36页
3 结果与分析第36-52页
    3.1 牛凝乳酶原基因的合成第36页
    3.2 表达载体Bchymo290-1的构建第36-38页
    3.3 重组菌株构建、筛选及多拷贝整合重组菌株的鉴定第38-39页
    3.4 重组菌株生物量及产酶活性测定第39-40页
    3.5 重组菌株表达产物的SDS-PAGE电泳分析第40-41页
    3.6 Plackett-Burman实验第41-42页
    3.7 最陡爬坡实验第42-43页
    3.8 Box-Behnken设计优化培养基第43-46页
    3.9 回归模型验证第46页
    3.10 不同pH对发酵产牛凝乳酶的影响第46-48页
    3.11 不同DO值对发酵产牛凝乳酶的影响第48-49页
    3.12 5L发酵系统发酵产重组牛凝乳酶第49-50页
    3.13 粗酶制剂的制取与活性测定第50-52页
4 结论与讨论第52-57页
    4.1 结论第52-53页
        4.1.1 高效表达重组牛凝乳酶工程菌株的构建及筛选第52页
        4.1.2 重组菌株发酵培养基优化第52页
        4.1.3 重组菌株发酵工艺条件的优化及高密度发酵第52-53页
        4.1.4 重组牛凝乳酶的纯化及粗酶制剂的制取第53页
    4.2 讨论第53-55页
    4.3 创新点与展望第55-57页
参考文献第57-63页
附录第63-64页
    攻读学位期间获得的科研成果第63-64页
致谢第64页

 
 
论文编号BS2462191,这篇论文共64
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