| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-18页 |
| 1.1 γ-氨基丁酸概述 | 第8-10页 |
| 1.1.1 GABA理化性质 | 第8页 |
| 1.1.2 GABA的生理功能和应用 | 第8-9页 |
| 1.1.3 GABA制备方法 | 第9-10页 |
| 1.2 谷氨酸脱羧酶的概况 | 第10-13页 |
| 1.2.1 GAD的来源和功能 | 第10页 |
| 1.2.2 GAD的酶学性质 | 第10-11页 |
| 1.2.3 GAD生物催化合成 GABA | 第11页 |
| 1.2.4 GAD的空间结构和功能 | 第11-13页 |
| 1.3 酶的分子改造技术研究进展 | 第13-15页 |
| 1.3.1 理性设计 | 第13-14页 |
| 1.3.2 非理性设计 | 第14-15页 |
| 1.3.3 半理性设计 | 第15页 |
| 1.4 本论文的研究背景和意义 | 第15-17页 |
| 1.5 本论文的研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第18-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-23页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第18页 |
| 2.1.2 实验菌株、质粒以及引物 | 第18-21页 |
| 2.1.3 培养基的配制 | 第21-22页 |
| 2.1.4 缓冲液的配制 | 第22页 |
| 2.1.5 实验试剂、工具酶以及试剂盒 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-30页 |
| 2.2.1 分子生物学操作方法 | 第23-24页 |
| 2.2.2 重组质粒和菌株的构建 | 第24-26页 |
| 2.2.3 gadB1 的定点突变 | 第26页 |
| 2.2.4 gadB1 的随机突变 | 第26-27页 |
| 2.2.5 GadB1的表达和纯化 | 第27页 |
| 2.2.6 GadB1的酶学性质分析 | 第27-28页 |
| 2.2.7 C. glutamicum工程菌的摇瓶发酵 | 第28-29页 |
| 2.2.8 C. glutamicum工程菌的 3 L发酵罐发酵 | 第29页 |
| 2.2.9 生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第30-53页 |
| 3.1 L. brevis GadB1的表达、纯化和酶学性质 | 第30-35页 |
| 3.1.1 gadB1 的扩增和 E. coli BL21(DE3)/pET28a-gadB1 的构建 | 第30-31页 |
| 3.1.2 E. coli BL21 (DE3)/pET28a-gadB1的表达和纯化 | 第31-32页 |
| 3.1.3 GadB1的酶学性质 | 第32-35页 |
| 3.2 gadB1 的分子改造 | 第35-47页 |
| 3.2.1 gadB1 的定点突变 | 第35-40页 |
| 3.2.2 gadB1 的易错 PCR法随机突变 | 第40-43页 |
| 3.2.3 随机突变体 GadB1M2相关单点突变 | 第43-44页 |
| 3.2.4 有益突变位点的组合及三个正突变体的酶学性质 | 第44-46页 |
| 3.2.5 GadB1和 GadB1M3在 pH 6.0下催化能力比较 | 第46-47页 |
| 3.3 C. glutamicum工程菌的构建和发酵生物合成 GABA | 第47-53页 |
| 3.3.1 重组 C. glutamicum菌株的构建 | 第47页 |
| 3.3.2 C. glutamicum工程菌摇瓶发酵 | 第47-50页 |
| 3.3.3 C. glutamicum工程菌的 3 L发酵罐发酵 | 第50-53页 |
| 主要结论与展望 | 第53-55页 |
| 主要结论 | 第53-54页 |
| 展望 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第60页 |
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