| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-28页 |
| 1 TOLL 样受体的研究进展 | 第13-26页 |
| 1.1 TOLL 样受体的发现及研究 | 第13-15页 |
| 1.1.1 鱼类 TLR 的发现及研究 | 第14-15页 |
| 1.2 TOLL 样受体的结构和功能 | 第15-16页 |
| 1.3 TOLL 样受体的的分布 | 第16-18页 |
| 1.4 TOLL 样受体的的分类 | 第18-19页 |
| 1.5 TLR 家族成员简介 | 第19-22页 |
| 1.5.1 TLR2 | 第19页 |
| 1.5.2 TLR3 | 第19-20页 |
| 1.5.3 TLR4 | 第20-21页 |
| 1.5.4 TLR5 | 第21页 |
| 1.5.5 TLR9 | 第21-22页 |
| 1.5.6 TLR1、TLR6 和 TLR10 | 第22页 |
| 1.6 TLR 的信号转导机制 | 第22-26页 |
| 1.6.1 MyD88 依赖性信号途径 | 第23页 |
| 1.6.2 MyD88 非依赖性信号途径 | 第23-24页 |
| 1.6.3 鱼类的信号转导途径 | 第24-26页 |
| 2 本项研究的目的与意义 | 第26-28页 |
| 第二章 大菱鲆 TLR3 基因的克隆和序列分析 | 第28-58页 |
| 1 实验材料 | 第28-31页 |
| 1.1 实验鱼、菌株及质粒载体 | 第28页 |
| 1.2 主要仪器与设备 | 第28-29页 |
| 1.3 主要试剂及溶液配制 | 第29-31页 |
| 1.3.1 主要试剂 | 第29-30页 |
| 1.3.2 溶液的配制 | 第30-31页 |
| 2 实验方法 | 第31-42页 |
| 2.1 大菱鲆组织的获取 | 第31页 |
| 2.2 总 RNA 的提取及质量检测 | 第31-32页 |
| 2.3 cDNA 第一链的合成 | 第32-33页 |
| 2.4 大菱鲆 TLR3 全长 cDNA 克隆 | 第33-40页 |
| 2.4.1 核心片段的克隆及测序 | 第33-37页 |
| 2.4.1.1 简拼引物的设计 | 第33-34页 |
| 2.4.1.2 核心片段 PCR 反应 | 第34页 |
| 2.4.1.3 电泳检测 | 第34页 |
| 2.4.1.4 PCR 产物的回收 | 第34-35页 |
| 2.4.1.5 胶回收的 DNA 片段与载体的连接 | 第35页 |
| 2.4.1.6 感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| 2.4.1.7 连接产物的转化 | 第36页 |
| 2.4.1.8 阳性克隆的鉴定 | 第36-37页 |
| 2.4.1.9 核心片段序列分析 | 第37页 |
| 2.4.2 3’-RACE 和 5’-RACE 片段的克隆及测序 | 第37-39页 |
| 2.4.2.1 引物设计 | 第37-38页 |
| 2.4.2.2 3’-RACE 片段的克隆及测序 | 第38页 |
| 2.4.2.3 5’-RACE 片段的克隆及测序 | 第38-39页 |
| 2.4.3 全长 cDNA 序列的拼接 | 第39-40页 |
| 2.5 大菱鲆 TLR3 基因组 DNA 的克隆 | 第40-41页 |
| 2.5.1 引物设计 | 第40页 |
| 2.5.2 大菱鲆基因组 DNA 的提取 | 第40-41页 |
| 2.5.3 基因组 DNA 的克隆以及测序 | 第41页 |
| 2.6 序列结构分析与进化树的构建 | 第41-42页 |
| 3 结果分析 | 第42-53页 |
| 3.1 RNA 样品提取与质量检测 | 第42-43页 |
| 3.2 核心片段克隆及测序结果 | 第43-44页 |
| 3.3 3’-RACE 片段克隆及测序结果 | 第44-46页 |
| 3.4 5’-RACE 片段克隆及测序结果 | 第46页 |
| 3.5 全长 cDNA 序列拼接及分析 | 第46-47页 |
| 3.6 SmTLR3 cDNA 序列的分子特征 | 第47-49页 |
| 3.7 SmTLR3 基因组 DNA 克隆及基因结构特征 | 第49-50页 |
| 3.8 SmTLR3 基因组的启动子结构特征 | 第50-52页 |
| 3.9 SmTLR3 系统进化的分析 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-58页 |
| 第三章 大菱鲆 TLR3 mRNAs的组织分布研究 | 第58-63页 |
| 1 实验材料 | 第58页 |
| 1.1 实验动物 | 第58页 |
| 1.2 主要仪器和设备 | 第58页 |
| 1.3 主要的试剂和溶液的配制 | 第58页 |
| 2 实验方法 | 第58-60页 |
| 2.1 大菱鲆的解剖和组织的获取 | 第58-59页 |
| 2.2 总 RNA 提取和质量检测 | 第59页 |
| 2.3 cDNA 第一链的合成 | 第59页 |
| 2.4 引物设计 | 第59-60页 |
| 2.5 qPCR 扩增与检测 | 第60页 |
| 3 结果分析 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 第四章 大菱鲆 TLR3 基因应对大菱鲆红体病病毒（TRBIV）和 PolyI:C刺激的表达分析 | 第63-69页 |
| 1 实验材料 | 第63-64页 |
| 1.1 实验动物和刺激物 | 第63页 |
| 1.2 主要仪器与设备 | 第63页 |
| 1.3 主要的试剂和溶液的配制 | 第63-64页 |
| 2 实验方法 | 第64-65页 |
| 2.1 TRBIV 及 PolyI:C 对大菱鲆鱼体的感染 | 第64页 |
| 2.2 模板的制备 | 第64页 |
| 2.3 qPCR 检测和分析 | 第64-65页 |
| 3 结果分析 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 个人简历 | 第80页 |
| 学术论文 | 第80-81页 |
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