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当前位置:教育论文中心首页--博士论文--高效乙醇发酵重组酿酒酵母菌株的构建及Sfi1p蛋白在生孢与核配过程中的功能研究
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高效乙醇发酵重组酿酒酵母菌株的构建及Sfi1p蛋白在生孢与核配过程中的功能研究
 
     论文目录
 
摘要第1-5页
ABSTRACT第5-11页
第一章 文献综述第11-44页
   ·生物燃料乙醇文献综述第11-32页
     ·国内外生产生物燃料乙醇概况第11-13页
     ·酿酒酵母菌株改造策略第13-19页
     ·浓醪发酵对菌体生理状态的影响及渗透压调节第19-28页
     ·酿酒酵母交配型第28-32页
   ·Sfi1p 文献综述第32-42页
     ·酿酒酵母纺锤体极体SPB第33-41页
     ·酿酒酵母纺锤体极体(SPB)蛋白组分Sfi1p第41-42页
   ·本文的研究背景、内容及目的第42-44页
第二章 实验材料及方法第44-71页
   ·实验材料第44-54页
     ·菌株、质粒与引物第44-48页
     ·主要仪器第48-49页
     ·主要试剂第49-50页
     ·培养基第50-52页
     ·主要溶液第52-54页
   ·实验方法第54-66页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化第54页
     ·小规模提取大肠杆菌质粒法(CTAB法)第54-55页
     ·酵母染色体的快速分离第55页
     ·PCR 扩增反应第55-56页
     ·DNA 的限制酶消化第56-57页
     ·DNA 的连接反应第57页
     ·DNA 的琼脂糖凝胶电泳第57-58页
     ·Klenow 酶补平失活酶切位点第58页
     ·酵母细胞的转化第58-59页
     ·酵母交配型的验证第59页
     ·不同交配型酵母细胞之间的杂交第59页
     ·HO 质粒构建二倍体细胞第59-60页
     ·一步基因置换法第60-61页
     ·酵母等位基因分离及遗传分析第61-62页
     ·酵母EMS 诱变第62-63页
     ·酵母高效生孢法第63页
     ·孢子纯化方法第63页
     ·酵母细胞交配效率定量分析第63-64页
     ·DAPI 染色第64页
     ·蛋白质浓度的定量(Bio-Rad 方法)第64-65页
     ·玻璃珠法提取酿酒酵母总蛋白第65页
     ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶的制备第65-66页
     ·Western blot 蛋白免疫印记实验第66页
   ·发酵过程的准备及主要分析方法第66-71页
     ·发酵培养基制备第66-67页
     ·菌种扩大培养与接种第67页
     ·发酵条件第67-68页
     ·发酵样品的收集及细胞生长状态的测定第68页
     ·HPLC 测定发酵液中组分第68-70页
     ·美兰(次甲基蓝)染色法测定活细胞浓度第70-71页
第三章 过表达甘油同向转运体基因菌株的构建及发酵特性分析第71-92页
   ·概述第71页
   ·质粒的构建第71-75页
     ·pUC18-RYUR 载体的修饰以及PGK1 启动子的连接第71-73页
     ·质粒pUC18-RYUR-PGK1p-STL1 的构建第73页
     ·质粒pUC18-RYUR-PGK1p-GUP1 的构建第73-74页
     ·质粒pUC18-RYUR-PGK1p-GUP2 的构建第74-75页
   ·过量表达甘油主动转运因子的菌株构建第75-77页
   ·出发菌株S812 的生长情况以及发酵性分析第77-82页
     ·2% 葡萄糖浓度下出发菌株的生长以及乙醇转化率第78-79页
     ·URA3 基因对菌株生长的影响第79页
     ·11% 葡萄糖浓度下出发菌株的发酵性能第79-80页
     ·20% 葡萄糖浓度下出发菌株的生长以及乙醇转化率第80-82页
   ·在培养基中添加甘油对菌株抗高渗胁迫能力的影响第82-84页
     ·添加甘油之后的效果第82-84页
     ·甘油最佳添加剂量的确定第84页
   ·过量表达GUP1、GUP2、STL1 对菌株发酵性能的影响第84-90页
     ·过量表达编码甘油转运因子的STL1 菌株的发酵性能第84-88页
     ·过量表达GUP1、GUP2 对菌株发酵性能的影响第88-90页
   ·本章小结第90-92页
第四章 化学诱变及有性重组技术改造酿酒酵母菌株乙醇发酵特性的研究第92-108页
   ·概述第92-93页
   ·质粒以及二倍体菌株中STE2 基因缺失菌株的构建第93-97页
     ·pUC18-STE2-URA3 质粒构建第93-94页
     ·STE2 基因缺失菌株的构建以及表型验证第94-97页
   ·最佳EMS 诱变剂量确定第97页
   ·突变文库的构建第97-98页
   ·有性重组介导的基因组重排第98-100页
     ·二倍体生孢条件的优化第98-99页
     ·孢子纯化第99-100页
   ·高糖高温条件下筛选优势菌株第100-106页
     ·优势菌株的富集第100-101页
     ·富集后菌株的初筛第101-102页
     ·初筛后优势菌株的复筛第102-106页
   ·重排菌株的交配型分析第106-107页
   ·本章小结第107-108页
第五章 Sfi1p 在核配和生孢过程中作用的研究第108-124页
   ·概述第108页
   ·Sfi1p 突变对生孢过程的影响第108-116页
     ·生孢条件第108页
     ·生孢效率以及孢子组成分析第108-110页
     ·生孢过程荧光显微观察第110-115页
     ·western blot 验证突变体中Sfi1p 的表达量第115-116页
   ·Sfi1p 突变对核配的影响第116-122页
     ·本实验用到的菌株第117-118页
     ·交配效率分析第118-121页
     ·交配过程中微管走向及核的迁移第121-122页
   ·本章小结第122-124页
第六章 总结与展望第124-127页
   ·主要工作总结第124-125页
   ·相关工作展望第125-127页
参考文献第127-140页
攻读博士学位期间发表的论文和参加科研情况第140-141页
附录1 生化名词缩写第141-142页
附录2 基因及其相应编码产物第142-143页
附录3 Sfi1p 温度敏感突变信息第143-145页
致谢第145页

 
 
论文编号BS192,这篇论文共145
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