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当前位置:教育论文中心首页--硕士论文--猪流行性腹泻病毒传统毒株和变异毒株PCR鉴别诊断方法的建立与应用
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猪流行性腹泻病毒传统毒株和变异毒株PCR鉴别诊断方法的建立与应用
 
     论文目录
 
摘要第8-10页
ABSTRACT第10-11页
第一章 猪流行性腹泻病毒研究进展第12-32页
    1 病原概述第12-16页
        1.1 病毒分类第12-13页
        1.2 形态结构第13页
        1.3 理化特性第13页
        1.4 细胞培养特性第13-14页
        1.5 病毒蛋白与功能第14-16页
            1.5.1 复制酶多聚蛋白第14页
            1.5.2 ORF3蛋白第14-15页
            1.5.3 S蛋白第15页
            1.5.4 M蛋白第15页
            1.5.5 E蛋白第15-16页
            1.5.6 N蛋白第16页
    2 流行病学第16-17页
    3 临床症状及病理变化第17页
    4 诊断第17-21页
        4.1 病毒分离与鉴定第17-18页
        4.2 PCR方法第18-19页
            4.2.1 RT-PCR第18页
            4.2.2 荧光定量PCR第18页
            4.2.3 环介导恒温扩增第18-19页
        4.3 微量血清中和试验第19页
        4.4 免疫电镜法第19页
        4.5 免疫组化技术第19页
        4.6 免疫荧光技术第19-20页
        4.7 酶联免疫吸附试验(ELISA法)第20-21页
            4.7.1 双抗体夹心ELISA第20页
            4.7.2 竞争阻断ELISA第20页
            4.7.3 间接ELISA第20页
            4.7.4 斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)第20-21页
    5 防控第21页
        5.1 加强词养管理第21页
        5.2 返饲治疗第21页
        5.3 抗体治疗第21页
    6 疫苗研究第21-24页
        6.1 PED灭活疫苗第22页
        6.2 PED弱毒苗第22页
        6.3 乳酸杆菌疫苗第22-23页
        6.4 转基因植物疫苗第23-24页
    参考文献第24-32页
第二章 荧光定量PCR的研究进展第32-36页
    1 荧光定量PCR的原理第32页
    2 荧光定量PCR的分类第32-34页
        2.1 水解探针法第33-34页
        2.2 荧光染料法第34页
    3 实时荧光定量PCR技术在动物疫病诊断上的应用第34-35页
    参考文献第35-36页
第三章 PEDV传统毒株和变异毒株PCR鉴别检测方法的建立第36-56页
    1 材料和方法第37-44页
        1.1 病料与毒株第37页
        1.2 试剂及仪器第37页
        1.3 引物和探针第37-38页
        1.4 变异毒株和传统毒株阳性模板的制备第38-42页
            1.4.1 病料处理及RNA提取第38-39页
            1.4.2 反转录第39页
            1.4.3 PCR扩增第39-40页
            1.4.4 核酸胶回收第40页
            1.4.5 重组质粒的构建第40-41页
            1.4.6 感受态的制备与转化第41页
            1.4.7 重组质粒的鉴定第41-42页
        1.5 Real-time PCR方法的建立第42-43页
            1.5.1 Real-time PCR体系优化第42页
            1.5.2 Real-time PCR特异性试验第42-43页
            1.5.3 Real-time PCR敏感性试验及标准曲线建立第43页
            1.5.4 Real-time PCR重复性试验第43页
        1.6 常规RT-PCR方法建立第43-44页
            1.6.1 常规RT-PCR方法优化第43页
            1.6.2 常规RT-PCR特异性试验第43页
            1.6.3 常规RT-PCR敏感性试验第43页
            1.6.4 常规RT-PCR重复性试验第43-44页
    2 实验结果第44-52页
        2.1 阳性模板的制备第44-45页
            2.1.1 目的片段的扩增第44页
            2.1.2 重组质粒鉴定第44-45页
            2.1.3 质粒的稀释第45页
        2.2 Real-time PCR方法的建立第45-50页
            2.2.1 最佳反应条件第45页
            2.2.2 Real-time PCR特异性试验第45-47页
            2.2.3 Real-time PCR敏感性试验及标准曲线的建立第47-48页
            2.2.4 Real-time PCR重复性试验第48-50页
        2.3 常规RT-PCR方法的建立第50-52页
            2.3.1 常规RT-PCR方法优化第50页
            2.3.2 常规RT-PCR特异性试验第50-51页
            2.3.3 常规RT-PCR敏感性试验第51页
            2.3.4 常规RT-PCR重复性试验第51-52页
    3 讨论第52-54页
    参考文献第54-56页
第四章 两种PCR方法的临床应用第56-64页
    1 材料与方法第56-59页
        1.1 病料第56页
        1.2 试剂和仪器第56页
        1.3 病料处理及RNA的提取第56-57页
        1.4 RNA反转录第57页
        1.5 常规RT-PCR检测病料第57-58页
        1.6 real-time PCR检测病料第58页
        1.7 两种PCR检测方法结果对比分析第58-59页
    2 实验结果第59-61页
        2.1 常规RT-PCR检测结果第59页
        2.2 Real-time PCR检测结果第59-60页
        2.3 两种检测方法结果对比第60-61页
    3 讨论第61-62页
    参考文献第62-64页
全文总结第64-66页
致谢第66页

 
 
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