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当前位置:教育论文中心首页--博士论文--猪HOXA10基因的表达调控研究及激素诱导型启动子转基因小鼠与猪的制备与鉴定
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猪HOXA10基因的表达调控研究及激素诱导型启动子转基因小鼠与猪的制备与鉴定
 
     论文目录
 
摘要第1-13页
Abstract第13-15页
缩略词表(Abbreviations)第15-17页
主要繁殖性状的中英文对照和缩略词第17-18页
1 前言第18-44页
   ·研究问题的由来第18-19页
   ·文献综述第19-43页
     ·影响猪产仔数的主要组分性状及猪子宫内膜结构第19-21页
       ·猪子宫内膜结构第19页
       ·影响猪产仔数的主要组分性状第19-21页
     ·胚胎早期发育与胚胎附植第21-26页
       ·胚胎早期发育第21-22页
       ·母体妊娠识别与母胎免疫第22-23页
       ·实现胚胎附植的三个阶段第23-26页
     ·影响胚胎附植的相关基因HOXA10研究现状与不足第26-38页
       ·同源框基因(Homeobox,HOX)家族与雌性发育第27-28页
       ·HOXA10基因的结构与其在子宫内膜中的表达第28-29页
       ·HOXA10基因与雌性生殖相关的功能第29-32页
       ·HOXA10基因表达的调节因素第32-34页
       ·HOXA10基因对靶基因的调控第34-37页
       ·猪HOXA10基因研究进展第37-38页
     ·转基因动物应用的现状与不足第38-43页
       ·转基因猪应用的几个方面第39-40页
       ·利用转基因猪研究的基因表达调控与功能第40页
       ·利用转基因动物技术改良猪繁殖性状研究进展与不足第40页
       ·显微注射法制备转基因动物第40-41页
       ·转基因载体的构成第41-42页
       ·转基因重组载体启动子选择第42-43页
       ·转基因动物研究的不足与发展前景第43页
   ·本研究的目的第43-44页
2. 材料和方法第44-75页
   ·材料第44-54页
     ·组织样品第44页
     ·cDNA和DNA样品第44-45页
     ·细胞样品第45页
     ·载体及菌株第45-48页
     ·主要试剂配制与试剂盒第48-51页
       ·分子生物学主要试剂及引物合成与测序第48-49页
       ·细胞培养所用主要试剂第49页
       ·转基因动物检测用主要试剂配制第49-50页
       ·其它实验用生化试剂与配制第50-51页
       ·主要试剂盒第51页
     ·主要仪器与设备第51-52页
     ·主要分子生物学软件及数据库第52-54页
       ·主要生物学软件第52-53页
       ·主要数据库与网站第53-54页
   ·研究方法第54-75页
     ·本研究技术路线第54页
     ·目的基因的分离与克隆第54-56页
       ·目的基因cDNA的电子克隆第54-56页
       ·序列的同源性分析与鉴定第56页
       ·引物的设计第56页
       ·PCR扩增的条件第56页
     ·PCR产物的纯化回收和克隆测序第56-58页
     ·目的基因的分型与关联分析第58页
       ·PCR-RFLP方法检测目的基因多态位点第58页
       ·猪基因与性状关联分析第58页
     ·目的基因的组织表达谱分析第58-59页
       ·组织性RNA的提取第58-59页
       ·总RNA的完整性检测第59页
       ·总RNA的反转录第59页
       ·引物设计与扩增条件第59页
     ·目的基因在梅山和大白猪不同妊娠阶段子宫内膜中的定量表达分析第59-60页
       ·子宫内膜组织总RNA提取及cDNA的合成第59页
       ·SYBR green Real-time PCR的引物设计第59页
       ·SYBR green Real-time PCR的反应条件第59-60页
       ·定量PCR数据分析第60页
     ·孕激素诱导小鼠目的基因的表达检测与胚胎着床第60-61页
       ·妊娠小鼠的孕酮注射第60页
       ·小鼠子宫内膜胚胎着床数观测第60页
       ·小鼠子宫内膜获得第60-61页
       ·小鼠子宫内膜目的基因定量表达检测第61页
     ·目的基因启动子片段的克隆和预测第61-63页
       ·目的基因启动子片段的克隆第61页
       ·启动子的转录因子结合位点预测第61页
       ·猪HOXA10基因启动子报告基因载体构建第61-62页
       ·Ishikawa细胞培养、转染及雌激素刺激第62-63页
     ·目的基因雌激素诱导启动子重组载体构建及Ishikawa细胞验证第63-65页
       ·目的基因雌激素诱导启动子重组质粒构建第63-64页
       ·Ishikawa细胞转染与雌激素(E_2)和孕激素(P_4)处理第64页
       ·激素诱导后目的基因荧光定量表达分析第64-65页
     ·显微注射法制备激素诱导型转猪HOXA10基因小鼠第65-68页
       ·注射用DNA的制备及纯化第65页
       ·显微注射法制备转基因小鼠第65-68页
     ·转基因小鼠的检测第68-71页
       ·转基因小鼠基因组DNA制备第68-69页
       ·转基因小鼠的PCR鉴定第69页
       ·Southern杂交(同位素标记探针)鉴定转基因小鼠第69-71页
       ·转基因小鼠RT-PCR分析第71页
     ·激素诱导型转HOXA10基因猪的制备与鉴定第71-75页
       ·实验用猪的选择第71-72页
       ·供体母猪超数排卵第72页
       ·原核胚胎获取第72页
       ·显微注射第72页
       ·受体母猪胚胎移植第72-73页
       ·受体母猪妊娠与产仔第73页
       ·转基因猪的鉴定第73-75页
3. 结果第75-105页
   ·基因片段的分离,鉴定和序列分析第75-79页
     ·猪HOXA10基因的克隆与序列分析第75-76页
     ·猪HOXA10基因的多序列比对与分子系统进化树的构建第76-78页
     ·猪HOXA10基因核苷酸结构分析第78-79页
   ·猪HOXA10基因序列变异及其与性状的关联分析第79-83页
     ·猪HOXA10基因的SNP检测第79-82页
     ·猪HOXA10基因外显子PCR-RFLP-MslI多态与繁殖性状的关联分析第82-83页
   ·猪HOXA10基因组织表达检测第83-84页
   ·猪HOXA10基因在梅山和大白猪不同妊娠时期子宫内膜中表达研究第84-85页
   ·孕酮注射诱导小鼠子宫内膜HOXA10基因的表达及与胚胎着床数的关系研究第85-87页
     ·小鼠胚胎染色结果第85-86页
     ·荧光定量PCR检测小鼠子宫内膜HOXA10基因表达第86-87页
   ·猪HOXA10基因转录调控初步研究第87-92页
     ·猪HOXA10基因启动子克隆以及雌激素受体结合位点的预测第87-88页
     ·猪HOXA10基因启动子活性初步验证第88-89页
     ·猪HOXA10基囚系列删除载体构建及细胞验证第89-91页
     ·荧光素酶活性检测鉴定猪HOXA10基因雌激素诱导启动子片段第91-92页
   ·雌激素诱导启动子对猪HOXA10基因表达调控作用的细胞水平验证第92-94页
     ·猪HOXA10基因雌激素诱导启动子表达载体构建第92-93页
     ·Ishikawa细胞中鉴定雌激素诱导启动子对HOXA10基因表达的调控第93-94页
   ·激素诱导型HOXA10基因转基因小鼠及转基因猪的制备及检测第94-105页
     ·显微注射用DNA的纯化及检测第95页
     ·转HOXA10基因小鼠的鉴定及表达分析第95-101页
       ·转HOXA10基因首建小鼠(F_0代)的PCR鉴定第95-97页
       ·转基因小鼠的Southern blot检测第97-98页
       ·F_2代转HOXA10基因小鼠的表达分析第98-101页
     ·转基因猪的鉴定第101-105页
       ·转HOXA10基因猪的PCR鉴定第101-102页
       ·转HOXA10基因猪Southern杂交鉴定结果(地高辛标记法)第102-105页
4 讨论第105-120页
   ·关于选取HOXA10基因作为猪繁殖性状的候选基因第105页
   ·关于猪HOXA10基因的分离及结构分析第105-106页
   ·关于猪HOXA10基因的SNP及部分繁殖性状的关联第106-107页
   ·关于猪HOXA10基因的表达研究第107-115页
     ·关于猪HOXA10基因的组织表达分析第107页
     ·关于HOXA10基因在大白和梅山猪不同妊娠时期子宫内膜中的表达差异第107-115页
       ·关于引起猪产仔数差异的胚胎发育过程中的三个关键时期第108页
       ·关于不同妊娠时期大白猪和梅山猪子宫内膜中HOXA10基因的表达差异第108-109页
       ·HOXA10基因对妊娠过程中母体与胎儿的调控第109-113页
       ·关于猪HOXA10基因在子宫内膜组织中的表达第113页
       ·关于雌激素(E_2)和孕激素(P_4)对子宫内膜中HOXA10基因表达的影响第113-115页
   ·关于孕酮注射小鼠胚胎着床情况与HOXA10基因表达的研究第115-116页
   ·关于猪HOXA10基因启动子激素诱导的调控区域的研究第116-118页
   ·关于激素诱导型转基因动物的制备及鉴定第118-120页
     ·关于转基因载体的启动子第118页
     ·关于HOXA10转基因小鼠模型的建立第118-119页
     ·关于激素诱导型转HOXA10基因猪的制备第119页
     ·关于转基因动物的检测第119-120页
5 小结第120-123页
   ·本研究的主要结论第120-121页
   ·本研究的特色与创新点第121页
   ·值得进一步研究的问题第121-123页
参考文献第123-140页
攻读期间撰写论文题录第140-141页
致谢第141-142页

 
 
论文编号BS12343,这篇论文共142
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