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当前位置:教育论文中心首页--硕士论文--非洲爪蟾APRIL及犬LIGHT、HVEM的克隆、表达及生物学活性研究
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非洲爪蟾APRIL及犬LIGHT、HVEM的克隆、表达及生物学活性研究
 
     论文目录
 
摘要第1-4页
Abstract第4-6页
引言第6-11页
第一部分 文献综述第11-28页
 第一章 增殖诱导配体(APRIL)的研究进展第12-18页
   ·APRIL的发现及结构特点第12-13页
   ·APRIL的受体及结构特征第13页
   ·APRIL及其受体的组织细胞分布第13-14页
   ·APRIL及其受体的信号转导途径第14页
   ·APRIL的生物学功能第14-17页
     ·对B细胞的作用第15-16页
     ·对T细胞的作用第16页
     ·对其他细胞的作用第16页
     ·在自身免疫性疾病及恶性肿瘤中的作用第16-17页
   ·展望第17-18页
 第二章 LIGHT及其受体HVEM的研究进展第18-24页
   ·LIGHT结构特点及表达分布第18-19页
   ·LIGHT受体的结构特点及表达分布第19页
   ·LIGHT及其受体的生物学作用第19-22页
     ·对T淋巴细胞的共刺激作用第20页
     ·加强DC细胞介导的T细胞免疫第20页
     ·HVEM依赖的HSV1感染的阻断作用第20-21页
     ·对GVHD的影响第21页
     ·抗肿瘤效应与自身免疫疾病第21-22页
   ·LIGHT与受体介导的信号通路第22-23页
   ·展望第23-24页
 第三章 研究物种简介第24-28页
   ·非洲爪蟾简介第24页
     ·非洲爪蟾的分类及形态特征第24页
     ·非洲爪蟾的研究用途第24页
   ·非洲爪蟾的研究进展第24-26页
     ·在疾病动物模型中的研究及应用第24-25页
     ·在药物筛选方面的研究及应用第25页
     ·在发育生物学、基因功能研究、疾病治疗等领域的应用第25页
     ·非洲爪蟾APRIL基因研究进展第25-26页
   ·犬简介第26-28页
     ·犬分类及特征第26页
     ·犬的研究进展第26-27页
     ·犬LIGHT及其受体HVEM的研究进展第27-28页
第二部分 实验部分第28-64页
 第四章 非洲爪蟾增殖诱导配体(APRIL)的克隆、表达及生物学功能研究第29-48页
   ·实验材料第29-30页
     ·实验动物、质粒、菌种第29页
     ·试剂和耗材第29页
     ·主要实验仪器第29-30页
   ·实验方法第30-40页
     ·非洲爪蟾APRIL基因的克隆第30-34页
       ·脾脏细胞总RNA的提取第30页
       ·RT-PCR扩增X1APRIL中间片段第30-31页
       ·3'-RACE-Ready cDNA或5'-RACE-Ready cDNA合成第31页
       ·引物的设计第31-32页
       ·扩增X1APRIL基因的3’端和5’端第32-34页
       ·序列拼接及鉴定第34页
     ·生物信息学分析第34页
     ·real-time PCR检测APRIL的组织分布第34-35页
       ·各组织总RNA的提取第34页
       ·引物的设计第34-35页
       ·Real-time PCR第35页
       ·数据分析第35页
     ·重组表达载体pSUMO-XsAPRIL的构建第35-37页
       ·引物设计第35页
       ·PCR反应第35-36页
       ·DNA的酶切第36页
       ·磷酸化与去磷酸化第36-37页
       ·连接第37页
       ·连接产物转化第37页
         ·DH5α感受态细胞的制备第37页
         ·转化第37页
     ·SUMO-XsAPRIL在大肠杆菌中的表达与纯化第37-39页
       ·将测序正确的连接产物转化入表达菌第37-38页
       ·pSUMO-XsAPRIL的诱导表达第38页
       ·表达产物SUMO-XsAPRIL的纯化第38-39页
     ·Western Blot鉴定纯化的SUMO-XsAPRIL第39页
     ·重组蛋白的生物学活性检测第39-40页
       ·小鼠B、T淋巴细胞及非洲爪蟾淋巴细胞的分离第39页
       ·激光共聚焦检测SUMO-XsAPRIL与小鼠B细胞的结合第39-40页
       ·WST-8分别检测XsAPRIL对小鼠B淋巴细胞和非洲爪蟾淋巴细胞的作用第40页
   ·实验结果与分析第40-46页
     ·X1APRIL全长cDNA序列及推测的氨基酸序列第40-41页
     ·不同物种种相似性比较及系统进化树分析第41-42页
     ·Real-time PCR检测APRIL在各组织中的分布第42-43页
     ·重组表达载体SUMO-X1APRIL的构建、表达及纯化鉴定第43-44页
     ·重组蛋白SUMO-X1APRIL对小鼠B淋巴细胞的结合第44-45页
     ·XsAPRIL蛋白对小鼠B淋巴细胞和非洲爪蟾淋巴细胞的促增殖作用第45-46页
   ·讨论第46-48页
 第五章 犬LIGHT和受体HVEM的克隆、表达及其生物学活性研究第48-64页
   ·实验材料第48页
     ·实验动物、质粒和宿主菌第48页
     ·试剂和耗材第48页
     ·实验仪器第48页
   ·实验方法第48-54页
     ·犬LIGHT及其受体HVEM的克隆第48-50页
       ·从脾脏中提取总RNA及其逆转录第48页
       ·设计引物PCR扩增LIGHT和HVEM第48-50页
     ·生物信息学分析第50页
     ·荧光定量(Real-time)PCR检测LIGHT和HVEM的组织表达第50页
       ·各个组织总RNA的提取第50页
       ·QPCR引物设计第50页
       ·QPCR反应体系第50页
     ·LIGHT和HVEM表达载体的构建第50-53页
       ·引物设计第50-51页
       ·可溶区段的获得第51-52页
       ·DNA片段与载体的酶切第52页
       ·磷酸化与去磷酸化第52-53页
       ·连接第53页
       ·连接产物转化第53页
         ·DH5α感受态细胞的制备第53页
         ·转化第53页
     ·重组表达载体在大肠杆菌中的表达与纯化第53-54页
       ·将测序正确的连接产物分别转化入表达菌第53-54页
       ·重组表达载体的诱导表达第54页
     ·蛋白纯化及鉴定第54页
     ·重组蛋白dsLIGHT和dsHVEM结合犬T细胞表面第54页
       ·犬T淋巴细胞的分离第54页
       ·激光共聚焦检测dsLIGHT蛋白和dsHVEM蛋白与T细胞的结合第54页
     ·构建LIGHT及其受体HVEM相互作用的3D结合图第54页
   ·实验结果与分析第54-62页
     ·犬LIGHT及其HVEM的基因结构特点分析第54-56页
     ·氨基酸序列的同源比对第56-57页
     ·3D结构比对第57-58页
     ·荧光定量PCR鉴定基因在各组织中的表达量第58-60页
     ·重组蛋白的表达与纯化第60页
     ·重组蛋白与犬T淋巴细胞的结合第60-62页
     ·构建LIGHT及其受体HVEM相互作用的3D结合图第62页
   ·讨论第62-64页
全文总结第64-65页
参考文献第65-69页
附录:硕士在读期间研究成果第69-70页
致谢第70页

 
 
论文编号BS2061044,这篇论文共70
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