摘要 | 第1-4页 |
Abstract | 第4-6页 |
引言 | 第6-11页 |
第一部分 文献综述 | 第11-28页 |
第一章 增殖诱导配体(APRIL)的研究进展 | 第12-18页 |
·APRIL的发现及结构特点 | 第12-13页 |
·APRIL的受体及结构特征 | 第13页 |
·APRIL及其受体的组织细胞分布 | 第13-14页 |
·APRIL及其受体的信号转导途径 | 第14页 |
·APRIL的生物学功能 | 第14-17页 |
·对B细胞的作用 | 第15-16页 |
·对T细胞的作用 | 第16页 |
·对其他细胞的作用 | 第16页 |
·在自身免疫性疾病及恶性肿瘤中的作用 | 第16-17页 |
·展望 | 第17-18页 |
第二章 LIGHT及其受体HVEM的研究进展 | 第18-24页 |
·LIGHT结构特点及表达分布 | 第18-19页 |
·LIGHT受体的结构特点及表达分布 | 第19页 |
·LIGHT及其受体的生物学作用 | 第19-22页 |
·对T淋巴细胞的共刺激作用 | 第20页 |
·加强DC细胞介导的T细胞免疫 | 第20页 |
·HVEM依赖的HSV1感染的阻断作用 | 第20-21页 |
·对GVHD的影响 | 第21页 |
·抗肿瘤效应与自身免疫疾病 | 第21-22页 |
·LIGHT与受体介导的信号通路 | 第22-23页 |
·展望 | 第23-24页 |
第三章 研究物种简介 | 第24-28页 |
·非洲爪蟾简介 | 第24页 |
·非洲爪蟾的分类及形态特征 | 第24页 |
·非洲爪蟾的研究用途 | 第24页 |
·非洲爪蟾的研究进展 | 第24-26页 |
·在疾病动物模型中的研究及应用 | 第24-25页 |
·在药物筛选方面的研究及应用 | 第25页 |
·在发育生物学、基因功能研究、疾病治疗等领域的应用 | 第25页 |
·非洲爪蟾APRIL基因研究进展 | 第25-26页 |
·犬简介 | 第26-28页 |
·犬分类及特征 | 第26页 |
·犬的研究进展 | 第26-27页 |
·犬LIGHT及其受体HVEM的研究进展 | 第27-28页 |
第二部分 实验部分 | 第28-64页 |
第四章 非洲爪蟾增殖诱导配体(APRIL)的克隆、表达及生物学功能研究 | 第29-48页 |
·实验材料 | 第29-30页 |
·实验动物、质粒、菌种 | 第29页 |
·试剂和耗材 | 第29页 |
·主要实验仪器 | 第29-30页 |
·实验方法 | 第30-40页 |
·非洲爪蟾APRIL基因的克隆 | 第30-34页 |
·脾脏细胞总RNA的提取 | 第30页 |
·RT-PCR扩增X1APRIL中间片段 | 第30-31页 |
·3'-RACE-Ready cDNA或5'-RACE-Ready cDNA合成 | 第31页 |
·引物的设计 | 第31-32页 |
·扩增X1APRIL基因的3’端和5’端 | 第32-34页 |
·序列拼接及鉴定 | 第34页 |
·生物信息学分析 | 第34页 |
·real-time PCR检测APRIL的组织分布 | 第34-35页 |
·各组织总RNA的提取 | 第34页 |
·引物的设计 | 第34-35页 |
·Real-time PCR | 第35页 |
·数据分析 | 第35页 |
·重组表达载体pSUMO-XsAPRIL的构建 | 第35-37页 |
·引物设计 | 第35页 |
·PCR反应 | 第35-36页 |
·DNA的酶切 | 第36页 |
·磷酸化与去磷酸化 | 第36-37页 |
·连接 | 第37页 |
·连接产物转化 | 第37页 |
·DH5α感受态细胞的制备 | 第37页 |
·转化 | 第37页 |
·SUMO-XsAPRIL在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第37-39页 |
·将测序正确的连接产物转化入表达菌 | 第37-38页 |
·pSUMO-XsAPRIL的诱导表达 | 第38页 |
·表达产物SUMO-XsAPRIL的纯化 | 第38-39页 |
·Western Blot鉴定纯化的SUMO-XsAPRIL | 第39页 |
·重组蛋白的生物学活性检测 | 第39-40页 |
·小鼠B、T淋巴细胞及非洲爪蟾淋巴细胞的分离 | 第39页 |
·激光共聚焦检测SUMO-XsAPRIL与小鼠B细胞的结合 | 第39-40页 |
·WST-8分别检测XsAPRIL对小鼠B淋巴细胞和非洲爪蟾淋巴细胞的作用 | 第40页 |
·实验结果与分析 | 第40-46页 |
·X1APRIL全长cDNA序列及推测的氨基酸序列 | 第40-41页 |
·不同物种种相似性比较及系统进化树分析 | 第41-42页 |
·Real-time PCR检测APRIL在各组织中的分布 | 第42-43页 |
·重组表达载体SUMO-X1APRIL的构建、表达及纯化鉴定 | 第43-44页 |
·重组蛋白SUMO-X1APRIL对小鼠B淋巴细胞的结合 | 第44-45页 |
·XsAPRIL蛋白对小鼠B淋巴细胞和非洲爪蟾淋巴细胞的促增殖作用 | 第45-46页 |
·讨论 | 第46-48页 |
第五章 犬LIGHT和受体HVEM的克隆、表达及其生物学活性研究 | 第48-64页 |
·实验材料 | 第48页 |
·实验动物、质粒和宿主菌 | 第48页 |
·试剂和耗材 | 第48页 |
·实验仪器 | 第48页 |
·实验方法 | 第48-54页 |
·犬LIGHT及其受体HVEM的克隆 | 第48-50页 |
·从脾脏中提取总RNA及其逆转录 | 第48页 |
·设计引物PCR扩增LIGHT和HVEM | 第48-50页 |
·生物信息学分析 | 第50页 |
·荧光定量(Real-time)PCR检测LIGHT和HVEM的组织表达 | 第50页 |
·各个组织总RNA的提取 | 第50页 |
·QPCR引物设计 | 第50页 |
·QPCR反应体系 | 第50页 |
·LIGHT和HVEM表达载体的构建 | 第50-53页 |
·引物设计 | 第50-51页 |
·可溶区段的获得 | 第51-52页 |
·DNA片段与载体的酶切 | 第52页 |
·磷酸化与去磷酸化 | 第52-53页 |
·连接 | 第53页 |
·连接产物转化 | 第53页 |
·DH5α感受态细胞的制备 | 第53页 |
·转化 | 第53页 |
·重组表达载体在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第53-54页 |
·将测序正确的连接产物分别转化入表达菌 | 第53-54页 |
·重组表达载体的诱导表达 | 第54页 |
·蛋白纯化及鉴定 | 第54页 |
·重组蛋白dsLIGHT和dsHVEM结合犬T细胞表面 | 第54页 |
·犬T淋巴细胞的分离 | 第54页 |
·激光共聚焦检测dsLIGHT蛋白和dsHVEM蛋白与T细胞的结合 | 第54页 |
·构建LIGHT及其受体HVEM相互作用的3D结合图 | 第54页 |
·实验结果与分析 | 第54-62页 |
·犬LIGHT及其HVEM的基因结构特点分析 | 第54-56页 |
·氨基酸序列的同源比对 | 第56-57页 |
·3D结构比对 | 第57-58页 |
·荧光定量PCR鉴定基因在各组织中的表达量 | 第58-60页 |
·重组蛋白的表达与纯化 | 第60页 |
·重组蛋白与犬T淋巴细胞的结合 | 第60-62页 |
·构建LIGHT及其受体HVEM相互作用的3D结合图 | 第62页 |
·讨论 | 第62-64页 |
全文总结 | 第64-65页 |
参考文献 | 第65-69页 |
附录:硕士在读期间研究成果 | 第69-70页 |
致谢 | 第70页 |