| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 前言 | 第12-24页 |
| 1 假单胞菌属及其致病性 | 第12-13页 |
| 1.1 假单胞菌属 | 第12-13页 |
| 1.2 假单胞菌属的致病性 | 第13页 |
| 1.2.1 假单胞菌对动物的致病性 | 第13页 |
| 1.2.2 假单胞菌对植物的致病性 | 第13页 |
| 2 假单胞菌对秀丽隐杆线虫的致病作用 | 第13-16页 |
| 2.1 假单胞菌对秀丽隐杆线虫的致病作用模型 | 第14-16页 |
| 3 秀丽隐杆线虫的特点和应用 | 第16-18页 |
| 3.1 秀丽隐杆线虫的特点 | 第16-18页 |
| 3.2 秀丽隐杆线虫的应用 | 第18页 |
| 4 转座子概述 | 第18-22页 |
| 4.1 转座子的类型 | 第18-20页 |
| 4.2 转座相关技术 | 第20页 |
| 4.3 转座子技术的应用 | 第20-22页 |
| 5 本研究的目的及意义 | 第22-24页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第24-41页 |
| 1 实验材料 | 第24-28页 |
| 1.1 菌株、秀丽隐杆线虫、质粒和引物 | 第24-26页 |
| 1.2 培养基和溶液 | 第26-28页 |
| 1.2.1 培养基 | 第26页 |
| 1.2.2 溶液 | 第26-28页 |
| 2 实验仪器和试剂 | 第28-29页 |
| 2.1 仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 试剂及相关试剂盒 | 第29页 |
| 3 实验方法 | 第29-41页 |
| 3.1 细菌接合 | 第29-30页 |
| 3.2 转座子插入突变库的构建 | 第30-31页 |
| 3.3 线虫的培养(Stiemagle,2006) | 第31页 |
| 3.3.1 原代培养物复苏: | 第31页 |
| 3.3.2 传代培养: | 第31页 |
| 3.4 对秀丽隐杆线虫毒性减弱突变株的表型筛选 | 第31-32页 |
| 3.5 转座子侧翼序列的调取方法 | 第32-35页 |
| 3.5.1 TAIL-PCR | 第32-33页 |
| 3.5.2 半随机引物PCR | 第33-35页 |
| 3.6 质粒提取与浓缩 | 第35页 |
| 3.7 大肠杆菌感受态的制备与转化 | 第35-36页 |
| 3.7.1 大肠杆菌感受态的制备 | 第35-36页 |
| 3.7.2 转化 | 第36页 |
| 3.8 基因敲除 | 第36-37页 |
| 3.8.1 敲除载体的构建 | 第36页 |
| 3.8.2 基因敲除 | 第36-37页 |
| 3.9 回补载体及回补菌株构建 | 第37-38页 |
| 3.9.1 回补载体及回补菌株的构建 | 第37-38页 |
| 3.10 线虫的life span测定与生长曲线的绘制 | 第38页 |
| 3.10.1 实验准备 | 第38页 |
| 3.10.2 life span测定 | 第38页 |
| 3.11 菌株HYS野生型及敲除株粗酶的提取方法 | 第38-39页 |
| 3.12 TCA(三氯乙酸)沉淀法去蛋白 | 第39页 |
| 3.13 脂肪酸的检测方法 | 第39页 |
| 3.14 二元选择法 | 第39-41页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第41-63页 |
| 1 HYS转座子突变库的构建及减毒性状突变株的筛选 | 第41-43页 |
| 2 HYS减毒性状突变株转座子插入基因定位与分析 | 第43-46页 |
| 2.1 利用Tail-PCR对转座子插入基因进行定位与分析 | 第43-44页 |
| 2.2 利用半随机引物进行转座子插入位点的定位与分析 | 第44-45页 |
| 2.3 对筛选到的基因进行位置分析 | 第45-46页 |
| 2.3.1 基因enoyl-CoA hydratase上下游基因位置分析 | 第45-46页 |
| 2.3.2 基因NAD-dependent epimerase和基因polyketide cyclase位置关系分析 | 第46页 |
| 3 基因enoly-CoA hydratase对秀丽隐杆线虫毒性的影响 | 第46-51页 |
| 3.1 确定基因组上基因enoly-CoA hydratase的转录功能,对其进行转录检测 | 第47页 |
| 3.2 基因enoly-CoA hydratase影响菌株HYS对C.elegans的毒性作用 | 第47-51页 |
| 3.2.1 基因enoly-CoA hydratase的敲除株和回补菌株的PCR检测 | 第48-50页 |
| 3.2.2 利用基因enoly-CoA hydratase的敲除株和回补菌株对秀丽隐杆线虫进行毒性检测 | 第50-51页 |
| 4 探究基因enoly-CoA hydratase减弱菌株HYS对Celegans毒性的原因 | 第51-57页 |
| 4.1 探究基因所编码蛋白的功能 | 第51-53页 |
| 4.2 探究基因enoly-CoA hydratase与菌株HYS脂肪酸代谢的关系 | 第53-54页 |
| 4.3 探究基因enoly-CoA hydratase上下游序列的关系并推测其毒性作用功能 | 第54-57页 |
| 4.3.1 基因enoly-CoA hydratase所在基因簇与菌株HYS对秀丽隐杆线虫的毒性作用关系 | 第55页 |
| 4.3.2 基因AMP的敲除菌株与回补菌株的构建 | 第55-56页 |
| 4.3.3 判断基因AMP对秀丽隐杆线虫的毒性作用 | 第56-57页 |
| 5 基因NAD-dependent epimerase和polyketide cyclase与菌株HYS对秀丽隐杆线虫毒性作用的关系 | 第57-63页 |
| 5.1 分析两个基因的功能 | 第57-58页 |
| 5.2 分析基因簇上十个基因的共转录情况 | 第58-59页 |
| 5.3 基因簇上筛选到的与秀丽隐杆线虫减毒性状相关的突变株对应基因的分析与功能验证 | 第59-63页 |
| 第四章 总结与展望 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
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