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活细胞中AT1R、B1R和B2R高阶聚化的研究
 
     论文目录
 
摘要第3-4页
ABSTRACT第4-5页
一、前言第8-16页
    1 G 蛋白偶联受体的高阶聚化第8-10页
        1.1 GPCRS 的二聚化第8-9页
        1.2 GPCRS 的异源三聚化第9页
        1.3 GPCRs 二聚化及三聚化的病理生理学功能第9-10页
    2 AT_1R、B_1R 和 B_2R 系统第10-11页
    3 蛋白质-蛋白质相互作用的研究方法第11-15页
        3.1 SRET 技术第11-13页
        3.2 PCAs 与 RET 技术相结合第13-15页
    4 课题的目的意义及设计思路第15-16页
二、材料和方法第16-32页
    1 实验材料第16-18页
        1.1 质粒、菌株和细胞第16页
        1.2 生化试剂及试剂盒第16-17页
        1.3 主要试剂的制备第17-18页
        1.4 实验用主要仪器第18页
    2 实验方法第18-32页
        2.1 重构表达载体第18-24页
        2.2 培养细胞 HEK293T第24-25页
        2.3 细胞瞬时转染第25-27页
        2.4 BRET~1检测 AT_1R 与 B_1R 的异源二聚化第27-29页
        2.5 BiLC 验证 AT_1R/B_2R 以及 AT_1R/AT_2R 之间的相互作用第29-30页
        2.6 验证 AT_1R、B_1R 与 B_2R 之间的相互作用第30-32页
三、结果第32-51页
    1 表达载体的构建第32-43页
        1.1 重组质粒 NRlu-pcDNA3.124第32-33页
        1.2 重组质粒 CRlu-pcDNA3.125第33-35页
        1.3 重组质粒 NRlu-AT_1R-pcDNA3.127第35-37页
        1.4 重组质粒 CRlu-B_2R-pcDNA3.129第37-39页
        1.5 重组质粒 CRlu-AT_2R-pcDNA3.131第39-41页
        1.6 重组质粒 RLuc-AT_1R-pcDNA3.133第41-43页
    2 HEK293T 细胞的培养第43页
    3 转染 HEK293T 细胞第43-44页
    4 BRET1检测 AT_1R 与 B_1R 之间的相互作用第44-48页
        4.1 荧光和发光检测第44-45页
        4.2 BRET~1鉴定受体的异源二聚化第45-46页
        4.3 BRET~1饱和实验第46-47页
        4.4 BRET~1配体诱导实验第47-48页
    5 BiLC 验证 AT_1R/B_2R 和 AT_1R/AT_2R 之间的相互作用第48-49页
    6 SRET2验证 AT_1R、B_1R 与 B_2R 之间的相互作用第49-50页
        6.1 SRET~2鉴定实验第49页
        6.2 SRET~2饱和实验第49-50页
    7 BiLC+BRET 方法验证 AT_1R、B_1R 与 B_2R 之间的相互作用第50-51页
四、讨论第51-53页
    1 AT_1R/B_1R 的异源二聚化第51页
    2 双分子发光互补技术第51页
    3 AT_1R/B_1R/B_2R 的异源三聚化第51-53页
五、结论第53-54页
参考文献第54-58页
中英文符号对照表第58-59页
攻读学位期间发表的学术论文第59-60页
致谢第60页

 
 
论文编号BS3914994,这篇论文共60
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