摘要 | 第1-12页 |
ABSTRACT | 第12-15页 |
第1章 绪论 | 第15-31页 |
·土壤盐害对植物的影响 | 第15-16页 |
·植物根系的耐盐机理 | 第16-24页 |
·植物根系的结构与功能 | 第16页 |
·盐胁迫下植物根系形态结构的变化 | 第16-17页 |
·离子平衡调节 | 第17-18页 |
·渗透平衡调节 | 第18-20页 |
·氧化还原平衡调节 | 第20-21页 |
·植物根系响应盐胁迫的信号途径 | 第21-22页 |
·植物根系响应盐胁迫的转录因子 | 第22-24页 |
·全长cDNA文库构建技术 | 第24-26页 |
·CAPture法 | 第25页 |
·Oligo-capping法 | 第25页 |
·Cap-trapper法 | 第25-26页 |
·SMART法 | 第26页 |
·星星草的生物学特征 | 第26-27页 |
·星星草耐盐碱机制研究进展 | 第27-28页 |
·星星草耐盐碱生理机制研究进展 | 第27页 |
·星星草耐盐碱分子机制研究进展 | 第27-28页 |
·星星草蔗糖合成酶基因(Sucrose synthase, SS)基因及其与植物抗逆性的关系 | 第28页 |
·星星草光诱导蛋白(Light-induced protein 1-like, LIR1)基因及其与植物抗逆性的关系 | 第28-29页 |
·技术路线 | 第29页 |
·立题研究的目的与意义 | 第29-31页 |
第2章 盐碱地星星草根cDNA文库构建与初步分析 | 第31-46页 |
·实验材料 | 第31-33页 |
·植物材料 | 第31页 |
·酶和生化试剂 | 第31页 |
·主要试剂和培养基的配制 | 第31-32页 |
·主要仪器设备 | 第32页 |
·引物 | 第32-33页 |
·实验方法 | 第33-39页 |
·SMARTTMcDNA文库构建流程图 | 第33-34页 |
·星星草根部总RNA的提取 | 第34页 |
·星星草根部总RNA的纯化 | 第34-35页 |
·cDNA第一条链的合成 | 第35-36页 |
·cDNA第二条链的合成 | 第36页 |
·蛋白酶K消化以及cDNA纯化 | 第36-37页 |
·SfiⅠ酶切与cDNA分级分离 | 第37页 |
·连接 | 第37-38页 |
·电击转化 | 第38页 |
·文库滴度测定 | 第38页 |
·插入片段的PCR检测 | 第38-39页 |
·文库质量的初步检测 | 第39页 |
·结果与分析 | 第39-43页 |
·盐碱地星星草根系总RNA的提取及纯化 | 第39页 |
·双链cDNA的合成 | 第39-40页 |
·cDNA文库的鉴定 | 第40-41页 |
·插入片段检测 | 第41页 |
·测序结果初步分析 | 第41-43页 |
·讨论 | 第43-45页 |
·SMART技术的优越性 | 第43页 |
·文库转化率 | 第43页 |
·盐碱地星星草根SMART cDNA文库的构建策略 | 第43-44页 |
·文库结果的初步分析 | 第44-45页 |
·本章小结 | 第45-46页 |
第3章 星星草光诱导蛋白基因(Light induced protein 1-like,PtLIR1)的克隆与Na_2CO_3胁迫条件下的表达特性分析 | 第46-63页 |
·实验材料 | 第46-47页 |
·植物材料 | 第46页 |
·酶和生化试剂 | 第46页 |
·主要试剂和培养基的配制 | 第46-47页 |
·主要仪器设备 | 第47页 |
·引物 | 第47页 |
·星星草PtLIR1基因的克隆 | 第47-51页 |
·星星草总RNA的提取以及纯化 | 第47-48页 |
·星星草总RNA的反转录 | 第48页 |
·PtLIR1基因的PCR扩增 | 第48-49页 |
·星星草PtLIR1基因克隆载体pT-PtLIR1的构建 | 第49-51页 |
·Na_2CO_3胁迫条件下星星草PtLIR1基因的表达特性分析 | 第51-53页 |
·星星草总RNA的提取以及纯化 | 第51-52页 |
·星星草总RNA的反转录 | 第52页 |
·星星草内参基因PtTubulin与目的基因PtLIR1的PCR扩增 | 第52-53页 |
·数据处理 | 第53页 |
·结果与分析 | 第53-60页 |
·星星草PtLIR1基因的克隆 | 第53-56页 |
·星星草PtLIR1基因的半定量RT-PCR分析 | 第56-60页 |
·讨论 | 第60-61页 |
·星星草PtLIR1基因的克隆 | 第60页 |
·星星草PtLIR1基因表达的器官特异性 | 第60-61页 |
·星星草PtLIR1基因响应Na_2CO_3胁迫的表达特性 | 第61页 |
·本章小结 | 第61-63页 |
第4章 星星草光诱导蛋白基因PtLIR1的植物表达载体的构建 | 第63-77页 |
·实验材料 | 第63-64页 |
·菌株及载体 | 第63页 |
·酶及生化试剂 | 第63页 |
·主要试剂和培养基的配制 | 第63页 |
·主要仪器设备 | 第63页 |
·引物 | 第63-64页 |
·实验方法 | 第64-68页 |
·表达载体构建流程图 | 第64页 |
·星星草PtLIR1基因(non-stop)克隆载体pT-PtLIR1(non-stop)的构建 | 第64-66页 |
·pT-PtLIR1(non-stop)质粒的提取 | 第66页 |
·PtLIR1(non-stop)克隆载体的双酶切 | 第66页 |
·植物表达载体pGFP-35S的双酶切 | 第66页 |
·pT-PtLIR1(non-stop)与pGFP-35S酶切产物的胶回收 | 第66-67页 |
·PtLIR1(non-stop)基因片段与植物表达载体pGFP-35S的连接 | 第67页 |
·连接产物的转化 | 第67页 |
·阳性重组子的菌落PCR | 第67-68页 |
·阳性重组子的质粒提取 | 第68页 |
·阳性重组子的双酶切鉴定 | 第68页 |
·结果与分析 | 第68-75页 |
·PtLIR1(non-stop)基因克隆载体的构建 | 第68-70页 |
·pT-PtLIR1(non-stop)与pGFP-35S质粒的提取 | 第70-75页 |
·讨论 | 第75-76页 |
·绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP) | 第75-76页 |
·表达载体的构建策略 | 第76页 |
·本章小结 | 第76-77页 |
第5章 星星草蔗糖合成酶(Sucrose synthease,SS)基因与PtLIR1基因的协同性分析 | 第77-92页 |
·实验材料 | 第77-78页 |
·植物材料 | 第77页 |
·酶和生化试剂 | 第77页 |
·主要试剂的配制 | 第77-78页 |
·引物 | 第78页 |
·主要仪器设备 | 第78页 |
·实验方法 | 第78-82页 |
·Na_2CO_3胁迫条件下星星草PtSS基因的表达特性分析 | 第78-80页 |
·星星草可溶性糖含量的测定 | 第80-81页 |
·星星草蔗糖含量的测定 | 第81-82页 |
·结果分析与讨论 | 第82-91页 |
·星星草总RNA的提取 | 第82页 |
·半定量RT-PCR反应条件的优化 | 第82-83页 |
·星星草根PtSS基因对Na_2CO_3胁迫的响应 | 第83-84页 |
·Na_2CO_3胁迫条件下星星草根中可溶性糖和蔗糖含量的变化 | 第84-87页 |
·Na_2CO_3胁迫下PtLIR1基因的表达与可溶性糖和蔗糖含量的相关性. | 第87-89页 |
·Na_2CO_3胁迫下星星草根 PtLIR1 基因与 PtSS 基因对蔗糖积累的协同调节 | 第89-91页 |
·本章小结 | 第91-92页 |
结论 | 第92-94页 |
参考文献 | 第94-102页 |
攻读硕士学位期间所发表的学术论文 | 第102-103页 |
致谢 | 第103页 |