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当前位置:教育论文中心首页--硕士论文--蚓激酶工程菌的构建及发酵过程控制
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蚓激酶工程菌的构建及发酵过程控制
 
     论文目录
 
摘要第5-7页
ABSTRACT第7-9页
第1章 绪论第13-23页
    1.1 选题意义第13页
    1.2 血栓疾病及其防治第13-15页
    1.3 蚓激酶研究现状第15-17页
        1.3.1 蚓激酶简介第15页
        1.3.2 蚓激酶溶栓机制第15-16页
        1.3.3 蚓激酶的性质第16页
        1.3.4 蚓激酶的功能性开发及临床应用第16-17页
    1.4 乳酸克鲁维酵母表达系统概况第17-18页
        1.4.1 乳酸克鲁维酵母简介第17页
        1.4.2 乳酸克鲁维酵母外源蛋白表达系统第17-18页
    1.5 毕赤酵母表达系统概况第18-20页
        1.5.1 巴斯德毕赤酵母简介第18-19页
        1.5.2 毕赤酵母外源表达系统第19页
        1.5.3 毕赤酵母高密度发酵第19-20页
    1.6 蚓激酶基因工程研究进展第20-21页
        1.6.1 蚓激酶基因第20页
        1.6.2 蚓激酶的异源表达研究第20-21页
    1.7 研究目的及内容第21-23页
        1.7.1 研究目的第21页
        1.7.2 研究内容第21-23页
第2章 蚓激酶基因的克隆及分析第23-35页
    2.1 实验材料第23-25页
        2.1.1 蚯蚓样本第23页
        2.1.2 实验菌种及质粒载体第23页
        2.1.3 分子试剂第23页
        2.1.4 实验设备及药品第23-25页
        2.1.5 培养基及溶液第25页
    2.2 实验方法第25-28页
        2.2.1 蚯蚓样本处理第25页
        2.2.2 蚯蚓基因组的提取第25页
        2.2.3 蚯蚓18S基因序列的扩增第25-26页
        2.2.4 提取蚯蚓总RNA第26页
        2.2.5 蚓激酶cDNA单链的合成第26页
        2.2.6 蚓激酶基因的克隆第26-27页
        2.2.7 大肠杆菌JM109感受态细胞的制备第27页
        2.2.8 蚓激酶基因、18SrDNA与pMD18-T载体的连接与转化第27-28页
        2.2.9 阳性转化子的验证第28页
        2.2.10 18SrDNA及蚓激酶序列的生物信息学分析第28页
    2.3 结果与讨论第28-34页
        2.3.1 野生蚯蚓种属鉴定第28-29页
        2.3.2 蚯蚓总RNA的提取和蚓激酶基因的克隆第29-31页
        2.3.3 蚓激酶lks2基因序列分析第31-34页
    2.4 小结第34-35页
第3章 蚓激酶基因lks2在乳酸克鲁维酵母GG799中的表达第35-50页
    3.1 实验材料第35-37页
        3.1.1 菌种与质粒第35页
        3.1.2 实验药品与设备第35-36页
        3.1.3 培养基及溶液试剂第36-37页
    3.2 实验方法第37-41页
        3.2.1 pKLAC1质粒的提取第37页
        3.2.2 lks2基因的扩增第37-38页
        3.2.3 pKLAC1-lks2表达载体的构建第38页
        3.2.4 重组菌GG799-pKLAC1-lks2的构建第38-39页
        3.2.5 阳性转化子的筛选及验证第39-40页
        3.2.6 纤维蛋白平板的制作及尿激酶标准曲线的制备第40页
        3.2.7 重组菌GG799-pKLAC1-lks2的发酵验证第40页
        3.2.8 发酵液SDS-PAGE电泳分析第40页
        3.2.9 重组菌的培养基优化第40-41页
    3.3 结果与讨论第41-49页
        3.3.1 质粒pKLAC1的提取第41-42页
        3.3.2 重组质粒pKLAC1-lks2的构建第42-43页
        3.3.3 转化子的筛选和验证第43-44页
        3.3.4 尿激酶标准曲线第44页
        3.3.5 重组菌GG799-pKLAC1-lks2的发酵第44-45页
        3.3.6 发酵液SDS-PANG电泳分析第45-46页
        3.3.7 重组菌的培养基优化第46-49页
    3.4 小结第49-50页
第4章 蚓激酶基因lks2在巴斯德毕赤酵母GS115中的表达及发酵条件优化第50-61页
    4.1 实验材料第50-51页
        4.1.1 菌种和质粒第50页
        4.1.2 试剂第50页
        4.1.4 培养基与溶液试剂第50-51页
    4.2 实验方法第51-54页
        4.2.1 pPIC9K质粒的提取第51页
        4.2.2 lks2基因的扩增第51-52页
        4.2.3 pPIC9K-lks2表达载体的构建第52页
        4.2.4 重组菌GS115-pPIC9K-lks2的构建第52-53页
        4.2.5 阳性转化子的筛选及验证第53页
        4.2.6 重组菌GS115-pPIC9K-lks2的发酵及表达验证第53页
        4.2.7 重组菌GS115-pPIC9K-lks2摇瓶发酵条件优化第53-54页
    4.3 结果与讨论第54-60页
        4.3.1 质粒pPIC9K的提取及lks2基因的扩增第54-55页
        4.3.2 pPIC9K-lks2表达载体的构建第55页
        4.3.3 巴斯德毕赤酵母GS115感受态细胞的制备及转化第55-56页
        4.3.4 阳性转化子的筛选及传代第56-57页
        4.3.5 重组菌GS115-pPIC9K-lks2的发酵第57页
        4.3.6 重组菌GS115-pPIC9K-lks2的摇瓶发酵条件优化第57-60页
    4.4 小结第60-61页
第5章 毕赤酵母重组菌GS115-pPIC9K-lks2高密度发酵第61-70页
    5.1 实验材料第61-63页
        5.1.1 菌种第61页
        5.1.2 实验药品与设备第61-62页
        5.1.3 培养基及溶液试剂第62-63页
    5.2 实验方法第63-64页
        5.2.1 蛋白质标准曲线的制备第63页
        5.2.2 蚓激酶毕赤酵母重组菌高密度发酵第63页
        5.2.3 菌体初始浓度优化第63页
        5.2.4 添加酵母浸粉对产酶影响第63页
        5.2.5 高密度发酵SDS-PAGE分析第63页
        5.2.6 高密度发酵过程控制第63-64页
    5.3 结果与讨论第64-69页
        5.3.1 蛋白质标准曲线第64页
        5.3.2 菌体初始浓度优化第64-66页
        5.3.3 酵母浸粉添加量的优化第66-67页
        5.3.4 重组菌高密度发酵SDS-PAGE分析第67-68页
        5.3.5 高密度发酵过程控制第68-69页
    5.4 小结第69-70页
第6章 结论与展望第70-72页
    结论第70-71页
    展望第71-72页
参考文献第72-81页
攻读学位期间发表的学术论文第81-82页
致谢第82-83页

 
 
论文编号BS3907896,这篇论文共83
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