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强启动子枯草芽孢杆菌核黄素操纵子整合型载体的构建并在枯草芽孢杆菌中的表达
 
     论文目录
 
中文摘要第1-4页
ABSTRACT第4-8页
前言第8-9页
第一章 文献综述第9-26页
   ·核黄素的生产第9页
   ·产核黄素基因工程菌研究现状第9-10页
   ·B.subtilis产核黄素工程菌第10-12页
     ·B.subtilis核黄素操纵子结构第10-11页
     ·B.subtilis核黄素操纵子编码产物的功能第11-12页
     ·B.subtilis产核黄素工程菌的优点第12页
   ·B.subtilis 合成核黄素的代谢工程第12-17页
     ·代谢工程的基本原理第12-13页
     ·B.subtilis 合成核黄素的代谢分析第13-15页
     ·B.subtilis产核黄素工程菌构建思路第15-17页
   ·B.subtilis 中的同源重组第17-19页
     ·RecA蛋白的功能第17-18页
     ·同源重组的相关基因簇及表达产物第18-19页
   ·枯草芽孢杆菌中质粒的复制及稳定性第19-20页
   ·B.subtilis 整合型质粒第20-24页
     ·整合型质粒的原理第20-21页
     ·整合型质粒的用途第21-24页
     ·常见的枯草芽孢杆菌整合型质粒第24页
       ·克隆位点整合的质粒第24页
       ·定点整合的质粒第24页
   ·本文的主要研究内容第24-26页
第二章 实验材料和方法第26-41页
   ·实验材料第26-32页
     ·菌种和质粒第26-27页
     ·主要实验仪器第27页
     ·药品与试剂第27-30页
       ·主要药品第27-28页
       ·主要试剂第28-30页
     ·培养基第30-32页
   ·核黄素的发酵和测定方法第32-33页
     ·菌体生长曲线的测定第32页
     ·菌种的纯化和保藏第32页
     ·发酵初筛第32页
     ·发酵液中核黄素的测定第32-33页
   ·基因工程方法第33-41页
     ·原生质体转化第33-34页
       ·原生质体的制备第33页
       ·原生质体转化第33-34页
     ·Spizizen 转化第34页
     ·质粒的小规模提取第34页
     ·枯草芽孢杆菌质粒的大规模提取第34-35页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第35-36页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备第35-36页
       ·大肠杆菌的转化第36页
     ·革兰氏阳性菌染色体DNA的提取第36页
     ·用于转化和构建载体的DNA片段的制备第36-38页
       ·PCR 扩增recA 基因第36-37页
       ·PCR扩增核黄素操纵子第37页
       ·PCR 扩增ribA 结构基因第37-38页
     ·DNA 的酶切和连接第38-39页
       ·DNA的酶切第38页
       ·DNA的连接第38-39页
     ·DNA 片段的回收和纯化第39-41页
       ·琼脂糖凝胶中DNA片段的回收和纯化第39页
       ·水溶液中DNA片段的纯化和浓缩第39-41页
第三章 实验结果和讨论第41-55页
   ·受体菌的改造第42-44页
     ·recA基因的扩增及酶切鉴定第43页
     ·DNA片段的原生质体转化及recA+菌株的筛选第43-44页
   ·产核黄素整合型表达载体的构建第44-49页
     ·SPO2-rib 整合型表达载体的构建第45-46页
     ·P43-rib 整合型表达载体的构建第46-47页
     ·P1-rib(原启动子)产核黄素整合型表达载体的构建第47-49页
       ·PCR扩增枯草杆菌核黄素操纵子第48页
       ·整合型表达载体的构建第48-49页
   ·整合型表达载体在E.coli中的表达第49页
   ·整合型表载体在B.subtilis中的表达第49-52页
     ·质粒Spizizen法转化B.subtilis D3第50页
     ·转化子的整合方式和核黄素产量第50-52页
   ·ribA 基因载体的构建和表达第52-55页
     ·PCR扩增枯草杆菌ribA结构基因第52-53页
     ·克隆载体的构建第53-55页
第四章 结论第55-56页
参考文献第56-60页
附录第60-71页
 Ⅰ 生化名词缩写表第60-62页
 Ⅱ pUC86构建示意图第62-64页
 Ⅲ pUC83构建示意图第64-66页
 Ⅳ pDRI 构建示意图第66-67页
 Ⅴ pDRII构建示意图第67-68页
 Ⅵ pDRIII 构建示意图第68-69页
 Ⅶ 常用限制性内切酶的在不同缓冲液中的活性第69-71页
论文发表第71-72页
致谢第72页

 
 
论文编号BS1030747,这篇论文共72
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