| 前言 | 第1-32页 |
| 第一部分 NF-κB与食管癌 | 第32-69页 |
| 引言 | 第32页 |
| 一、主要试剂和仪器 | 第32-36页 |
| 1．主要仪器 | 第32-33页 |
| 2．主要试剂和试剂盒 | 第33-34页 |
| 3．菌株、细胞株和质粒 | 第34页 |
| 4．培养基 | 第34-35页 |
| 5．工具酶 | 第35页 |
| 6．主要溶液 | 第35-36页 |
| 二、实验材料 | 第36-37页 |
| 三、实验方法 | 第37-46页 |
| 1．组织标本免疫组织化学辣根过氧化物酶ABC法 | 第37-38页 |
| 2．细胞准备 | 第38-39页 |
| 2．1 细胞复苏 | 第38页 |
| 2．2 细胞传代 | 第38页 |
| 2．3 细胞冻存 | 第38-39页 |
| 2．4 细胞转染 | 第39页 |
| 3．培养细胞免疫组织化学 | 第39-40页 |
| 4．细胞核蛋白提取 | 第40-41页 |
| 5．RNA提取 | 第41-42页 |
| 6．RT-PCR扩增目的基因 | 第42-44页 |
| 6．1 反转录 | 第42页 |
| 6．2 反转录效果检测 | 第42-44页 |
| 7．Westernblot检测 | 第44-46页 |
| 7．1 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第44-45页 |
| 7．2 转膜 | 第45页 |
| 7．3 Western-blot | 第45-46页 |
| 7．4 显色 | 第46页 |
| 四、食管癌组织和细胞系中NF-κB免疫组化研究 | 第46-52页 |
| 1．NF-κB免疫组织化学结果判断 | 第47页 |
| 2．统计分析 | 第47页 |
| 3．NF-κBp65蛋白的表达结果 | 第47-49页 |
| 4．NF-κBp50蛋白的表达结果 | 第49-51页 |
| 5．NF-κBp65和NF-κBp50之间的相关 | 第51页 |
| 6．食管癌细胞株、食管上皮永生化细胞系中NF-κBp65、NF-κBp50的免疫组化结果 | 第51-52页 |
| 五、pcDNA3.1/mlκBαS32A／S36A质粒转化食管癌细胞株 | 第52-58页 |
| 1．pcDNA3.0/mlκBαS32A／S36A质粒转化和转染 | 第52-55页 |
| 1．1pcDNA3.0/mlκBαS32A／S36A质粒转化JM109感受念细胞 | 第52页 |
| 1．2pcDNA3．0／mlκBαS32A／S36A质粒的提取 | 第52-53页 |
| 1．3pcDNA3．0／mlκBαS32A／S36A质粒的鉴定 | 第53-54页 |
| 1．4pcDNA3．0／mlκBαS32A／S36A在EC1细胞中瞬时表达 | 第54-55页 |
| 2 结果 | 第55-58页 |
| 2．1 EC1瞬时表达细胞株中NF-κB蛋白的检测 | 第55-56页 |
| 2．2 转染质粒后对EC1细胞增殖能力的影响 | 第56-57页 |
| 2．3 转染质粒后对EC1细胞NF-κBmRNA检测 | 第57-58页 |
| 六、Westernblot检测食管癌组织和细胞株中NF-κB蛋白 | 第58-60页 |
| 1 病理材料 | 第58页 |
| 2 结果 | 第58-60页 |
| 2．1 NF-κBp65蛋白 | 第58-59页 |
| 2．2 NF-κBp50蛋白 | 第59-60页 |
| 七、RT-PCR检测食管癌组织和细胞株中NF-κBmRNA | 第60-62页 |
| 1 病理材料 | 第60页 |
| 2 引物设计 | 第60-61页 |
| 3 结果 | 第61-62页 |
| 3．1 NF-κBp65mRNA检测 | 第61页 |
| 3．2 NF-κBp50mRNA检测 | 第61-62页 |
| 八、讨论 | 第62-69页 |
| 第二部分 Id-1与食管癌 | 第69-95页 |
| 引言 | 第69-70页 |
| 一、主要试剂和仪器 | 第70页 |
| 1．主要仪器 | 第70页 |
| 2．主要试剂和试剂盒 | 第70页 |
| 3．细胞株和培养基 | 第70页 |
| 4．主要溶液 | 第70页 |
| 二、实验材料 | 第70-71页 |
| 三、实验方法 | 第71-72页 |
| 1．组织标本免疫组织化学辣根过氧化物酶ABC法 | 第71页 |
| 2．细胞准备 | 第71页 |
| 3．培养细胞的免疫组织化学 | 第71页 |
| 4．细胞核蛋白提取 | 第71页 |
| 5．RNA提取 | 第71页 |
| 6．RT-PCR扩增目的基因 | 第71页 |
| 7．Westernblot检测 | 第71-72页 |
| 四、食管癌组织和细胞系中Id-1蛋白的表达 | 第72-74页 |
| 1．Id-1免疫组织化学结果判断 | 第72页 |
| 2．统计分析 | 第72页 |
| 3．ID-1蛋白的表达结果 | 第72-74页 |
| 4．食管癌细胞株、食管上皮永生化细胞系Id-1的免疫组化结果48 | 第74页 |
| 五、Westernblot检测食管癌组织和细胞株中Id-1蛋白 ．48 | 第74-75页 |
| 1．病理材料 | 第74-75页 |
| 2．Westernblot结果 | 第75页 |
| 六、RT-PCR检测食箭癌组织和细胞株中ID-1mRNA | 第75-77页 |
| 1．病理材料 | 第76页 |
| 2．引物设计 | 第76页 |
| 3．结果 | 第76-77页 |
| 七、讨论 | 第77-83页 |
| 参考文献 | 第83-95页 |
| 后记 | 第95页 |
| 综述一 食管上皮永生化细胞系研究进展 | 第95-109页 |
| 一、细胞永生化的概念 | 第96页 |
| 二、永生化细胞的分子学机制 | 第96-98页 |
| 三、食管上皮永生化细胞的建立 | 第98-101页 |
| 四、食管上皮永生化细胞的变化 | 第101-105页 |
| 五、食管上皮永生化细胞系的应用及意义 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-109页 |
| 综述二 Id、NF-κB与肿瘤 | 第109-134页 |
| 一、Id与肿瘤 | 第109-117页 |
| 二、NF-κB与肿瘤的关系 | 第117-124页 |
| 三、Id-1与NF-κB的关系 | 第124-126页 |
| 参考文献 | 第126-134页 |
| 英文缩写词表 | 第134-136页 |
| 附录 | 第136-139页 |
| 致谢 | 第139-140页 |
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