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水仙类胡萝卜素合成途径基因的表达及花色相关基因克隆
 
     论文目录
 
摘要第1-11页
Abstract第11-13页
缩写词第13-14页
第一章 前言第14-26页
 1 水仙品种资源概述第14-15页
 2 高等植物类胡萝卜素生物合成的研究进展第15-18页
   ·高等植物类胡萝卜素生物合成途径第15-16页
   ·高等植物类胡萝卜素生物合成的调控机第16-17页
     ·叶片中类胡萝卜素调控机制研究第16-17页
     ·果实与花中类胡萝卜素调控机制研究第17页
   ·类胡萝卜素生物合成的基因工程研究进展第17-18页
 3 高等植物 MYB 转录因子的研究进展第18-19页
 4 质体及 CHRC 基因与类胡萝卜素积累机制的研究第19-21页
 5 BCH 基因的研究进展第21-22页
 6 中国水仙花色基因工程研究进展第22-25页
   ·水仙花色素成分和功能基因研究进展第22-23页
   ·中国水仙转基因技术研究进展第23-25页
     ·水仙的离体培养及再生体系研究第23-24页
     ·农杆菌介导的中国水仙遗传转化研究第24页
     ·反义技术在基因工程中的研究第24-25页
 7 本研究的科学意义及研究内容第25-26页
   ·本研究的科学意义第25页
   ·研究内容第25-26页
第二章 类胡萝卜素合成结构基因在几个水仙品种中的表达第26-39页
 1 试验材料第26-27页
   ·植物材料第26页
   ·主要试剂盒和仪器第26-27页
   ·引物合成第27页
 2 试验方法第27-30页
   ·水仙花瓣和副冠的总 RNA 的提取、检测第27页
   ·cDNA 第一链的合成第27页
   ·类胡萝卜素合成相关基因的表达分析第27-30页
     ·半定量 RT-PCR 反应第27-28页
     ·实时定量 qRT-PCR 反应第28-30页
 3 结果与分析第30-36页
   ·水仙花瓣、副冠总 RNA 的电泳图和质量检测第30-31页
   ·水仙类胡萝卜素合成途径结构基因的半定量 RT-PCR 表达第31页
   ·水仙类胡萝卜素途径结构基因的实时定量 qRT-PCR 表达第31-36页
     ·水仙类胡萝卜素相关基因的标准曲线第31-33页
     ·水仙类胡萝卜素合成途径结构基因的特异性扩增第33-35页
     ·水仙类胡萝卜素合成途径结构基因的定量 qRT-PCR 表达第35-36页
 4 讨论第36-39页
第三章 漳州水仙 CHRC 的克隆与表达研究第39-52页
 1 试验材料第39-40页
   ·植物材料第39页
   ·常用药品和仪器第39-40页
   ·主要试剂盒第40页
   ·引物合成第40页
 2 试验方法第40-43页
   ·水仙总 RNA 提取、检测第40页
   ·cDNA 合成第40页
   ·引物合成第40-41页
   ·PCR 扩增第41-42页
   ·目的片段的回收、连接、转化和菌液 PCR 检测第42页
     ·回收目的片段第42页
     ·连接、转化第42页
     ·菌液 PCR 检测第42页
   ·RT-PCR 反应第42-43页
 3 结果与分析第43-50页
   ·Total RNA 的提取与纯度检测第43页
   ·漳州水仙 CHRC 基因 cDNA 全长的克隆第43-46页
     ·漳州水仙 CHRC 基因保守区的克隆第43-44页
     ·漳州水仙 CHRC 基因 3′RACE 的克隆第44-45页
     ·漳州水仙 CHRC 基因 5′RACE 的克隆第45-46页
     ·漳州水仙 CHRC 基因开放阅读框的克隆第46页
   ·漳州水仙 CHRC 基因的序列分析第46-49页
     ·漳州水仙 CHRC 基因的氨基酸同源性分析第46-47页
     ·漳州水仙 CHRC 信号肽、跨膜和蛋白二级结构第47-49页
   ·漳州水仙 CHRC 基因的系统进化树分析第49-50页
   ·两种水仙 CHRC 基因的半定量表达第50页
 4 讨论第50-52页
第四章 水仙 MYB 基因的克隆与分析第52-62页
 1 试验材料第52-53页
   ·植物材料第52页
   ·载体和菌株第52页
   ·试剂和仪器第52-53页
 2 试验方法第53-55页
   ·洋水仙花瓣总 RNA 提取、检测第53页
   ·cDNA 合成第53页
   ·引物设计与合成第53页
   ·PCR 扩增第53-54页
   ·目的片段的回收、连接、转化和阳性克隆的 PCR 检测第54-55页
     ·目的片段的回收第54页
     ·目的片段与 T 载体连接第54页
     ·连接产物的转化第54页
     ·菌液 PCR 检测第54-55页
 3 结果与分析第55-61页
   ·Total RNA 的提取与纯度检测第55页
   ·MYB 基因的克隆第55-56页
     ·MYB 基因保守片段的克隆第55-56页
     ·NpMYB2 基因 3’RACE 的克隆第56页
   ·MYB 基因的序列分析第56-60页
     ·NpMYB1 基因的序列分析第56-57页
     ·NpMYB2 基因的序列分析第57-60页
   ·MYB 基因的系统进化树分析第60-61页
 4 讨论第61-62页
第五章 BCH 反义植物表达载体的构建与转化初步研究第62-74页
 1 试验材料第62-64页
   ·植物材料第62-63页
   ·漳州水仙花葶的消毒和接种第63页
   ·载体和菌株第63页
   ·试剂和仪器第63页
   ·培养基和培养条件第63-64页
 2 试验方法第64-68页
   ·漳州水仙 BCH 基因的克隆第64-65页
     ·漳州水仙黄色副冠总 RNA 提取、检测第64页
     ·cDNA 的合成第64页
     ·引物设计第64页
     ·漳州水仙 BCH 基因 cDNA 全长序列的 PCR 扩增第64页
     ·目的片段的回收、连接、转化和阳性克隆的 PCR 检测第64页
       ·目的片段的回收第64页
       ·目的片段与 T 载体连接第64页
       ·连接产物的转化第64页
       ·菌液 PCR 检测第64页
     ·质粒的提取第64-65页
   ·BCH 反义植物表达载体的构建第65-66页
     ·pMD-18T-BCH 和 pCAMBIA 1301 质粒的提取第65页
     ·质粒双酶切及目的片段回收第65-66页
     ·目的基因与载体 DNA 连接第66页
     ·连接产物的转化第66页
     ·重组质粒的鉴定第66页
       ·PCR 检测鉴定第66页
       ·酶切鉴定第66页
   ·pC1301-反义 BCH 表达载体对农杆菌 EHA105 的导入第66-67页
     ·pC1301-反义 BCH 菌液培养及质粒提取第66页
     ·农杆菌 EHA105 的培养第66页
     ·农杆菌 EHA105 感受态细胞的制备与转化第66-67页
       ·制备农杆菌 EHA105 感受态细胞第66页
       ·重组质粒转化农杆菌第66-67页
       ·pC1301-反义 BCH 质粒导入 EHA105 的鉴定与保存第67页
   ·BCH 反义基因转化漳州水仙的初步研究第67-68页
     ·E/pC1301-反义 BCH 农杆菌侵染液的制备第67页
     ·根癌农杆菌转化漳州水仙花葶的基本步骤第67页
     ·以不同的筛选方式转化漳州水仙第67-68页
     ·培养抗性植株第68页
       ·抗性芽筛选培养第68页
       ·抗性芽增殖培养第68页
     ·统计转化数据第68页
 3 结果与分析第68-71页
   ·漳州水仙 BCH 基因的 PCR 扩增第68-69页
   ·BCH 反义植物表达载体的构建第69-70页
     ·pCAMBIA 1301 和 pMD-18T-BCH 质粒的双酶切结果第69-70页
     ·重组质粒 pC1301-反义 BCH 的 PCR 和酶切鉴定结果第70页
   ·pC1301-反义 BCH 表达载体对农杆菌 EHA105 的导入第70-71页
   ·EHA105/pC1301-BCH 转化漳州水仙初步研究结果第71页
 4 讨论第71-74页
   ·漳州水仙 BCH 基因的克隆及反义植物表达载体的构建第71-72页
   ·农杆菌介导的漳州水仙花葶转化第72-74页
参考文献第74-82页
致谢第82页

 
 
论文编号BS2006997,这篇论文共82
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