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慢病毒介导P63基因转染人脂肪干细胞的实验研究 |
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【摘要】：目的:以慢病毒为载体,将P63基因转染到体外培养的脂肪干细胞上,获得P63基因高表达的脂肪干细胞,为进一步研究脂肪肝细胞向表皮的分化奠定实验基础。方法:(1)无菌条件下获取健康男性的腹部脂肪,消化法分离脂肪干细胞,体外培养、扩增,冻存备用。(2)脂肪干细胞的鉴定:形态学检测、多向分化能力及表面标记物检测。(3)慢病毒载体介导P63基因转染人脂肪干细胞。(4)将转染后的细胞进行PCR及Western Blot检测。结果:分离培养后,细胞贴壁生长,形态呈梭形,并呈旋涡状或放射状排列;细胞生长曲线为典型的“S”形;成脂诱导分化的细胞经油红O染色为阳性,对照组为阴性;成骨诱导分化的细胞经茜素红染色为阳性,对照组为阴性。流式细胞仪检测结果显示CD14和CD45为阴性,CD29、CD44、CD105为阳性。转染后的脂肪干细胞有明显的P63及角蛋白表达。结论:通过外科手术获得的人体脂肪组织中含有脂肪干细胞,经体外培养扩增后,以慢病毒为载体,转染P63基因,细胞表现出更好地向表皮细胞分化的能力,为研究脂肪干细胞向表皮细胞的分化提供参考。
【关键词】：脂肪干细胞 P63 慢病毒 转染 表皮分化
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R329.28
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