| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-27页 |
| ·新型可再生的生物柴油及其存在的问题 | 第13-14页 |
| ·利用微生物油脂是发展生物柴油的重要途径 | 第14-15页 |
| ·斯达油脂酵母具有重要的应用前景 | 第15-16页 |
| ·油脂酵母油脂累积的研究背景 | 第16-22页 |
| ·酵母木糖代谢的研究背景 | 第22-25页 |
| ·研究目的与研究内容 | 第25-26页 |
| ·研究目的 | 第25页 |
| ·主要研究内容 | 第25-26页 |
| ·研究的技术路线 | 第26-27页 |
| 第二章 材料和方法 | 第27-53页 |
| ·实验材料 | 第27-31页 |
| ·斯达油脂酵母 | 第27页 |
| ·酿酒酵母 | 第27页 |
| ·大肠杆菌 | 第27页 |
| ·质粒 | 第27-31页 |
| ·培养基 | 第31-33页 |
| ·抗生素 | 第33-34页 |
| ·菌种保存 | 第34页 |
| ·重要的实验仪器与设备 | 第34页 |
| ·试剂和耗材 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-53页 |
| ·DNA提取和纯化(CTAB) | 第35页 |
| ·RNA提取和纯化 | 第35-37页 |
| ·核酸的电泳 | 第37页 |
| ·PCR反应体系 | 第37-38页 |
| ·RNA反转录 | 第38-39页 |
| ·Real-time PCR | 第39-40页 |
| ·兼并引物PCR | 第40-41页 |
| ·TAIL-PCR | 第41-43页 |
| ·大肠杆菌感受态制备 | 第43-44页 |
| ·克隆和大肠杆菌转化 | 第44-45页 |
| ·质粒小提 | 第45-46页 |
| ·DNA酶切 | 第46-47页 |
| ·酶切片段与表达载体的连接 | 第47页 |
| ·酿酒酵母转化和生长曲线测定 | 第47-48页 |
| ·斯达油脂酵母的转化和生长曲线测定 | 第48页 |
| ·酿酒酵母甘油-3-磷酸含量测定 | 第48-49页 |
| ·酵母总油脂的抽提和定量 | 第49-50页 |
| ·油脂成分检测 | 第50页 |
| ·中性脂的分离 | 第50-51页 |
| ·中性脂的TLC层析 | 第51页 |
| ·酿酒酵母细胞的尼罗红染色 | 第51页 |
| ·分子量标准 | 第51-52页 |
| ·主要的分析软件 | 第52-53页 |
| 第三章 斯达油脂酵母对不同碳源的利用 | 第53-62页 |
| ·材料和方法 | 第53-54页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-54页 |
| ·结果 | 第54-59页 |
| ·柳木木屑及其水解液的化学元素和糖类组成 | 第54-55页 |
| ·不同C/N对斯达油脂酵母油脂的影响 | 第55-56页 |
| ·甘油和木糖培养时对斯达油脂酵母油脂的影响 | 第56-58页 |
| ·斯达油脂酵母发酵水解液时细胞生长和油脂累积 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| ·小结 | 第61-62页 |
| 第四章 斯达油脂酵母油脂累积规律的调查与TAG合成途径相关基因的表达分析 | 第62-78页 |
| ·材料和方法 | 第62-66页 |
| ·材料 | 第62页 |
| ·方法 | 第62-66页 |
| ·结果 | 第66-74页 |
| ·LsACC1 CDS序列的克隆 | 第66-67页 |
| ·LsACC1的基因结构 | 第67页 |
| ·LsACC1功能元件鉴定和进化分析 | 第67-70页 |
| ·斯达油脂酵母油脂累积的规律 | 第70-71页 |
| ·RNA抽提和引物检测 | 第71-72页 |
| ·Real-time PCR分析 | 第72-74页 |
| ·讨论 | 第74-76页 |
| ·小结 | 第76-78页 |
| 第五章 斯达油脂酵母ACC1基因的功能分析 | 第78-99页 |
| ·材料和方法 | 第78-81页 |
| ·材料 | 第78页 |
| ·方法 | 第78-81页 |
| ·结果 | 第81-95页 |
| ·IRDL克隆方法构建酿酒酵母表达载体pLSA1.0和pSCA1.0 | 第81-84页 |
| ·构建酿酒酵母表达载体pX2-GPD1 | 第84页 |
| ·酿酒酵母表达载体转化和检测 | 第84-86页 |
| ·酿酒酵母油脂累积受脂肪酸限制 | 第86-88页 |
| ·LsACC1表达促进酿酒酵母油脂的累积 | 第88-89页 |
| ·斯达油脂酵母的转化 | 第89-91页 |
| ·LsACC1单等位基因的敲除降低斯达油脂酵母的含油量 | 第91-95页 |
| ·讨论 | 第95-97页 |
| ·小结 | 第97-99页 |
| 第六章 TAG组装相关基因的克隆与功能分析 | 第99-129页 |
| ·LsDGAT11、LsDGAT12、LsDGAT13和LsDGAT2克隆与功能分析 | 第99-117页 |
| ·材料 | 第99页 |
| ·方法 | 第99-102页 |
| ·结果 | 第102-117页 |
| ·LsGPD1克隆与功能分析 | 第117-125页 |
| ·材料 | 第117页 |
| ·方法 | 第117-118页 |
| ·结果 | 第118-125页 |
| ·讨论 | 第125-127页 |
| ·小结 | 第127-129页 |
| 第七章 不同碳源发酵的斯达油脂酵母RNA-Seq分析 | 第129-150页 |
| ·材料和方法 | 第129-134页 |
| ·材料 | 第129页 |
| ·方法 | 第129-134页 |
| ·结果 | 第134-147页 |
| ·RNA-Seq总结 | 第134-136页 |
| ·转录谱揭示葡萄糖和木糖样品中差异表达基因 | 第136-139页 |
| ·糖代谢 | 第139-142页 |
| ·DEG中与木糖代谢相关的基因 | 第142-144页 |
| ·木糖还原酶与木糖醇脱氢酶的功能域鉴定 | 第144-147页 |
| ·讨论 | 第147-149页 |
| ·小结 | 第149-150页 |
| 第八章 总体的研究结论和展望 | 第150-152页 |
| 参考文献 | 第152-167页 |
| 附录 | 第167-175页 |
| 致谢 | 第175-177页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第177页 |
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