| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 引言 | 第8-10页 |
| 1.文献综述 | 第10-24页 |
| 1.1 番茄红素 | 第10-13页 |
| 1.1.1 番茄红素的结构 | 第10页 |
| 1.1.2 番茄红素的功能 | 第10-11页 |
| 1.1.3 番茄红素的合成 | 第11页 |
| 1.1.4 番茄红素的生物合成 | 第11页 |
| 1.1.5 番茄红素的生物合成途径(MVA和MEP) | 第11-13页 |
| 1.2 脂肪酸 | 第13-16页 |
| 1.2.1 脂肪酸的种类 | 第13-14页 |
| 1.2.2 脂肪酸的代谢概述 | 第14-15页 |
| 1.2.3 脂肪酸降解途径的调节 | 第15-16页 |
| 1.3 棕榈酸为作为替代碳源生产番茄红素 | 第16-18页 |
| 1.3.1 棕榈酸与MVA途径的联系 | 第16页 |
| 1.3.2 能量与物质代谢比较 | 第16-17页 |
| 1.3.3 棕榈酸作为理想的替代碳源 | 第17-18页 |
| 1.4 番茄红素的生物合成途径的改造 | 第18-22页 |
| 1.4.1 番茄红素的生物合成途径常用改造方法 | 第18-19页 |
| 1.4.2 基因编辑优化MVA途径的现状 | 第19-20页 |
| 1.4.3 基因整合方法优化代谢途径的局限 | 第20-21页 |
| 1.4.4 新的位点特异性重组方法的建立-NRMI(Nigrirecombinasemediatedintegration)的整合方法 | 第21-22页 |
| 1.5 研究目的和意义 | 第22-24页 |
| 2.棕榈酸利用模块和番茄红素合成模块的结合 | 第24-34页 |
| 2.1 引言 | 第24-25页 |
| 2.2 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第25页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.2.3 实验试剂 | 第26页 |
| 2.2.4 主要溶液 | 第26-27页 |
| 2.3 方法 | 第27-30页 |
| 2.3.1 检测棕榈酸消耗的方法 | 第27-29页 |
| 2.3.2 棕榈酸利菌株产番茄红素的工程菌株的构建 | 第29页 |
| 2.3.3 检测棕榈酸利用菌株产番茄红素的能力 | 第29-30页 |
| 2.4 结果 | 第30-32页 |
| 2.4.1 棕榈酸利用菌株利用棕榈酸的能力。 | 第30-32页 |
| 2.4.2 棕榈酸利用菌株产番茄红素的能力 | 第32页 |
| 2.5 讨论 | 第32-33页 |
| 2.6 小结 | 第33-34页 |
| 3.新的位点特异性重组方法-NRMI(Nigrirecombinasemediatedintegration) | 第34-55页 |
| 3.1 引言 | 第34页 |
| 3.2 实验材料 | 第34-36页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第34-35页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第35页 |
| 3.2.3 实验试剂 | 第35-36页 |
| 3.2.4 主要溶液 | 第36页 |
| 3.3 方法 | 第36-45页 |
| 3.3.1 质粒的构建 | 第36-40页 |
| 3.3.2 Crispr-Cas9方法构建BW-nox、BW-lox66和BW-rox菌株 | 第40-45页 |
| 3.3.3 BW-PIR菌株的构建 | 第45页 |
| 3.3.4 Nigri的介导下质粒整合的方法 | 第45页 |
| 3.4 结果 | 第45-53页 |
| 3.4.1 Nigri整合方法的验证 | 第45-51页 |
| 3.4.2 消除nox位点实现连续整合 | 第51-52页 |
| 3.4.3 利用NRMI整合方法建立大片段基因连续的策略 | 第52-53页 |
| 3.5 讨论 | 第53-54页 |
| 3.6 小结 | 第54-55页 |
| 4.MVA途径的优化 | 第55-68页 |
| 4.1 引言 | 第55页 |
| 4.2 实验材料 | 第55-56页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第55-56页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第56页 |
| 4.2.3 实验试剂 | 第56页 |
| 4.2.4 主要溶液 | 第56页 |
| 4.3 方法 | 第56-59页 |
| 4.3.1 菌株的构建 | 第56-57页 |
| 4.3.2 PM模块的整合方法 | 第57-58页 |
| 4.3.3 ESK模块的整合方法 | 第58-59页 |
| 4.4 利用NRMI方法优化MVA途径 | 第59-66页 |
| 4.4.1 MVA途径的优化-PM模块整合至染色体 | 第59-63页 |
| 4.4.2 MVA途径的优化-ESK模块整合至染色体 | 第63-66页 |
| 4.5 讨论 | 第66-67页 |
| 4.6 小结 | 第67-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-78页 |
| 附录A pLESKs、pSKPMIc和pLY116质粒图谱 | 第78-79页 |
| 附录B NRMI方法中的位点和基因序列 | 第79-81页 |
| 附录C pW-Nigri、pW-Cre和pW-Dre三个质粒图谱 | 第81-82页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
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