| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-8页 |
| 第一章 前言 | 第8-14页 |
| 1．1 运动发酵单胞菌 | 第9页 |
| 1．2 大肠杆菌 | 第9-12页 |
| 1．3 技术路线 | 第12-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-25页 |
| 2．1 实验材料 | 第14-18页 |
| 2．1．1 菌株与质粒 | 第14页 |
| 2．1．2 酶与试剂 | 第14页 |
| 2．1．3 主要仪器设备 | 第14-15页 |
| 2．1．4 常用缓冲液配方 | 第15-18页 |
| 2．2 方法与步骤 | 第18-25页 |
| 2．2．1 Zymomonas mobilis的复苏培养 | 第18页 |
| 2．2．2 菌种的保存 | 第18页 |
| 2．2．3 Zymomorlas mobilis基因组总DNA的制备 | 第18页 |
| 2．2．4 乙醇脱氢酶基因（adhB）和丙酮脱羧酶基因（pdc）的引物设计和PCR扩增 | 第18-19页 |
| 2．2．5 大肠杆菌感受态的制备 | 第19-20页 |
| 2．2．6 质粒DNA的大量制备 | 第20页 |
| 2．2．7 少量提取质粒 | 第20-21页 |
| 2．2．8 DNA的酶切与连接 | 第21页 |
| 2．2．9 连接产物对大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第21页 |
| 2．2．10 阳性克隆的筛选和酶切验证 | 第21页 |
| 2．2．11 重组子的质粒PCR验证 | 第21-22页 |
| 2．2．12 rrnB终止子（terminator)的克隆和PCR扩增 | 第22-23页 |
| 2．2．13 含RBS序列的adhB基因克隆 | 第23页 |
| 2．2．14 菌液PCR | 第23页 |
| 2．2．15 乙醇脱氢酶的定性实验 | 第23-24页 |
| 2．2．16 丙酮酸脱羧酶的定性实验 | 第24页 |
| 2．2．17 外源基因在大肠杆菌中的表达检测 | 第24页 |
| 2．2．18 蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第24页 |
| 2．2．19 重组大肠杆菌利用葡萄糖的摇瓶发酵实验 | 第24页 |
| 2．2．20 重组大肠杆菌利用木糖的摇瓶发酵实验 | 第24-25页 |
| 第三章 结果和分析 | 第25-52页 |
| 3．1 乙醇脱氢酶基因（adhB基因）表达质粒的构建 | 第25-32页 |
| 3．1．1 adhB基因的克隆 | 第25-26页 |
| 3．1．2 pGEM-3zf+重组克隆质粒的验证 | 第26-27页 |
| 3．1．3 乙醇脱氢酶基因（adhB）基因的序列分析 | 第27-28页 |
| 3．1．4 乙醇脱氢酶基因（adhB）与pSE380载体的连接 | 第28-29页 |
| 3．1．5 乙醇脱氢酶的定性检测 | 第29-32页 |
| 3．2 丙酮酸脱羧酶基因（pdc）表达质粒的构建 | 第32-39页 |
| 3．2．1 pdc基因的克隆 | 第32-33页 |
| 3．2．2 pGEM-3zf+重组克隆质粒的验证 | 第33-34页 |
| 3．2．3 pdc基因的序列分析 | 第34-36页 |
| 3．2．4 丙酮酸脱羧酶基因（pdc）与pSE380载体的连接 | 第36-37页 |
| 3．2．5 丙酮酸脱羧酶的定性检测 | 第37页 |
| 3．2．6 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第37-39页 |
| 3．3 多顺反子表达质粒的构建 | 第39-46页 |
| 3．3．1 多顺反子表达质粒的构建如下 | 第39页 |
| 3．3．2 rmB终止子（terminator）的克隆 | 第39-40页 |
| 3．3．3 terminator与pSE-pdc的连接 | 第40-41页 |
| 3．3．4 含RBS序列的adhB基因克隆 | 第41-42页 |
| 3．3．5 克隆质粒的构建 | 第42页 |
| 3．3．6 DNA测序 | 第42页 |
| 3．3．7 多顺反子表达质粒的构建 | 第42-43页 |
| 3．3．8 酶切确定目的片段的插入方向 | 第43-45页 |
| 3．3．9 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第45-46页 |
| 3．4 重组菌株葡萄糖发酵实验 | 第46-49页 |
| 3．5 重组菌株木糖发酵实验 | 第49-52页 |
| 第四章 讨论 | 第52-56页 |
| 4．1 DNA体外重组 | 第52页 |
| 4．2 外源基因在大肠杆菌中的表达 | 第52-54页 |
| 4．3 代谢工程的应用 | 第54页 |
| 4．4 问题与展望 | 第54-56页 |
| 第五章 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
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