| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 绪论 | 第10-24页 |
| ·肌肉生长抑制素基因（Myostatin）的研究进展 | 第10-14页 |
| ·肌肉生长抑制素基因的发现 | 第10-11页 |
| ·肌肉生长抑制素基因及蛋白结构特点 | 第11页 |
| ·肌肉生长抑制素基因的表达 | 第11页 |
| ·TGF-β和Myostatin 信号通路 | 第11-13页 |
| ·肌肉生长抑制素基因的功能及研究意义 | 第13-14页 |
| ·展望 | 第14页 |
| ·基因敲除技术的研究进展 | 第14-19页 |
| ·基因敲除的原理 | 第15页 |
| ·基因敲除的载体设计 | 第15-16页 |
| ·基因敲除阳性中靶细胞的筛选 | 第16-17页 |
| ·同源重组细胞克隆的鉴定 | 第17-18页 |
| ·基于Cre/loxp 重组酶系统的条件性基因敲除 | 第18-19页 |
| ·基因敲除结合体细胞克隆技术在转基因家畜研究中的应用 | 第19-22页 |
| ·转基因动物的制作方法 | 第19-20页 |
| ·家畜体细胞克隆技术 | 第20-21页 |
| ·家畜体细胞基因敲除 | 第21页 |
| ·展望 | 第21-22页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| ·本研究的技术路线 | 第23-24页 |
| 2. 绵羊肌肉生长抑制素基因（Myostatin）敲除载体的构建 | 第24-40页 |
| ·材料与方法 | 第24-26页 |
| ·实验动物材料 | 第24页 |
| ·质粒与菌株 | 第24页 |
| ·主要试剂及实验仪器 | 第24-25页 |
| ·使用的生物软件及数据库 | 第25页 |
| ·溶液试剂的配置 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-33页 |
| ·绵羊血液基因组DNA 的提取 | 第26-27页 |
| ·绵羊Myostatin 基因同源臂的获得 | 第27-28页 |
| ·同源长短臂的胶回收纯化 | 第28-29页 |
| ·同源臂的亚克隆 | 第29-30页 |
| ·同源长短臂亚克隆连接产物的转化及筛选 | 第30页 |
| ·阳性克隆质粒小提 | 第30-31页 |
| ·阳性克隆质粒双酶切及测序鉴定 | 第31-32页 |
| ·PloxpII-OVIS-MSTN 敲除载体的构建 | 第32-33页 |
| ·结果与分析 | 第33-38页 |
| ·绵羊血液基因组DNA 提取 | 第33页 |
| ·绵羊Myostatin 基因同源臂扩增结果 | 第33-34页 |
| ·同源长短臂胶回收纯化检测结果 | 第34-35页 |
| ·同源长短臂亚克隆质粒小提及酶切鉴定 | 第35-37页 |
| ·终载体PloxpII-OVIS-MSTN 酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| ·绵羊Myostatin 基因敲除载体的设计 | 第38页 |
| ·大片段同源臂的获得 | 第38页 |
| ·同源臂与骨架载体的重组连接 | 第38-40页 |
| 3. 绵羊耳组织成纤维细胞系的建立 | 第40-48页 |
| ·材料与方法 | 第40-41页 |
| ·实验动物材料 | 第40页 |
| ·细胞培养实验耗材及试剂 | 第40页 |
| ·主要实验仪器及设备 | 第40页 |
| ·溶液试剂的配置 | 第40-41页 |
| ·方法 | 第41-42页 |
| ·绵羊耳组织取材及处理 | 第41页 |
| ·组织块贴壁法原代培养绵羊耳成纤维细胞 | 第41页 |
| ·绵羊耳成纤维细胞传代 | 第41-42页 |
| ·绵羊耳成纤维细胞的冻存与复苏 | 第42页 |
| ·绵羊耳成纤维细胞生长曲线的绘制 | 第42页 |
| ·结果与分析 | 第42-45页 |
| ·组织块贴壁法原代培养绵羊耳成纤维细胞的结果 | 第42-43页 |
| ·细胞的冻存与复苏 | 第43-44页 |
| ·绵羊耳成纤维细胞生长曲线 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-48页 |
| ·绵羊耳组织成纤维细胞的原代培养 | 第45-46页 |
| ·绵羊耳组织成纤维细胞培养过程中的形态及生长变化规律 | 第46-48页 |
| 4. PloxpII-OVIS-MSTN 敲除载体转染绵羊耳成纤维细胞方法的建立 | 第48-60页 |
| ·材料与方法 | 第48页 |
| ·质粒菌株及主要试剂 | 第48页 |
| ·主要仪器设备 | 第48页 |
| ·方法 | 第48-52页 |
| ·绵羊耳组织成纤维细胞G418 毒性检测 | 第48页 |
| ·PloxpII-OVIS-MSTN 敲除载体质粒大量提取 | 第48-49页 |
| ·PloxpII-OVIS-MSTN 敲除载体质粒酶切线性化及纯化 | 第49-50页 |
| ·PloxpII-OVIS-MSTN 敲除载体脂质体转染绵耳成纤维细胞 | 第50-51页 |
| ·阳性细胞克隆的药物筛选及鉴定 | 第51-52页 |
| ·结果与分析 | 第52-57页 |
| ·G418 毒性检测结果 | 第52页 |
| ·PloxpII-OVIS-MSTN 敲除载体质粒大提结果 | 第52-53页 |
| ·PloxpII-OVIS-MSTN 敲除载体脂质体转染绵羊耳成纤维细胞结果 | 第53-54页 |
| ·阳性细胞克隆的筛选结果 | 第54-56页 |
| ·细胞克隆PCR 鉴定结果 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-60页 |
| ·敲除载体质粒大提及酶切线性化纯化后的回收得率 | 第57页 |
| ·敲除载体脂质体转染绵羊耳成纤维细胞 | 第57-58页 |
| ·细胞克隆G418 及GANC 的双重药物筛选 | 第58页 |
| ·阳性细胞克隆的扩大培养及鉴定 | 第58-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
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