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PiggyBac转座系统在斑马鱼研究中的应用及文昌鱼Six1基因的克隆和生物信息学分析
 
     论文目录
 
(一)PiggyBac转座子介导的基因捕获策略在斑马鱼基因研究中的应用第1-77页
 中文摘要第8-10页
 ABSTRACT第10-12页
 缩写表第12-13页
 第一章 前言第13-24页
   ·斑马鱼作为模式生物的优势第13-15页
   ·斑马鱼基因功能研究策略第15-20页
     ·反向遗传学策略(Reverse Genetic Approaches)第15-18页
     ·正向遗传学策略(Forward Genetic Approaches)第18-20页
   ·本研究的目的,思路及意义第20-24页
 第二章 Helper品系转基因(转PB转座酶基因)斑马鱼的构建、筛选与分析第24-51页
   ·实验材料、试剂及仪器第24-28页
     ·实验动物斑马鱼及其饲养第24页
     ·菌株,质粒第24-25页
     ·主要实验试剂第25-28页
     ·主要实验仪器第28页
   ·实验方法第28-36页
     ·PCR法扩增ZPC0.5(zona pellucida)启动子第28-30页
     ·pCMV-hyPBase-IRES-EGFP表达载体的构建第30-32页
     ·pZPC0.5-hyPBase-IRES-EGFP表达载体的构建第32-33页
     ·显微注射及过程第33-35页
     ·荧光观察及转基因斑马鱼的筛选第35页
     ·Helper品系转基因斑马鱼F1代胚胎基因组DNA的提取及插入片段的PCR验证第35-36页
   ·实验结果第36-46页
     ·ZPC0.5启动子序列的克隆结果与功能位点分析第36-37页
     ·pCMV-hyPBase-IRES-EGFP表达载体构建结果与验证第37-39页
     ·pZPC0.5-hyPBase-IRES-EGFP表达载体的构建结果及验证第39-41页
     ·外源基因(pCMV-hyPBase-IRES-EGFP)最适注射浓度的确定第41-42页
     ·F0及F1代转基因(pCMV-hyPBase-IRES-EGFP)斑马鱼荧光性状分析第42-44页
     ·PCR验F0及F1代转基因(pCMV-hyPBase-IRES-EGFP)斑马鱼外源基因插入第44-46页
   ·讨论第46-51页
     ·pCMV-hyPBase-IRES-EGFP表达载体构建的合理性及该品系转基因斑马鱼的优缺点第46-47页
     ·斑马鱼ZPC0.5启动子选择及pZPC0.5-hyPBase-IRES-EGFP转基因斑马鱼品系的筛选第47-48页
     ·外源基因最适注射浓度的选择第48-49页
     ·pCMV-hyPBase-IRES-EGFP转基因斑马鱼跟对应品系斑马鱼荧光表达谱的比较与分析第49-51页
 第三章 Donor品系斑马鱼(携带PB转座子)的构建、筛选与分析第51-66页
   ·实验材料、试剂与仪器第51-52页
     ·实验动物第51页
     ·菌株,质粒第51-52页
     ·主要实验试剂第52页
     ·主要实验仪器(见第二章)第52页
   ·实验方法第52-55页
     ·PTK-mCherry质粒载体构建第52-53页
     ·hyPBase mRNA体外合成模板载体pCS2+-hyPBase的构建第53页
     ·转座酶hyPBase mRNA的制备第53-54页
     ·微注射及过程第54-55页
     ·荧光观察及donor品系转基因斑马鱼的筛选第55页
   ·实验结果第55-63页
     ·基因捕获载体质粒PTK-mCherry的构建结果第55-58页
     ·体外合成hyPBase mRNA模板载体质粒pCS2+-hyPBase的构建结果第58-59页
     ·PB转座酶hyPBase mRNA的体外合成结果第59-60页
     ·基因捕获载体PTK-mCherry的最佳使用条件探索第60-61页
     ·Donor品系转基因斑马鱼鱼筛选实验结果第61-62页
     ·共注射hyPBase mRNA及质粒PTK-mCherry的基因捕获方法在其他品系斑马鱼中应用初探第62-63页
   ·讨论第63-66页
     ·基因捕获载体PTK-mCherry功能元件的选择及最佳使用方法研究第63-64页
     ·F0代donor品系斑马鱼红色荧光表达谱的多样性分析第64-66页
 参考文献第66-75页
 附录第75-77页
(二)青岛文昌鱼six1及six4 基因的克隆及生物信息学分析第77-100页
 摘要第77-78页
 ABSTRACT第78-79页
 一、背景知识第79-83页
   ·文昌鱼概述第79-80页
   ·胸腺发育相关基因的研究第80-82页
     ·Pax1,pax9与胸腺发育第80-81页
     ·Eya1,six1,six4三基因与胸腺发育第81-82页
     ·Foxn1与胸腺发育第82页
   ·本研究的目的,思路及意义第82-83页
 二、实验材料、试剂及仪器第83-84页
   ·实验动物第83-84页
   ·菌株,质粒第84页
   ·主要实验试剂第84页
   ·主要仪器和设备第84页
 三、实验方法第84-86页
   ·胸腺发育相关基因的物种进化学分析第84页
   ·青岛文昌鱼胚胎总RNA的提取第84-85页
   ·cDNA第一链反转及PCR扩增Amphisix1、Amphisix4第85-86页
 四、实验结果第86-95页
   ·胸腺发育关键基因的进化学分析结果第86-90页
   ·青岛文昌鱼six1和six4基因克隆结果及分析第90-92页
   ·青岛文昌鱼six1基因的演绎蛋白分析结果第92-95页
 五、讨论第95-96页
 参考文献第96-100页
致谢第100-101页
学位论文评阅及答辩情况表第101页

 
 
论文编号BS1752948,这篇论文共101
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