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当前位置:教育论文中心首页--博士论文--新型蛋白质氧化折叠助剂的分子设计和复性方法研究
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新型蛋白质氧化折叠助剂的分子设计和复性方法研究
 
     论文目录
 
中文摘要第1-4页
ABSTRACT第4-10页
第一章 文献综述第10-34页
   ·蛋白质折叠复性第10-14页
     ·体内蛋白质折叠第10-11页
     ·体外蛋白质折叠复性第11页
     ·影响蛋白质复性的关键因素第11-14页
   ·体内蛋白质折叠的辅助因子第14-22页
     ·促进蛋白质二硫键形成的氧化还原酶第14-18页
     ·抑制蛋白质聚集的分子伴侣第18-22页
   ·辅助蛋白质复性的小分子第22-27页
     ·促进蛋白质二硫键形成的氧化还原剂小分子第22-23页
     ·抑制蛋白质聚集的小分子第23-27页
   ·色谱辅助复性第27-32页
     ·凝胶过滤色谱第27-28页
     ·离子交换色谱第28-29页
     ·疏水相互作用色谱第29-30页
     ·固定化金属离子亲和色谱第30页
     ·固定化辅助复性因子色谱第30-32页
   ·本文研究内容第32-34页
第二章 二硫键形成对蛋白质折叠动力学的影响第34-44页
   ·引言第34页
   ·实验材料和方法第34-36页
     ·实验材料第34-35页
     ·溶菌酶的还原变性第35页
     ·折叠动力学实验第35-36页
     ·强度平均波长变化动力学第36页
     ·酶活测定第36页
   ·结果与讨论第36-43页
     ·二硫键形成的作用研究第36-39页
     ·第一相构象折叠动力学第39-42页
     ·第二相构象折叠速率的决定因素第42-43页
   ·小结第43-44页
第三章 蛋白质折叠酶模拟物酰基胱胺的设计及其辅助蛋白质复性第44-59页
   ·引言第44-45页
   ·实验部分第45-49页
     ·实验材料第45页
     ·酰基胱胺的制备和表征第45-47页
     ·蛋白质的还原变性第47页
     ·内源荧光动力学测定方法第47-48页
     ·氧化复性的活性动力学第48页
     ·酶活测定第48-49页
     ·临界胶团浓度的测定第49页
   ·实验结果与讨论第49-57页
     ·辛酰胱胺的氧化能力考察第49-52页
     ·辛酰胱胺氧化能力的根源分析第52-54页
     ·烷基链长度对酰基胱胺氧化能力的影响第54-55页
     ·己酰胱胺对高浓度蛋白质氧化复性的影响第55-57页
   ·小结第57-59页
第四章 折叠酶模拟物寡肽的设计及其促进蛋白质复性第59-75页
   ·前言第59-60页
   ·实验材料和方法第60-63页
     ·实验材料第60页
     ·分析测试仪器第60页
     ·蛋白质还原变性第60页
     ·蛋白质复性动力学实验第60-61页
     ·酶活测定第61页
     ·还原势的测定第61-62页
     ·巯醇pK_a 值的测定第62-63页
   ·实验结果与讨论第63-73页
     ·氧化型CGC 辅助蛋白质氧化复性第63-67页
     ·RKCGC 的设计第67-68页
     ·中性条件下RKCGC 的辅助复性效果第68-71页
     ·弱碱性条件下RKCGC 的辅助复性效果第71-73页
   ·小结第73-75页
第五章 同电荷离子交换介质促进蛋白质复性第75-92页
   ·引言第75-76页
   ·实验材料和方法第76-79页
     ·实验材料第76页
     ·凝胶的准备和性质确定第76页
     ·孔隙率的确定第76-77页
     ·蛋白质的变性及还原变性第77-78页
     ·复性实验第78页
     ·复性后蛋白质检测第78-79页
     ·Zeta 电势的测定第79页
     ·蛋白质静电势的计算第79页
   ·结果与讨论第79-91页
     ·离子交换介质辅助带正电荷蛋白质Lysozyme 的复性第79-81页
     ·离子交换介质辅助带负电荷蛋白质BSA 的复性第81-82页
     ·离子交换介质辅助带负电荷蛋白质 CAII 的复性第82-83页
     ·同电荷离子交换介质促进复性的机制第83-85页
     ·同种电荷介质抑制聚集作用和尿素的耦合第85-87页
     ·介质-蛋白质间静电斥力对介质抑制聚集效果的影响第87-89页
     ·同电荷介质抑制蛋白质聚集的可能机制第89-91页
   ·小结第91-92页
第六章 同电荷聚电解质促进蛋白质复性第92-109页
   ·引言第92-93页
   ·实验材料和方法第93-95页
     ·实验材料第93页
     ·聚电解质的准备第93页
     ·蛋白质的变性及还原变性第93-94页
     ·复性实验第94页
     ·复性后蛋白质检测第94-95页
     ·Zeta 电势的测定第95页
   ·结果与讨论第95-107页
     ·阳离子型聚电解质辅助带正电荷蛋白质Lysozyme 的复性第95-101页
     ·阳离子型聚电解质辅助带正电荷蛋白质RNase A 的复性第101页
     ·阳离子聚电解质辅助带负电荷蛋白质CAⅡ 的复性第101-104页
     ·阴离子聚电解质 ES100 辅助 CAII 的复性第104-105页
     ·阴离子聚电解质硫酸葡聚糖辅助 CAII 的复性第105-106页
     ·阴离子聚电解质ES100 辅助带负电荷蛋白质EGFP 的复性第106-107页
   ·小结第107-109页
第七章 同电荷离子交换介质促进包含体蛋白质的复性第109-126页
   ·引言第109-110页
   ·实验材料和方法第110-116页
     ·实验材料第110页
     ·重组绿色荧光蛋白包含体的表达和纯化第110-111页
     ·包含体中目标蛋白质百分含量的确定第111-113页
     ·总蛋白质含量的测定第113-114页
     ·活性EGFP 的纯化第114-115页
     ·活性EGFP 蛋白的荧光标曲测定第115页
     ·EGFP 包含体的变性第115页
     ·EGFP 包含体的复性第115-116页
     ·凝胶过滤色谱法测定EGFP 复性的过程第116页
   ·结果与讨论第116-124页
     ·EGFP 包含体表达及纯化结果第116-117页
     ·SP Sepharose FF 辅助EGFP 包含体复性第117-119页
     ·同电荷离子交换介质对蛋白质的纯化效果第119-122页
     ·SP Sepharose FF 辅助复性的过程第122-124页
   ·小结第124-126页
第八章 结论与展望第126-130页
   ·全文总结第126-128页
   ·创新点第128页
   ·对今后工作的建议与展望第128-130页
参考文献第130-144页
发表论文和科研情况说明第144-147页
附录第147-153页
 附录一. 培养基配方第147页
 附录二. 包含体处理所用缓冲液第147页
 附录三. SDS-PAGE凝胶电泳所用试剂第147-148页
 附录四 EGFP荧光标准曲线第148-149页
 附录五 介质上洗脱的杂质蛋白样品的液质联用谱图第149-153页
致谢第153页

 
 
论文编号BS2348,这篇论文共153
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