| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-17页 |
| 缩略词表 | 第17-19页 |
| 前言 | 第19-24页 |
| 第一部分 Hippo通路信号分子在多囊肾组织中的表达与分布 | 第24-45页 |
| 材料与方法 | 第24-36页 |
| 材料 | 第24-29页 |
| （一）组织标本 | 第24-25页 |
| （二）主要试剂 | 第25页 |
| （三）抗体 | 第25-26页 |
| （四）配制试剂 | 第26-28页 |
| （五）主要仪器 | 第28-29页 |
| 方法 | 第29-36页 |
| （一）实验动物的繁育及基因鉴定 | 第29-31页 |
| （二）组织标本处理 | 第31-32页 |
| （三）多囊肾组织中 Hippo 通路信号分子的 Western Blotting 分析 | 第32-34页 |
| （四）肾组织中 Hippo 通路信号分子表达的 Realtime PCR 分析 | 第34-36页 |
| 结果 | 第36-43页 |
| 一、 Han:SPRD 大鼠的基因鉴定及肾组织病理特征 | 第36-38页 |
| （一） Han:SPRD 大鼠的基因鉴定 | 第36-37页 |
| （二） Han:SPRD 大鼠肾组织病理特征 | 第37-38页 |
| 二、Hippo 通路的信号分子 LATS1、YAP 及 TAZ 在 Han:SPRD 大鼠肾组织中的表达和分布 | 第38-43页 |
| （一）LATS1、YAP 及 TAZ 在 Han:SPRD 大鼠肾组织中表达及分布的免疫荧光共聚焦观察 | 第38-40页 |
| （二）LATS1、YAP 及 TAZ 在 Han:SPRD 大鼠肾组织中蛋白水平表达 | 第40页 |
| （三）LATS1/2、YAP、TAZ 及信号分子 MST1/2 在 ADPKD 患者肾组织中 mRNA 水平表达 | 第40-43页 |
| 讨论 | 第43-45页 |
| 第二部分 下调 YAP 和 TAZ 表达对囊肿衬里上皮细胞 WT912 的细胞增殖和周期的影响 | 第45-69页 |
| 材料与方法 | 第45-58页 |
| 材料 | 第45-49页 |
| （一）实验细胞株 | 第45页 |
| （二）主要试剂 | 第45-46页 |
| （三）抗体 | 第46页 |
| （四）配制试剂 | 第46-48页 |
| （五）主要仪器 | 第48-49页 |
| 方法 | 第49-58页 |
| （一）细胞培养 | 第49-50页 |
| （二）特异性 siRNA 设计、转染与筛选 | 第50-52页 |
| （三） MTT 法检测细胞 WT912 的细胞的增殖 | 第52页 |
| （四）流式细胞术分析细胞 WT912 的细胞凋亡 | 第52-53页 |
| （五）流式细胞术分析细胞 WT912 的细胞周期 | 第53页 |
| （六）Western blotting 技术观察信号分子蛋白水平的表达 | 第53-55页 |
| （七）Realtime PCR 技术观察信号分子 mRNA 水平的表达 | 第55-57页 |
| （八）统计学处理 | 第57-58页 |
| 结果 | 第58-66页 |
| 一、YAP 与 TAZ 特异性 siRNA 的构建 | 第58-60页 |
| （一）特异性 siRNA 的转染效率 | 第58页 |
| （二）YAP siRNA 干扰细胞 WT912 后 YAP 表达的检测 | 第58页 |
| （三）TAZ siRNA 干扰细胞 WT912 后 TAZ 表达的检测 | 第58-60页 |
| 二、MTT 法检测特异性 siRNA 干扰后对细胞 WT912 增殖的抑制作用 | 第60页 |
| 三、特异性 siRNA 干扰 YAP 与 TAZ 表达后对细胞 WT912 凋亡的促进作用 | 第60-62页 |
| （一）流式细胞术分析细胞 WT912 的凋亡率 | 第60-61页 |
| （二）Western blotting 分析细胞 WT912 凋亡相关蛋白的表达 | 第61-62页 |
| 四、特异性 siRNA 干扰 YAP 与 TAZ 后对细胞 WT912 的细胞周期变化 | 第62-66页 |
| （一）流式细胞术分析细胞 WT912 的细胞周期 | 第62-64页 |
| （二）Realtime PCR 分析细胞 WT912 的周期相关蛋白 mRNA 表达 | 第64-65页 |
| （三）Western blotting 分析细胞 WT912 的周期相关蛋白表达 | 第65-66页 |
| 讨论 | 第66-69页 |
| 第三部分 下调LATS1表达对囊肿衬里上皮细胞WT912的增殖和细胞周期的影响 | 第69-87页 |
| 材料与方法 | 第69-79页 |
| 材料 | 第69-73页 |
| （一）实验细胞株 | 第69页 |
| （二）主要试剂 | 第69-70页 |
| （三）抗体 | 第70-71页 |
| （四）配制试剂（主要参照第二版分子实验克隆指南） | 第71-72页 |
| （五）主要仪器 | 第72-73页 |
| 实验方法 | 第73-79页 |
| （一）细胞培养 | 第73-74页 |
| （二） siRNA 设计与筛选 | 第74-75页 |
| （三） MTT 检测细胞增殖 | 第75-76页 |
| （四）流式细胞术检测细胞凋亡 | 第76页 |
| （五）流式细胞术检测细胞周期 | 第76-77页 |
| （六）免疫印迹（Westernblotting） | 第77-79页 |
| （七）统计学处理 | 第79页 |
| 结果 | 第79-85页 |
| 一、LATS1 特异性 siRNA 的构建及干扰后细胞 WT912 的 LATS1 表达检测 | 第79-80页 |
| 二、LATS1 特异性 siRNA 干扰后对细胞 WT912 的 YAP 和 TAZ 表达的影响 | 第80页 |
| 三、MTT 法检测下调 LATS1 表达对细胞 WT912 增殖的促进作用 | 第80页 |
| 四、特异性 siRNA 干扰 LATS1 后细胞 WT912 的凋亡变化 | 第80-83页 |
| 五、特异性 siRNA 干扰 LATS1 后细胞 WT912 的周期变化 | 第83-85页 |
| （一）流式细胞术分析细胞 WT912 的细胞周期变化 | 第83-85页 |
| （二）Western blotting 分析细胞周期相关蛋白 | 第85页 |
| 讨论 | 第85-87页 |
| 全文总结 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-94页 |
| 文献综述 | 第94-105页 |
| 参考文献 | 第101-105页 |
| 在读期间完成和发表的文章和参加科研工作 | 第105页 |
| 参加学术会议会议情况 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
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