| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 研究背景 | 第10-46页 |
| 第一节 免疫系统概述 | 第10-13页 |
| 一、获得性免疫系统概述 | 第10-12页 |
| 二、固有免疫系统概述 | 第12-13页 |
| 三、无脊椎动物的固有免疫系统概述 | 第13页 |
| 第二节 无脊椎动物的固有免疫机制 | 第13-30页 |
| 一、无脊椎动物固有免疫系统的识别机制 | 第14-24页 |
| 二、免疫信号的调整和放大 | 第24-26页 |
| 三、病原及异己的清除 | 第26-27页 |
| 四、“危险模式”假说 | 第27-30页 |
| 第三节 TLR 研究进展 | 第30-36页 |
| 一、TLR 研究概述 | 第30-31页 |
| 二、TLR 的模式识别 | 第31-33页 |
| 三、TLR 介导的免疫反应 | 第33-34页 |
| 四、TLR 与获得性免疫系统的关系 | 第34-35页 |
| 五、TLR 在海水养殖中应用价值 | 第35-36页 |
| 第四节 TLR 信号通路研究进展 | 第36-43页 |
| 一、TLR 通路概述 | 第36-39页 |
| 二、TLR 信号通路的反馈调控 | 第39-41页 |
| 三、海洋无脊椎动物的TLRs 及TLR 通路研究 | 第41-43页 |
| 第五节 本研究的目的和意义 | 第43-46页 |
| 一、本研究的主要目的 | 第43-44页 |
| 二、本研究的基本内容 | 第44页 |
| 三、本研究的意义 | 第44-46页 |
| 第二章 材料与方法 | 第46-78页 |
| 第一节 实验材料 | 第46-57页 |
| 一、实验动物及菌株 | 第46-47页 |
| 二、主要试剂耗材 | 第47-56页 |
| 三、主要仪器设备 | 第56-57页 |
| 第二节 实验方法 | 第57-78页 |
| 一、栉孔扇贝总RNA 制备 | 第57-58页 |
| 二、栉孔扇贝cDNA 文库的构建及序列分析 | 第58页 |
| 三、RACE 技术获得基因全长cDNA 序列 | 第58-62页 |
| 四、PCR 扩增基因片段 | 第62页 |
| 五、琼脂糖凝胶电泳回收PCR 产物 | 第62-63页 |
| 六、感受态细胞的制备、连接及转化 | 第63-64页 |
| 七、软件及生物信息学分析 | 第64-65页 |
| 八、栉孔扇贝LPS 刺激实验 | 第65页 |
| 九、荧光实时定量PCR | 第65-66页 |
| 十、蛋白的原核重组、表达、纯化及复性 | 第66-70页 |
| 十一、多克隆抗体（免疫血清）的制备及鉴定 | 第70-71页 |
| 十二、western blot | 第71-72页 |
| 十三、酶联免疫反应 | 第72-73页 |
| 十四、栉孔扇贝RNA 干扰技术建立及应用 | 第73-75页 |
| 十五、免疫相关酶活测定 | 第75-76页 |
| 十六、细胞凋亡水平检测 | 第76-78页 |
| 第三章 实验结果 | 第78-113页 |
| 第一节 栉孔扇贝TLR 信号通路相关基因特征分析 | 第78-80页 |
| 一、栉孔扇贝TLR 信号通路相关基因的基本特征 | 第78页 |
| 二、栉孔扇贝TLR 信号通路相关基因与其它海洋无脊椎动物的比较 | 第78-80页 |
| 第二节 栉孔扇贝TLR 蛋白TIR 结构域与MyD88 蛋白之间的相互作用 | 第80-82页 |
| 一、栉孔扇贝TLR 蛋白TIR 结构域及MyD88 蛋白的重组表达 | 第80-81页 |
| 二、栉孔扇贝TLR 蛋白TIR 结构域MyD88 蛋白之间的相互作用 | 第81-82页 |
| 第三节 栉孔扇贝TLR 信号通路相关基因在LPS 刺激下的表达谱 | 第82-86页 |
| 一、栉孔扇贝TLR 信号通路相关基因在LPS 刺激下的表达谱 | 第82-83页 |
| 二、栉孔扇贝MyD88 信号通路相关基因在LPS 刺激下的表达谱 | 第83页 |
| 三、栉孔扇贝TRAF6 信号通路相关基因在LPS 刺激下的表达谱 | 第83-84页 |
| 四、栉孔扇贝IκB 信号通路相关基因在LPS 刺激下的表达谱 | 第84-85页 |
| 五、栉孔扇贝NFκB 信号通路相关基因在LPS 刺激下的表达谱 | 第85-86页 |
| 第四节 栉孔扇贝TLR 信号通路相关基因在TLR 基因被干扰过程中的表达谱 | 第86-94页 |
| 一、RNA 干扰技术在栉孔扇贝中的建立 | 第86-89页 |
| 二、栉孔扇贝TLR 基因在被干扰过程中的表达谱 | 第89-90页 |
| 三、栉孔扇贝MyD88 基因在TLR 基因被干扰过程中的表达谱 | 第90-91页 |
| 四、栉孔扇贝TRAF6 基因在TLR 基因被干扰过程中的表达谱 | 第91-92页 |
| 五、栉孔扇贝IκB 基因在TLR 基因被干扰过程中的表达谱 | 第92-93页 |
| 六、栉孔扇贝NFκB 基因在TLR 基因被干扰过程中的表达谱 | 第93-94页 |
| 第五节 栉孔扇贝抗氧化酶基因在TLR 基因被干扰过程中的表达谱及酶活变化 | 第94-98页 |
| 一、栉孔扇贝SOD 基因在TLR 基因被干扰过程中的表达谱 | 第94-95页 |
| 二、栉孔扇贝SOD 酶活性在TLR 基因被干扰过程中的变化 | 第95-96页 |
| 三、栉孔扇贝CAT 基因在TLR 基因被干扰过程中的表达谱 | 第96-97页 |
| 四、栉孔扇贝CAT 酶活性在TLR 基因被干扰过程中的变化 | 第97-98页 |
| 第六节 栉孔扇贝溶菌酶基因在TLR 基因被干扰过程中的表达谱及酶活变化 | 第98-100页 |
| 一、栉孔扇贝溶菌酶基因在TLR 基因被干扰过程中的表达谱 | 第99页 |
| 二、栉孔扇贝溶菌酶基因在TLR 基因被干扰过程中的酶活变化 | 第99-100页 |
| 第七节 栉孔扇贝LRR 基因在TLR 基因被干扰过程中的表达谱 | 第100-109页 |
| 一、栉孔扇贝LRR 基因的克隆及基本特征 | 第100-107页 |
| 二、栉孔扇贝LRRA 基因在TLR 基因被干扰过程中的表达谱 | 第107页 |
| 三、栉孔扇贝LRRB 基因在TLR 基因被干扰过程中的表达谱 | 第107-108页 |
| 四、栉孔扇贝LRRC 基因在TLR 基因被干扰过程中的表达谱 | 第108-109页 |
| 第八节 栉孔扇贝TLR 基因被干扰过程中的细胞凋亡水平变化 | 第109-111页 |
| 第九节 TLR 基因干扰致栉孔扇贝抗鳗弧菌能力变化的研究 | 第111-113页 |
| 第四章 分析与讨论 | 第113-125页 |
| 第一节 讨论 | 第113-124页 |
| 一、栉孔扇贝中存在原始而保守的MyD88 依赖的TLR 信号传导通路 | 第115-117页 |
| 二、栉孔扇贝TLR 信号通路相关基因能够参与机体的免疫反应 | 第117-119页 |
| 三、栉孔扇贝TLR 基因表达量被抑制对通路其它基因表达谱的影响 | 第119-120页 |
| 四、栉孔扇贝TLR 基因表达量被抑制对机体的抗氧化系统的影响 | 第120-121页 |
| 五、栉孔扇贝TLR 基因表达量被抑制对抗菌蛋白基因表达的影响 | 第121-122页 |
| 六、栉孔扇贝TLR 基因表达量被抑制对LRR 基因表达谱的影响 | 第122-123页 |
| 七、栉孔扇贝TLR 基因表达量被抑制对细胞凋亡信号传到的影响 | 第123页 |
| 八、栉孔扇贝TLR 基因在机体抗鳗弧菌侵染过程中的重要作用 | 第123-124页 |
| 第二节 结论 | 第124-125页 |
| 一、栉孔扇贝中存在原始而保守的TLR 信号传导通路 | 第124页 |
| 二、栉孔扇贝TLR 信号通路具有免疫功能 | 第124页 |
| 三、栉孔扇贝TLR 信号通路在机体抗鳗弧菌侵染过程中起着至关重要的作用 | 第124-125页 |
| 参考文献 | 第125-141页 |
| 致谢 | 第141页 |
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