| 中文摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-40页 |
| 1.1 仔猪腹泻 | 第11-18页 |
| 1.1.1 仔猪腹泻的病因 | 第11-13页 |
| 1.1.2 产肠毒素大肠杆菌(ETEC)的血清分型 | 第13-14页 |
| 1.1.3 产肠毒素大肠杆菌(ETEC)的毒力因子 | 第14-15页 |
| 1.1.4 产肠毒素大肠杆菌(ETEC)的致病机理 | 第15-17页 |
| 1.1.5 仔猪大肠杆菌性腹泻的预防 | 第17-18页 |
| 1.2 仔猪产肠毒素大肠杆菌(ETEC)F4受体基因的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.2.1 仔猪产肠毒素大肠杆菌(ETEC)F4受体的遗传特性 | 第18页 |
| 1.2.2 仔猪产肠毒素大肠杆菌(ETEC)F4受体基因的定位 | 第18-20页 |
| 1.3 蛋白质组学 | 第20-27页 |
| 1.3.1 蛋白质组学概述 | 第20-21页 |
| 1.3.2 蛋白质组学研究技术 | 第21-26页 |
| 1.3.3 蛋白质组学在畜禽研究中的应用 | 第26-27页 |
| 1.4 基因打靶技术 | 第27-38页 |
| 1.4.1 基因打靶技术原理 | 第27-30页 |
| 1.4.2 基因打靶新技术 | 第30-38页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第38-40页 |
| 第二章 ETEC F4ac抗性和易感仔猪小肠蛋白质组学分析 | 第40-66页 |
| 2.1 材料与方法 | 第41-45页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第41-42页 |
| 2.1.2 试验方法 | 第42-45页 |
| 2.2 结果与分析 | 第45-58页 |
| 2.2.1 样品蛋白质浓度及质检 | 第45-46页 |
| 2.2.2 数据质量评估 | 第46-51页 |
| 2.2.3 蛋白质定量及差异表达分析 | 第51-58页 |
| 2.3 讨论 | 第58-64页 |
| 2.3.1 iTRAQ技术在本试验中的优势和不足 | 第58-59页 |
| 2.3.2 差异表达蛋白及其互作网络分析 | 第59-60页 |
| 2.3.3 差异表达蛋白Pathway富集分析及功能分析 | 第60-61页 |
| 2.3.4 候选基因的确定 | 第61-64页 |
| 2.4 小结 | 第64页 |
| 2.5 本研究的不足及下一步工作展望 | 第64-66页 |
| 第三章 ETEC F4ac感染仔猪小肠上皮细胞体外模型的建立及ETECF4ac引起仔猪腹泻的信号通路研究 | 第66-79页 |
| 3.1 材料与方法 | 第66-74页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第66-68页 |
| 3.1.2 试验方法 | 第68-74页 |
| 3.2 结果与分析 | 第74-76页 |
| 3.2.1 ETECF4ac菌株表达基因检测的结果 | 第74页 |
| 3.2.2 实时荧光定量PCR检测ETEC F4ac的标准曲线 | 第74-75页 |
| 3.2.3 ETEC F4ac体外攻菌模型的建立 | 第75-76页 |
| 3.2.4 RT-PCR方法与平板菌落计数法定量ETEC F4ac黏附的比较 | 第76页 |
| 3.2.5 ETEC F4ac引起仔猪腹泻的信号通路 | 第76页 |
| 3.3 讨论 | 第76-78页 |
| 3.4 小结 | 第78-79页 |
| 第四章 ETEC F4acR候选基因的功能验证 | 第79-104页 |
| 4.1 试验材料 | 第79-80页 |
| 4.1.1 试验细胞、菌株及载体 | 第79页 |
| 4.1.2 主要试剂及溶液配制 | 第79-80页 |
| 4.1.3 主要试验仪器 | 第80页 |
| 4.1.4 主要分析软件和工具 | 第80页 |
| 4.1.5 DNA合成与测序 | 第80页 |
| 4.2 试验方法 | 第80-90页 |
| 4.2.1 利用CRISPR/Cas9系统构建基因打靶载体 | 第81-82页 |
| 4.2.2 真核表达载体的构建 | 第82-84页 |
| 4.2.3 打靶效率验证 | 第84-88页 |
| 4.2.4 G418筛选IPEC-J2细胞单克隆 | 第88页 |
| 4.2.5 Western Blotting | 第88-90页 |
| 4.3 结果及分析 | 第90-101页 |
| 4.3.1 基因打靶载体构建 | 第90-91页 |
| 4.3.2 基因打靶载体的敲除效率及选择 | 第91-93页 |
| 4.3.3 CRISPR/Cas9介导的基因敲除单克隆细胞株的构建 | 第93-95页 |
| 4.3.4 Western Blot检测双等位基因敲除的细胞系中蛋白表达情况 | 第95-96页 |
| 4.3.5 候选基因敲除对细菌黏附到细胞上数目的影响 | 第96-97页 |
| 4.3.6 ITGB5、MUC13真核表达载体的构建 | 第97-98页 |
| 4.3.7 重组质粒在IPEC-J2细胞中的表达活性 | 第98-100页 |
| 4.3.8 ITGB5基因过表达对细菌黏附数的影响 | 第100-101页 |
| 4.4 讨论 | 第101-102页 |
| 4.4.1 候选基因的选择 | 第101页 |
| 4.4.2 基因敲除对细菌黏附数的影响 | 第101-102页 |
| 4.4.3 ITGB5基因过表达对细菌黏附数的影响 | 第102页 |
| 4.5 小结 | 第102页 |
| 4.6 下一步工作展望 | 第102-104页 |
| 第五章 结论 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
| 附录 | 第121-139页 |
| 作者简历 | 第139页 |
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