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真核表达质粒pcDNA3.1(+)-CLEC2的构建及其在CHO细胞中的表达
 
     论文目录
 
中文摘要第1-8页
英文摘要第8-10页
缩略词第10-12页
引言第12-14页
技术路线第14-15页
第一部分 CLEC-2目的片段的获得第15-21页
 一、实验材料第15页
 二、主要仪器第15页
 三、主要试剂第15页
 四、主要溶液的配制第15-16页
 五、实验方法及步骤第16-21页
  1.人血小板总RNA的提取第16-17页
  2.RT-PCR第17-21页
第二部分 真核表达质粒pcDNA3.1(+)-CLEC2的构建和鉴定第21-29页
 一、主要试剂第21页
 二、主要仪器第21页
 三、主要溶液的配制第21-22页
 四、实验方法及步骤第22-29页
  1.双酶切纯化的CLEC-2 PCR产物第22-23页
  2.双酶切pcDNA3.1(+)第23页
  3.pcDNA3.1(+)-CLEC2重组DNA分子的构建第23-29页
第三部分 pcDNA 3.1(+)-CLEC2重组体的表达第29-33页
 一、细胞株第29页
 二、主要仪器第29页
 三、主要试剂第29页
 四、主要溶液的配制第29-30页
 五、实验方法及步骤第30-33页
  1.CHO细胞的复苏与培养第31页
  2.重组体转染CHO细胞第31-32页
  3.G418筛选稳定株第32-33页
第四部份 Western blot检测目的基因的表达第33-38页
 一、主要仪器第33页
 二、主要试剂第33页
 三、主要溶液的配制第33-35页
 四、实验方法及步骤第35-38页
  1.细胞裂解第36页
  2.Western blot蛋白样品的处理第36页
  3.Western blot具体步骤第36-38页
结果第38-49页
 一、RT-PCR扩增目的基因第38页
 二、pcDNA3.1(+)-CLEC2重组体菌落PCR鉴定第38-39页
 三、pcDNA3.1(+)-CLEC2重组体的双酶切定第39-40页
 四、pcDNA3.1(+)-CLEC2重组体的测序及序列比对结果第40-46页
 五、重组质粒纯度及浓度测定结果第46-47页
 六、CHO细胞的转染与筛选第47页
 七、LEC-2目的蛋白在CHO细胞中的表达第47-49页
讨论第49-56页
 一、关于表达载体的构建第49-51页
 二、真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)-CLEC2的转染和表达第51-55页
 三、展望第55-56页
结论第56-57页
参考文献第57-59页
附录第59-61页
文献综述第61-68页
在校期间论文发表情况第68-69页
致谢第69页

 
 
论文编号BS514349,这篇论文共69
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