| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-19页 |
| 第一部分 文献综述 | 第19-43页 |
| 1 猪体细胞核移植国内外研究现状 | 第19-21页 |
| 2 异种体细胞核移植研究进展及存在问题 | 第21-27页 |
| 3 影响猪体细胞核移植效率的几个关键因素 | 第27-40页 |
| ·供体细胞的类型及准备方案 | 第27页 |
| ·胚胎重构策略 | 第27-35页 |
| ·供体细胞的细胞周期与受体卵母细胞胞质的状态是否相协调 | 第35-36页 |
| ·供体细胞重编程是否完全 | 第36-40页 |
| 4 研究的背景、目的和意义 | 第40-43页 |
| 第二部分 实验部分 | 第43-102页 |
| 第一章 体细胞培养体系的建立 | 第43-65页 |
| 第一节 猪体细胞培养体系的建立 | 第43-57页 |
| 1 材料与方法 | 第44-47页 |
| ·主要药品 | 第44页 |
| ·材料获取 | 第44-45页 |
| ·细胞传代培养方法 | 第45页 |
| ·冷冻保存及复苏 | 第45-46页 |
| ·细胞类型鉴定 | 第46页 |
| ·睾丸成纤维细胞组蛋白免疫荧光染色 | 第46页 |
| ·流式细胞仪分析细胞周期与组蛋白乙酰化水平 | 第46页 |
| ·统计分析 | 第46-47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-55页 |
| ·原代培养 | 第47-49页 |
| ·细胞冻存、解冻、复苏 | 第49页 |
| ·细胞类型鉴定 | 第49-50页 |
| ·细胞周期同期化与组蛋白乙酰化分析 | 第50-55页 |
| 3 讨论 | 第55-57页 |
| ·供体细胞培养体系的建立 | 第55页 |
| ·细胞同期化与组蛋白乙酰化 | 第55-56页 |
| ·细胞的增殖潜力和寿命 | 第56-57页 |
| 第二节 食蟹猴体细胞培养体系的建立 | 第57-65页 |
| 1 材料与方法 | 第57-59页 |
| ·主要药品 | 第57-58页 |
| ·材料获取 | 第58页 |
| ·细胞传代培养方法 | 第58页 |
| ·冷冻保存及复苏 | 第58页 |
| ·细胞类型鉴定 | 第58-59页 |
| ·细胞周期同期化 | 第59页 |
| ·核型分析 | 第59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-63页 |
| ·原代和传代培养 | 第59-60页 |
| ·细胞冻存、解冻、复苏 | 第60页 |
| ·细胞类型鉴定 | 第60-61页 |
| ·细胞周期同期化 | 第61-63页 |
| ·细胞核型分析 | 第63页 |
| 3 讨论 | 第63-65页 |
| 第二章 猪体细胞核移植体系的建立 | 第65-84页 |
| 第一节 普通猪体细胞核移植体系的初步建立 | 第65-74页 |
| 1 材料与方法 | 第66-69页 |
| ·主要药品及溶液 | 第66页 |
| ·卵母细胞的收集及体外成熟 | 第66页 |
| ·核移植 | 第66-67页 |
| ·融合/激活 | 第67-68页 |
| ·孤雌激活 | 第68页 |
| ·胚胎培养 | 第68页 |
| ·试验设计 | 第68-69页 |
| ·统计方法 | 第69页 |
| 2 试验结果 | 第69-72页 |
| ·极体偏移情况及盲吸法去核效率 | 第69页 |
| ·胎儿成纤维细胞和颗粒细胞核移植效率 | 第69-70页 |
| ·insulin对孤雌激活胚胎和颗粒细胞核移植胚胎发育能力的影响 | 第70-71页 |
| ·简易融合仪下巴马小型猪耳部成纤维细胞核移植胚胎和孤雌激活胚胎的发育能力 | 第71-72页 |
| 3 讨论 | 第72-74页 |
| 第二节 巴马小型猪体细胞核移植体系的建立 | 第74-84页 |
| 1 材料与方法 | 第75-76页 |
| ·主要药品及溶液 | 第75页 |
| ·卵母细胞的收集及体外成熟 | 第75页 |
| ·核移植 | 第75页 |
| ·融合/激活 | 第75页 |
| ·胚胎培养 | 第75页 |
| ·试验设计 | 第75-76页 |
| ·统计 | 第76页 |
| 2 试验结果 | 第76-81页 |
| ·巴马小型猪睾丸成纤维细胞不同细胞同期化方法对体细胞核移植胚胎发育能力的影响 | 第76页 |
| ·探讨高代巴马小型猪睾丸成纤维细胞核在去核卵母细胞中形态学重塑规律 | 第76-79页 |
| ·供体细胞类型和代数对于体细胞核移植胚胎发育能力的影响 | 第79-81页 |
| 3 讨论 | 第81-84页 |
| 第三章 PHA对孤雌激活和体细胞核移植胚胎发育的影响 | 第84-90页 |
| 1 材料与方法 | 第85-86页 |
| ·主要药品及溶液 | 第85页 |
| ·卵母细胞的收集及体外成熟 | 第85页 |
| ·核移植 | 第85页 |
| ·融合/激活 | 第85页 |
| ·孤雌激活 | 第85页 |
| ·胚胎培养 | 第85页 |
| ·试验设计 | 第85-86页 |
| ·统计 | 第86页 |
| 2 试验结果 | 第86-88页 |
| ·PHA对于化学激活孤雌激活胚胎发育能力的影响 | 第86页 |
| ·PHA对于电激活孤雌激活胚胎发育能力的影响 | 第86-87页 |
| ·PHA对于巴马小型猪体细胞核移植胚胎发育能力的影响 | 第87-88页 |
| 3 讨论 | 第88-90页 |
| 第四章 猪体细胞核移植胚胎移植方法的建立 | 第90-95页 |
| 1 材料 | 第90-91页 |
| ·主要药品及溶液 | 第90页 |
| ·卵母细胞的收集及体外成熟 | 第90页 |
| ·核移植 | 第90页 |
| ·融合/激活 | 第90-91页 |
| ·孤雌激活 | 第91页 |
| ·胚胎培养 | 第91页 |
| ·胚胎移植 | 第91页 |
| ·试验设计 | 第91页 |
| 2 结果 | 第91-93页 |
| 3 讨论 | 第93-95页 |
| 第五章 食蟹猴-猪异种体细胞核移植的初步研究 | 第95-102页 |
| 1 材料与方法 | 第96-99页 |
| ·主要药品及溶液 | 第96页 |
| ·卵母细胞的收集及体外成熟 | 第96页 |
| ·供体细胞准备 | 第96页 |
| ·核移植 | 第96-97页 |
| ·融合/激活 | 第97页 |
| ·胚胎培养 | 第97页 |
| ·试验设计 | 第97-99页 |
| 4 实验结果 | 第99-100页 |
| ·探讨新生食蟹猴耳部成纤维细胞在去核卵母细胞中核重塑的规律 | 第99页 |
| ·耳部成纤维细胞构建异种核移植胚胎的发育能力 | 第99页 |
| ·培养基对于异种核移植胚胎发育能力的影响 | 第99-100页 |
| 5 讨论 | 第100-102页 |
| 总结论 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-115页 |
| 附表 | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116-118页 |
| 攻读学位期间发表文章情况 | 第118页 |
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