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当前位置:教育论文中心首页--硕士论文--重组亚油酸异构酶在乳酸克鲁维酵母中表达条件的优化及微囊化
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重组亚油酸异构酶在乳酸克鲁维酵母中表达条件的优化及微囊化
 
     论文目录
 
摘要第3-4页
Abstract第4页
1 前言第11-20页
    1.1 共轭亚油酸第11页
    1.2 CLA的天然来源第11页
    1.3 CLA的生成第11-13页
        1.3.1 内源合成CLA第11-12页
        1.3.2 化学异构法生成CLA第12页
        1.3.3 微生物发酵法生成CLA第12-13页
    1.4 植物乳杆菌P-8第13页
    1.5 基因工程菌第13-15页
        1.5.1 原核系统表达亚油酸异构酶第14页
        1.5.2 真核系统表达亚油酸异构酶第14页
        1.5.3 真核系统表达优势第14-15页
        1.5.4 乳酸克鲁维酵母第15页
    1.6 亚油酸异构酶酶学性质的研究第15-16页
        1.6.1 酶的催化专一性第15-16页
        1.6.2 热对酶活性及稳定性的影响第16页
        1.6.3 pH对酶活性及稳定性的影响第16页
    1.7 酶的稳定性改善第16-17页
    1.8 研究目的、意义和研究内容第17-19页
        1.8.1 研究目的、意义第17-18页
        1.8.2 研究内容第18-19页
    1.9 技术路线第19-20页
2 试验材料与方法第20-37页
    2.1 试验材料第20-24页
        2.1.1 菌和质粒第20-21页
        2.1.2 培养基第21页
        2.1.3 酶和试剂第21-23页
        2.1.4 引物第23页
        2.1.5 仪器第23-24页
    2.2 试验方法第24-36页
        2.2.1 克隆载体的构建第24-28页
        2.2.2 表达载体的构建第28页
        2.2.3 酵母细胞的转化第28-30页
        2.2.4 表达条件的优化第30-32页
        2.2.5 发酵上清液的纯化第32-33页
        2.2.6 重组亚油酸异构酶酶含量的测定第33-34页
        2.2.7 重组亚油酸异构酶酶活力测定第34-35页
        2.2.8 SDS-PAGE检测第35页
        2.2.9 微囊化第35-36页
    2.3 数据处理第36-37页
3 结果与分析第37-54页
    3.1 构建克隆载体第37-39页
        3.1.1 植物乳杆菌P-8基因组DNA的提取第37页
        3.1.2 亚油酸异构酶基因的PCR第37-38页
        3.1.3 阳性鉴定第38页
        3.1.4 双酶切第38-39页
    3.2 鉴定转化第39-40页
        3.2.1 菌落PCR鉴定第39页
        3.2.2 双酶切鉴定第39-40页
        3.2.3 测序鉴定第40页
    3.3 酵母的生长曲线第40页
    3.4 蛋白标准曲线第40-41页
    3.5 CLA标准曲线绘制第41-42页
    3.6 表达条件的优化第42-47页
        3.6.1 时间对酶活的影响第42页
        3.6.2 温度对酶活的影响第42-43页
        3.6.3 培养基pH对酶活的影响第43页
        3.6.4 培养基的不同碳源对酶活的影响第43-44页
        3.6.5 接种量对酶活力的影响第44页
        3.6.6 装瓶量对酶活力的影响第44-45页
        3.6.7 摇床转速对酶活力的影响第45页
        3.6.8 正交试验结果第45-47页
        3.6.9 最佳条件表达第47页
    3.7 发酵液的SDS-PAGE检测第47-48页
    3.8 发酵液的浓缩与纯化第48-50页
        3.8.1 梯度浓缩第48页
        3.8.2 层析纯化结果第48-49页
        3.8.3 纯化后的SDS-PAGE第49页
        3.8.4 纯化前后酶活力的测定第49-50页
    3.9 微囊化第50-54页
        3.9.1 海藻酸钠微囊化第50页
        3.9.2 聚电解质微囊化第50-51页
        3.9.3 两种方法比较第51-54页
4 讨论第54-55页
5 结论第55页
6 创新点第55-56页
致谢第56-57页
参考文献第57-62页
作者简介第62页

 
 
论文编号BS2566605,这篇论文共62
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