摘要 | 第3-5页 |
abstract | 第5-6页 |
缩略词及中英文对照 | 第7-11页 |
1 前言 | 第11-17页 |
1.1 香蕉枯萎病生物防治的研究概况 | 第11-12页 |
1.1.1 香蕉枯萎病的发生与危害情况 | 第11页 |
1.1.2 香蕉枯萎病的生物防治 | 第11-12页 |
1.2 芽孢杆菌 | 第12-14页 |
1.2.1 芽孢杆菌生防作用的研究进展 | 第12-13页 |
1.2.2 芽孢杆菌对植物病原菌的抑制作用机制 | 第13-14页 |
1.3 脂肽类抗生素研究概况 | 第14-17页 |
1.3.1 非核糖体肽类抗生素类型及结构特点 | 第14-15页 |
1.3.2 Surfactin家族 | 第15页 |
1.3.3 Iturin家族 | 第15-16页 |
1.3.4 Fengycin家族 | 第16页 |
1.3.5 脂肽类抗生素的应用 | 第16-17页 |
1.4 研究目的与意义 | 第17页 |
2 材料与方法 | 第17-31页 |
2.1 供试材料 | 第17-19页 |
2.1.1 供试生防菌株 | 第17页 |
2.1.2 供试病原菌 | 第17页 |
2.1.3 质粒载体 | 第17页 |
2.1.4 主要仪器与设备 | 第17-18页 |
2.1.5 主要试剂及溶液配制 | 第18-19页 |
2.2 试验方法 | 第19-31页 |
2.2.1 菌株G-7 抑菌活性的测定 | 第19-20页 |
2.2.1.1 菌株G-7 与Foc4对峙培养 | 第19页 |
2.2.1.2 菌株G-7 对Foc4菌丝体生长的抑制作用 | 第19-20页 |
2.2.1.3 菌株G-7 对Foc4孢子萌发的抑制作用 | 第20页 |
2.2.1.4 菌株G-7 活体抑菌活性的测定 | 第20页 |
2.2.2 菌株G-7 生长曲线的测定 | 第20页 |
2.2.3 拮抗相关基因的筛选 | 第20页 |
2.2.4 itu D-1、lpa-14 的克隆 | 第20-26页 |
2.2.4.1 菌株G-7 的培养 | 第20-21页 |
2.2.4.2 菌株G-7 基因组总DNA的提取 | 第21-22页 |
2.2.4.3 PCR引物设计与合成 | 第22页 |
2.2.4.4 itu D-1、lpa-14 基因的扩增 | 第22-23页 |
2.2.4.5 PCR产物的回收 | 第23-24页 |
2.2.4.6 宿主菌E.coli DH5α 感受态细胞的制备 | 第24页 |
2.2.4.7 回收产物的连接转化 | 第24页 |
2.2.4.8 连接产物转化大肠杆菌(E.coli DH5α)感受态细胞 | 第24-25页 |
2.2.4.9 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第25-26页 |
2.2.4.10 生物信息学分析 | 第26页 |
2.2.5 菌株G-7 与Foc4拮抗前后itu D-1、lpa-14 的相对表达 | 第26-31页 |
2.2.5.1 菌株G-7 的预处理 | 第26-27页 |
2.2.5.2 菌株G-7 的总RNA提取 | 第27-29页 |
2.2.5.3 菌株G-7 c DNA第一链的合成 | 第29页 |
2.2.5.4 Foc4 RNA提取 | 第29-30页 |
2.2.5.5 Foc4 c DNA第一链的合成 | 第30页 |
2.2.5.6 Real-time PCR引物设计 | 第30-31页 |
2.2.5.7 Real-time PCR反应 | 第31页 |
3 结果与分析 | 第31-43页 |
3.1 菌株G-7 与Foc4对峙培养 | 第31-32页 |
3.2 菌株G-7 的抑菌活性测定 | 第32-33页 |
3.2.1 菌株G-7 离体抑菌活性测定 | 第32-33页 |
3.2.2 菌株G-7 活体抑菌活性的测定 | 第33页 |
3.3 菌株G-7 的生长曲线测定 | 第33-34页 |
3.4 itu D-1、lpa-14 基因的克隆 | 第34-36页 |
3.4.1 菌株G-7 基因组DNA的提取 | 第34页 |
3.4.2 菌株G-7 拮抗相关基因的PCR扩增 | 第34-35页 |
3.4.3 PCR产物的克隆与鉴定 | 第35-36页 |
3.5 生物信息学分析 | 第36-42页 |
3.5.1 itu D-1 和lpa-14 物理性质分析 | 第36页 |
3.5.2 itu D-1 和lpa-14 同源性比对及蛋白功能域预测分析 | 第36-37页 |
3.5.3 itu D-1 和lpa-14 编码蛋白的Coli分区 | 第37-38页 |
3.5.4 itu D-1 和lpa-14 编码蛋白二级结构预测分析 | 第38-39页 |
3.5.5 itu D-1 和lpa-14 编码蛋白三级结构预测分析 | 第39-40页 |
3.5.6 itu D-1 和lpa-14 氨基酸序列系统进化树分析 | 第40-42页 |
3.6 菌株G-7 与Foc4拮抗前后itu D-1、lpa-14 相对表达量分析 | 第42-43页 |
4 结论与讨论 | 第43-47页 |
4.1 菌株G-7 的离体活性的测定 | 第43-44页 |
4.2 菌株G-7 拮抗相关基因的克隆 | 第44-46页 |
4.3 菌株G-7 与Foc4拮抗前后itu D-1、lpa-14 相对表达量分析 | 第46-47页 |
致谢 | 第47-48页 |
参考文献 | 第48-54页 |
附录A:lpa-14 和itu D-1 核苷酸序列 | 第54-55页 |