致谢 | 第4-5页 |
摘要 | 第5-7页 |
Abstract | 第7-9页 |
第一章 绪论 | 第13-34页 |
1.1 病原菌免疫逃逸机制概述 | 第13-15页 |
1.2 病原菌抑制宿主细胞凋亡的研究进展 | 第15-19页 |
1.2.1 抑制细胞色素c释放 | 第16-17页 |
1.2.2 激活细胞存活信号通路 | 第17-18页 |
1.2.3 阻止Caspase激活 | 第18-19页 |
1.3 逃逸宿主补体杀伤 | 第19-24页 |
1.3.1 调节补体激活前端反应 | 第21-22页 |
1.3.2 调节C3转化酶 | 第22页 |
1.3.3 调节C5转化酶 | 第22-23页 |
1.3.4 调控补体调节因子 | 第23-24页 |
1.3.5 调控补体受体 | 第24页 |
1.4 迟缓爱德华氏菌致病机理研究进展 | 第24-28页 |
1.4.1 三型分泌系统和六型分泌系统 | 第25-26页 |
1.4.2 双组份系统 | 第26页 |
1.4.3 铁吸收调控蛋白 | 第26页 |
1.4.4 EthR调节因子 | 第26-27页 |
1.4.5 密度感应系统 | 第27页 |
1.4.6 抑制细胞凋亡 | 第27页 |
1.4.7 抑制补体 | 第27-28页 |
1.4.8 其他毒力因子 | 第28页 |
1.5 C型凝集素研究进展 | 第28-32页 |
1.5.1 凝集素概述 | 第28-30页 |
1.5.2 硬骨鱼类凝集素概述 | 第30-32页 |
1.5.3 病原菌逃逸凝集素识别研究现状 | 第32页 |
1.6 本论文拟解决的科学问题 | 第32-33页 |
1.7 本论文的研究目的和意义 | 第33-34页 |
第二章 迟缓爱德华氏菌抑制细胞凋亡的研究 | 第34-55页 |
2.1 前言 | 第34页 |
2.2 材料和方法 | 第34-40页 |
2.2.1 伦理规范 | 第34页 |
2.2.2 实验用鱼 | 第34-35页 |
2.2.3 实验仪器 | 第35页 |
2.2.4 胞内细菌增殖实验 | 第35页 |
2.2.5 细胞凋亡实验 | 第35-36页 |
2.2.6 转录组分析 | 第36页 |
2.2.7 Quantitative real time reverse transcription-PCR(qRT-PCR)分析 | 第36页 |
2.2.8 pFech、pPrx3、pBrms1a和pIvns1a过量表达载体构建 | 第36-37页 |
2.2.9 基因过量表达实验 | 第37页 |
2.2.10 基因RNA干扰实验 | 第37-38页 |
2.2.11 基因过量表达和干扰后Caspase 3 酶活检测 | 第38页 |
2.2.12 统计分析 | 第38-40页 |
2.3 结果 | 第40-53页 |
2.3.1 迟缓爱德华氏菌感染ZF4细胞的增殖曲线 | 第40-41页 |
2.3.2 感染迟缓爱德华氏菌后的ZF4细胞的转录组分析 | 第41-43页 |
2.3.3 感染迟缓爱德华氏菌后ZF4的细胞凋亡状态 | 第43-44页 |
2.3.4 迟缓爱德华氏菌感染后细胞凋亡相关基因的表达 | 第44-46页 |
2.3.5 斑马鱼细胞凋亡相关基因的过量表达对在迟缓爱德华氏菌感染的影响 | 第46-49页 |
2.3.6 斑马鱼细胞凋亡相关基因的干扰对迟缓爱德华氏菌感染的影响 | 第49-50页 |
2.3.7 Fech、Prx3、Brms1a和Ivns1a的过量表达和mRNA干扰对Caspase 3 酶活性的影响 | 第50-53页 |
2.4 讨论 | 第53-55页 |
第三章 迟缓爱德华氏菌抗血清杀伤机制的研究 | 第55-73页 |
3.1 前言 | 第55页 |
3.2 材料与方法 | 第55-60页 |
3.2.1 菌株 | 第55页 |
3.2.2 实验用鱼 | 第55-56页 |
3.2.3 实验仪器 | 第56页 |
3.2.4 迟缓爱德华氏菌胞外蛋白制备 | 第56页 |
3.2.5 双向电泳(2-DE) | 第56-57页 |
3.2.6 质谱分析 | 第57页 |
3.2.7 Sip1序列鉴定 | 第57页 |
3.2.8 重组Sip1(rSip1)的表达和纯化 | 第57-58页 |
3.2.9 rSip1多克隆抗体制备 | 第58页 |
3.2.10 rSip1的酶活检测 | 第58页 |
3.2.11 Sip1敲除株构建 | 第58-59页 |
3.2.12 体内感染实验 | 第59页 |
3.2.13 血清杀伤实验 | 第59-60页 |
3.2.14 疫苗实验 | 第60页 |
3.2.15 统计分析 | 第60页 |
3.3 结果 | 第60-71页 |
3.3.1 Sip1的筛选 | 第60-62页 |
3.3.2 Sip1的特征分析 | 第62-65页 |
3.3.3 rSip1的酶活检测 | 第65-67页 |
3.3.4 TXDsip1对牙鲆的毒力检测 | 第67-68页 |
3.3.5 敲除株的抗血清能力检测 | 第68页 |
3.3.6 rSip1对抗血清杀伤能力的影响 | 第68-69页 |
3.3.7 rSip1多克隆抗体对迟缓爱德华氏菌抗血清杀伤能力的影响 | 第69-70页 |
3.3.8 rSip1的免疫保护效应 | 第70-71页 |
3.4 讨论 | 第71-73页 |
第四章 迟缓爱德华氏菌逃逸C型凝集素的研究 | 第73-91页 |
4.1 前言 | 第73页 |
4.2 材料与方法 | 第73-79页 |
4.2.1 细菌与病毒 | 第73-74页 |
4.2.2 实验用鱼 | 第74页 |
4.2.3 实验仪器 | 第74页 |
4.2.4 CsCTL1序列分析 | 第74页 |
4.2.5 CsCTL1组织特异性表达 | 第74-75页 |
4.2.6 CsCTL1在病原刺激后的组织表达 | 第75页 |
4.2.7 重组蛋白表达和纯化 | 第75-76页 |
4.2.8 凝集实验 | 第76页 |
4.2.9 rCsCTL1和rCsCTL1M与细菌的结合实验 | 第76-77页 |
4.2.10 头肾单核细胞提取 | 第77页 |
4.2.11 吞噬实验 | 第77-78页 |
4.2.12 呼吸爆发和酸性磷酸酶检测 | 第78页 |
4.2.13 体内感染实验 | 第78-79页 |
4.2.14 统计分析 | 第79页 |
4.3 结果 | 第79-89页 |
4.3.1 CsCTL1序列分析 | 第79页 |
4.3.2 CsCTL1组织表达 | 第79-81页 |
4.3.3 CsCTL1在病原刺激后的组织表达 | 第81-83页 |
4.3.4 rCsCTL1和rCsCTL1M对细菌的凝集作用 | 第83-85页 |
4.3.5 rCsCTL1和rCsCTL1M与细菌的结合 | 第85页 |
4.3.6 rCsCTL1和rCsCTL1M对头肾单核细胞吞噬的影响 | 第85-86页 |
4.3.7 rCsCTL1和rCsCTL1M对头肾单核细胞呼吸爆发和酸性磷酸酶活性的影响 | 第86-88页 |
4.3.8 rCsCTL1和rCsCTL1M对体内细菌和病毒感染的影响 | 第88-89页 |
4.4 讨论 | 第89-91页 |
结论 | 第91-93页 |
创新点 | 第93-94页 |
对后续工作的展望 | 第94-95页 |
参考文献 | 第95-112页 |
附录 | 第112-114页 |
作者简历 | 第114-115页 |
攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第115页 |