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纤维素酶产生菌的筛选及纤维素酶基因在家蚕中的表达研究
 
     论文目录
 
摘要第1-16页
Abstract第16-19页
主要英文缩写与译名第19-20页
引言第20-22页
第一章 文献综述第22-59页
 第一节 纤维素与纤维素酶第22-43页
  1 纤维素的特性第22-25页
   ·纤维素的理化性质第22-24页
   ·纤维素的分布第24页
   ·纤维素的降解第24-25页
  2 纤维素酶的来源及其酶学性质第25-29页
   ·纤维素酶的来源第25-27页
   ·纤维素酶的酶学性质第27-29页
  3 纤维素酶的组成、结构及其降解机理第29-34页
   ·纤维素酶的组成第29-30页
   ·纤维素酶的结构第30-31页
   ·纤维素酶的作用机制第31-34页
  4 纤维素酶产生菌的选育第34-37页
   ·自然筛选第34-35页
   ·常规理化诱变第35页
   ·基因工程第35-36页
   ·基因定位突变技术第36-37页
   ·细胞融合技术第37页
  5 纤维素酶基因的克隆与表达第37-39页
  6 纤维素酶的应用第39-43页
   ·纤维素酶在纺织工业中的应用第39页
   ·纤维素酶在食品工业中的应用第39-40页
   ·纤维素酶在酿酒工业中的应用第40页
   ·纤维素酶在造纸工业中的应用第40-41页
   ·纤维素酶在饲料工业中的应用第41-42页
   ·纤维素酶在医药工业中的应用第42页
   ·纤维素酶在其他领域中的应用第42-43页
 第二节 杆状病毒表达系统第43-51页
  1 杆状病毒的生物学特性第43-45页
  2 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的建立及发展第45-47页
  3 家蚕BmNPV/Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的优缺点第47-49页
  4 家蚕BmNPV/Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的应用前景第49-51页
 第三节 家蚕转基因第51-56页
  1 转基因方法第51-52页
  2 转基因载体第52-54页
  3 常用报告基因与启动子第54-55页
  4 转基因家蚕的表达检测第55页
  5 家蚕转基因的应用及存在问题第55-56页
 第四节 本研究的主要内容及意义第56-58页
 第五节 技术路线第58-59页
第二章 研究工作报告第59-148页
 第一节 纤维素酶产生菌的筛选、鉴定及特性分析第59-85页
  1 实验材料第59-63页
   ·土壤第59页
   ·克隆宿主菌第59-60页
   ·主要试剂及其配制第60-63页
   ·试剂盒第63页
   ·DNA测序第63页
   ·主要实验仪器第63页
  2 实验方法第63-73页
   ·菌种筛选第63-64页
   ·刚果红染色第64页
   ·菌种保存第64页
   ·纤维素酶的制备第64页
   ·酶活性测定第64-66页
   ·蛋白质浓度测定第66页
   ·酶特性分析第66-68页
   ·16S rRNA、ITS及纤维素酶基因序列分析第68-73页
   ·统计分析第73页
  3 实验结果第73-82页
   ·纤维素酶产生菌的分离第73页
   ·菌种鉴定第73-78页
   ·筛选菌分泌的纤维素酶特性第78-80页
   ·纤维素酶基因序列分析第80-82页
  4 讨论第82-85页
 第二节 微波与紫外复合诱变提高绿色木霉纤维素酶活性第85-97页
  1 实验材料第85-87页
   ·实验菌种第85页
   ·克隆宿主菌第85页
   ·主要试剂及其配制第85-86页
   ·试剂盒第86页
   ·DNA测序第86页
   ·主要试验仪器第86-87页
  2 实验方法第87-90页
   ·菌种培养第87页
   ·酶液提取、酶活测定及酶特性分析第87-88页
   ·单孢子悬浮液的制备第88页
   ·微波处理第88页
   ·紫外处理第88页
   ·绿色木霉突变株的筛选第88页
   ·突变菌株的遗传稳定性研究第88页
   ·纤维素酶基因的分析第88-90页
   ·统计分析第90页
  3 实验结果第90-96页
   ·CMCase的特性第90-91页
   ·绿色木霉的突变及突变株的筛选第91-92页
   ·突变株的纤维素酶活性及遗传稳定性第92-93页
   ·纤维素酶基因的分析第93-96页
  4 讨论第96-97页
 第三节 绿色木霉内切葡聚糖酶基因的克隆及序列分析第97-116页
  1 实验材料第97-98页
   ·实验菌种第97页
   ·克隆宿主菌第97页
   ·LB固体/液体培养基第97-98页
   ·基因克隆用试剂第98页
   ·试剂盒第98页
   ·DNA测序第98页
   ·主要试验仪器第98页
  2 实验方法第98-104页
   ·绿色木霉基因组提取第98页
   ·引物设计第98-99页
   ·基因克隆第99-104页
   ·测序及分析第104页
  3 实验结果第104-114页
   ·绿色木霉基因组的提取第104页
   ·EG Ⅰ基因的克隆及序列分析第104-107页
   ·EG Ⅲ基因的克隆及序列分析第107-109页
   ·EG Ⅳ基因的克隆及序列分析第109-112页
   ·EG Ⅴ基因的克隆及序列分析第112-114页
  4 讨论第114-116页
 第四节 绿色木霉内切葡聚糖酶基因在家蚕中的表达第116-135页
  1 实验材料第117-120页
   ·内切葡聚糖酶基因第117页
   ·克隆载体第117页
   ·克隆宿主菌第117页
   ·表达宿主菌第117页
   ·限制性内切酶第117页
   ·试剂盒第117-118页
   ·抗生素、显色剂及诱导剂第118页
   ·家蚕细胞第118页
   ·家蚕第118页
   ·培养基第118页
   ·SDS-PAGE主要试剂及其配制第118-119页
   ·Western blotting主要试剂配制第119-120页
  2 实验方法第120-129页
   ·克隆与表达策略第120页
   ·引物设计第120-121页
   ·PCR扩增第121-122页
   ·双酶切第122-123页
   ·目的片段与克隆载体的连接第123页
   ·热激转化感受态细胞的制备第123页
   ·连接产物转化E.coli TG 1感受态细胞第123页
   ·含pFast重组质粒的阳性克隆子的鉴定第123页
   ·pFast重组质粒的提取第123-124页
   ·pFast重组质粒转化DH10Bac~(TM) E.coli第124页
   ·mBacmid重组质粒的提取第124页
   ·含mBacmid重组质粒的阳性克隆子的鉴定第124-125页
   ·家蚕细胞的培养第125页
   ·家蚕的饲养第125页
   ·mBacmid重组杆状病毒的构建第125-126页
   ·重组内切葡聚糖酶基因的表达第126页
   ·Western blotting第126-128页
   ·酶液提取与活性检测第128页
   ·酶特性分析及统计处理第128-129页
  3 实验结果第129-134页
   ·重组病毒质粒的构建第129-130页
   ·重组病毒的构建第130-131页
   ·在家蚕细胞和幼虫中表达重组内切葡聚糖酶基因第131-132页
   ·酶活性分析第132-134页
  4 讨论第134-135页
 第五节 纤维素酶转基因载体的构建及细胞转染第135-148页
  1 实验材料第135-137页
   ·克隆宿主菌第135页
   ·重组质粒第135-136页
   ·限制性内切酶第136页
   ·PCR试剂盒、割胶回收试剂盒以及连接试剂盒第136页
   ·质粒抽提试剂盒第136页
   ·引物设计第136页
   ·培养基第136-137页
   ·抗生素第137页
  2 实验方法第137-142页
   ·构建策略第137页
   ·质粒抽提第137-138页
   ·IE-EG Ⅳ-SV40的克隆第138-139页
   ·IE-GFP-SV40的克隆第139页
   ·IE-EG Ⅳ-SV40与IE-GFP-SV40的末端加A反应克隆第139页
   ·IE-EG Ⅳ-SV40与IE-GFP-SV40的TA克隆第139-140页
   ·IE-Neo-SV40的克隆第140页
   ·IE-EG Ⅳ-SV40与pXL-Bac Ⅱ的BglⅡ/Kpn Ⅰ双酶切第140页
   ·IE-EG Ⅳ-SV40与pXL-Bac Ⅱ的连接第140页
   ·IE-EG Ⅳ-SV40与pXL-Bac Ⅱ连接产物的转化及PCR鉴定第140页
   ·IE-GFP-SV40与pXL/EG Ⅳ的Xho Ⅰ/EcoR Ⅴ双酶切第140页
   ·IE-GFP-SV40与pXL/EG Ⅳ的连接第140-141页
   ·IE-GFP-SV40与pXL/EG Ⅳ连接产物的转化及PCR鉴定第141页
   ·pXL/EG Ⅳ/GFP EcoR Ⅰ单酶切第141页
   ·pXL/EG Ⅳ/GFP EcoR Ⅰ单酶切回收产物的去磷酸化处理第141页
   ·pXL/EG Ⅳ/GFP与IE-Neo-SV40的连接第141页
   ·pXL/EG Ⅳ/GFP与IE-Neo-SV40连接产物的转化及酶切鉴定第141页
   ·家蚕细胞的培养第141页
   ·细胞转染第141-142页
  3 实验结果第142-145页
   ·IE-EG Ⅳ-SV40和IE-GFP-SV40的克隆第142-143页
   ·IE-EG Ⅳ-SV40与pXL-Bac Ⅱ的Bgl Ⅱ/Kpn Ⅰ双酶切及其连接第143页
   ·IE-GFP-SV40与pXL/EG Ⅳ的Xho Ⅰ/EcoR Ⅴ双酶切及其连接第143-144页
   ·IE-Neo-SV40与pXL/EG Ⅳ/GFP的EcoR Ⅰ单酶切及其连接第144-145页
   ·细胞的瞬时转染与稳定转染第145页
  4 讨论第145-148页
第三章 主要结论、创新点及后续研究展望第148-150页
 1. 主要结论第148-149页
 2. 创新点第149页
 3. 后续研究展望第149-150页
参考文献第150-172页
附录第172-173页
发表论文第173-177页
授权国家发明专利第177-178页
基因登录第178页
参与或主持的课题第178-179页
国际交流及会议第179-180页
后记第180页

 
 
论文编号BS51205,这篇论文共180
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