| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第15-33页 |
| 1.1 植物灰霉病和灰葡萄孢菌 | 第15-18页 |
| 1.2 隔膜蛋白septin | 第18-25页 |
| 1.2.1 Septin的发现 | 第18-19页 |
| 1.2.2 septin的结构组成 | 第19-20页 |
| 1.2.3 Septin的组装调控 | 第20-22页 |
| 1.2.4 Septin具有多种功能 | 第22-25页 |
| 1.3 ROS及cAMP信号转导的研究进展 | 第25-30页 |
| 1.3.1 ROS信号转导 | 第25-28页 |
| 1.3.2 cAMP信号转导 | 第28-30页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第30-33页 |
| 第二章 灰葡萄孢菌septin基因鉴定及定向敲除 | 第33-79页 |
| 2.1 实验材料 | 第33-35页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第33-34页 |
| 2.1.2 供试载体 | 第34页 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 | 第34-35页 |
| 2.1.4 实验药品及试剂 | 第35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-60页 |
| 2.2.1 培养基配制 | 第35-38页 |
| 2.2.2 小量基因组DNA快速提取 | 第38-39页 |
| 2.2.3 质粒提取 | 第39页 |
| 2.2.4 大肠杆菌超级感受态制备 | 第39-40页 |
| 2.2.5 DNA片段的PCR扩增 | 第40-41页 |
| 2.2.6 DNA凝胶回收 | 第41页 |
| 2.2.7 末端平滑DNA片段的 3'末端加“A”反应 | 第41-42页 |
| 2.2.8 质粒酶切连接及大肠杆菌转化 | 第42-43页 |
| 2.2.9 体外重组克隆载体构建 | 第43-46页 |
| 2.2.10 农杆菌电击感受态细胞制备及转化 | 第46页 |
| 2.2.11 农杆菌介导的灰葡萄孢菌遗传转化 | 第46-47页 |
| 2.2.12 Total RNA提取 | 第47-50页 |
| 2.2.13 RT-PCR | 第50-51页 |
| 2.2.14 Southern Blot | 第51-60页 |
| 2.3 结果与分析 | 第60-77页 |
| 2.3.1 灰葡萄孢菌Septin基因预测分析 | 第60-64页 |
| 2.3.2 灰葡萄孢菌BcSEP4基因敲除及遗传互补载体构建 | 第64-70页 |
| 2.3.3 灰葡萄孢菌BcSEP4突变体及回补转化子筛选 | 第70-73页 |
| 2.3.4 灰葡萄孢菌BcSEP3、BcSEP5、BcSEP6敲除载体构建 | 第73-75页 |
| 2.3.5 灰葡萄孢菌BcSEP3、BcSEP5、BcSEP6突变体筛选 | 第75-77页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第77-79页 |
| 第三章 灰葡萄孢菌BcSep4生物学功能解析 | 第79-102页 |
| 3.1 实验材料 | 第79页 |
| 3.1.1 供试菌株 | 第79页 |
| 3.1.2 植物材料 | 第79页 |
| 3.1.3 主要仪器和设备 | 第79页 |
| 3.1.4 实验药品及试剂 | 第79页 |
| 3.2 实验方法 | 第79-82页 |
| 3.2.1 培养基配制 | 第79-80页 |
| 3.2.2 灰葡萄孢菌培养 | 第80页 |
| 3.2.3 进化分析 | 第80页 |
| 3.2.4 逆境处理 | 第80页 |
| 3.2.5 人工诱导灰葡萄孢菌萌发生长及侵染结构形成 | 第80-81页 |
| 3.2.6 洋葱表皮侵染 | 第81页 |
| 3.2.7 致病性分析 | 第81-82页 |
| 3.2.8 台盼蓝染色 | 第82页 |
| 3.2.9 数据分析 | 第82页 |
| 3.3 结果与分析 | 第82-98页 |
| 3.3.1 Sep4在不同物种间进化保守 | 第82-84页 |
| 3.3.2 灰葡萄孢菌BcSep4调控无性繁殖 | 第84-86页 |
| 3.3.3 灰葡萄孢菌BcSep4影响菌核形成 | 第86-87页 |
| 3.3.4 灰葡萄孢菌BcSep4参与调控芽管发育 | 第87-89页 |
| 3.3.5 灰葡萄孢菌孢子萌发中BcSep4参与逆境响应 | 第89-92页 |
| 3.3.6 BcSep4是灰葡萄孢菌柔性生长和侵染结构形成所必需的 | 第92-94页 |
| 3.3.7 BcSep4是灰葡萄孢菌的致病决定因子 | 第94-96页 |
| 3.3.8 BcSep4参与灰葡萄孢菌胞内物质运输和分泌 | 第96-98页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第98-102页 |
| 第四章 灰葡萄孢菌BcSep4亚细胞定位 | 第102-110页 |
| 4.1 实验材料 | 第102-103页 |
| 4.1.1 供试菌株 | 第102页 |
| 4.1.2 供试载体 | 第102-103页 |
| 4.1.3 主要仪器和设备 | 第103页 |
| 4.1.4 实验药品及试剂 | 第103页 |
| 4.2 实验方法 | 第103-104页 |
| 4.2.1 载体构建 | 第103-104页 |
| 4.2.2 灰葡萄孢菌培养及显微观察 | 第104页 |
| 4.2.3 洋葱表皮侵染观察 | 第104页 |
| 4.3 结果与分析 | 第104-108页 |
| 4.3.1 BcSep4-GFP融合载体构建及遗传转化 | 第104-105页 |
| 4.3.2 BcSep4调控灰葡萄孢菌侵染结构形成与微曲面形成相关 | 第105-107页 |
| 4.3.3 BcSep4介导灰葡萄孢菌致病侵入 | 第107-108页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第108-110页 |
| 第五章 ROS/c AMP信号途径调控BcSep4介导病原真菌侵染结构的形成 | 第110-119页 |
| 5.1 实验材料 | 第110页 |
| 5.1.1 供试菌株 | 第110页 |
| 5.1.2 主要仪器和设备 | 第110页 |
| 5.1.3 实验药品及试剂 | 第110页 |
| 5.2 实验方法 | 第110-111页 |
| 5.2.1 NBT检测ROS的产生 | 第110-111页 |
| 5.2.2 DPI与cAMP处理 | 第111页 |
| 5.3 结果与分析 | 第111-116页 |
| 5.3.1 BcSep4介导侵染结构形成过程受ROS信号调控 | 第111-114页 |
| 5.3.2 BcSep4可能位于cAMP信号传导下游 | 第114-116页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第116-119页 |
| 第六章 灰葡萄孢菌核心septins组分BcSep3/4/5/6 的生物学功能解析 | 第119-141页 |
| 6.1 实验材料 | 第119-120页 |
| 6.1.1 供试菌株 | 第119页 |
| 6.1.2 供试载体 | 第119-120页 |
| 6.1.3 植物材料 | 第120页 |
| 6.1.4 主要仪器和设备 | 第120页 |
| 6.1.5 实验药品及试剂 | 第120页 |
| 6.2 实验方法 | 第120-123页 |
| 6.2.1 酵母转化 | 第120-123页 |
| 6.3 结果与分析 | 第123-137页 |
| 6.3.1 灰葡萄孢菌核心septins组分进化保守 | 第123-126页 |
| 6.3.2 灰葡萄孢菌核心septins组分参与调控营养生长 | 第126-128页 |
| 6.3.3 灰葡萄孢菌核心septins组分影响无性繁殖 | 第128-130页 |
| 6.3.4 灰葡萄孢菌核心septins组分在分隔形成中发挥功能 | 第130-131页 |
| 6.3.5 灰葡萄孢菌核心septins组分是致病所必需的 | 第131-132页 |
| 6.3.6 灰葡萄孢菌核心septins组分是侵染结构发育所必需的 | 第132-133页 |
| 6.3.7 灰葡萄孢菌核心septins组分亚细胞定位 | 第133-137页 |
| 6.4 小结与讨论 | 第137-141页 |
| 结论 | 第141-143页 |
| 参考文献 | 第143-159页 |
| 附录 | 第159-167页 |
| 1. 引物表列表 | 第159-162页 |
| 2. 不同物种中Sep4列表 | 第162-163页 |
| 3. 不同物种中septin列表 | 第163-164页 |
| 4. 灰葡萄孢菌优化GFP表达部分载体序列 | 第164-167页 |
| 作者简介及科研成果 | 第167-169页 |
| 致谢 | 第169-170页 |
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