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核盘菌菌核形成相关蛋白Ss-Sl2功能研究
 
     论文目录
 
摘要第1-10页
ABSTRACT第10-14页
第一章 文献综述第14-36页
 1 核盘菌研究进展第14-17页
   ·核盘菌分类地位及其危害第14页
   ·核盘菌生活史与病害循环第14-15页
   ·核盘菌致病机理第15-16页
   ·菌核病防治第16-17页
 2 核盘菌菌核形成及其机理第17-25页
   ·菌核的结构第17-19页
   ·菌核形成过程第19-20页
   ·菌核形成相关因子第20-25页
     ·环境相关因子第20-21页
     ·细胞内信号转导途径第21-22页
     ·蛋白磷酸酶第22-23页
     ·凝聚素类蛋白第23-25页
 3 真菌遗传转化研究进展第25-27页
   ·PEG介导的真菌遗传转化第25页
   ·限制性内切酶介导的遗传转化第25-26页
   ·根癌农杆菌介导的真菌遗传转化研究进展第26-27页
   ·核盘菌遗传转化研究进展第27页
 4 基因功能分析策略第27-33页
   ·RNAi技术在基因功能研究中的应用第27-29页
     ·RNAi的发现第27-28页
     ·RNAi作用原理第28页
   4 1.3 RNAi在真菌基因功能研究中的应用第28-29页
   ·蛋白质亚细胞定位方法第29-30页
     ·绿色荧光蛋白定位第29-30页
     ·免疫胶体金电镜技术第30页
   ·互作蛋白的筛选与鉴定方法第30-33页
     ·酵母双杂交第30-32页
     ·免疫共沉淀第32-33页
     ·双分子荧光互补第33页
 5 本研究的目的与意义第33-36页
第二章 农杆菌介导的核盘菌菌丝转化体系的建立第36-47页
 1 材料与方法第36-40页
   ·材料第36-37页
     ·菌株及培养方法第36-37页
     ·质粒及载体第37页
     ·抗生素、酶及其它试剂第37页
   ·方法第37-40页
     ·农杆菌介导的核盘菌菌丝转化方法第37-38页
     ·核盘菌总基因组DNA的提取第38页
     ·转化子的PCR鉴定和测序分析第38页
     ·转化子无性阶段的稳定性分析第38页
     ·转化子有性阶段的稳定性分析第38-39页
     ·转化子单孢分离物HPH基因PCR验证第39页
     ·转化子单孢分离物HPH基因Souhthern杂交分析第39-40页
 2 结果与分析第40-44页
   ·农杆菌介导的核盘菌菌丝转化第40-41页
   ·转化子的PCR鉴定和测序结果分析第41-42页
   ·转化子稳定性分析第42-44页
     ·转化子无性阶段稳定性分析第42页
     ·转化子有性阶段稳定性分析第42-43页
     ·转化子单孢分离物HPH基因PCR验证第43-44页
     ·转化子单孢分离物HPH基因Southern杂交分析第44页
 3 结论与讨论第44-47页
   ·结论第44页
   ·讨论第44-47页
第三章 核盘菌菌核形成相关蛋白Ss-Sl2功能研究第47-72页
 1 材料与方法第47-56页
   ·材料第47-48页
     ·菌株及培养方法第47页
     ·质粒及载体第47-48页
     ·酶、试剂盒及其它试剂第48页
   ·方法第48-56页
     ·Ss-Sl2蛋白结构分析第48页
     ·Ss-Sl2基因原核表达载体的构建第48页
     ·Ss-Sl2基因在大肠杆菌中的诱导表达第48-49页
     ·Ss-Sl2基因原核表达蛋白的SDS-PAGE分析第49页
     ·抗血清的制备及采集第49-50页
     ·间接ELISA测定抗血清的效价第50页
     ·Western杂交分析第50-51页
     ·Ss-Sl2蛋白免疫胶体金定位分析第51-52页
     ·Ss-Sl2基因在菌核发育不同阶段的表达分析第52-53页
     ·外源cAMP对Ss-Sl2基因表达水平的影响第53页
     ·环境pH对Ss-Sl2基因表达水平的影响第53页
     ·Ss-Sl2基因沉默载体的构建第53-54页
     ·Ss-Sl2基因沉默转化子的获得第54页
     ·Ss-Sl2基因沉默转化子的形态特征观察第54页
     ·Ss-Sl2基因沉默转化子菌核内部超微结构观察第54-55页
     ·Ss-Sl2基因沉默转化子的生长速度分析第55页
     ·Ss-Sl2基因沉默转化子的致病力分析第55页
     ·Ss-Sl2基因沉默转化子维持细胞完整性能力测定第55页
     ·核盘菌黑色素合成相关基因克隆及表达分析第55-56页
 2 结果与分析第56-69页
   ·Ss-Sl2蛋白结构分析第56-60页
   ·Ss-Sl2蛋白亚细胞定位第60-63页
     ·Ss-Sl2基因在大肠杆菌中的表达第60页
     ·Ss-Sl2原核表达产物抗体的效价及特异性分析第60-61页
     ·Ss-Sl2蛋白的亚细胞定位第61-63页
   ·Ss-Sl2基因在菌核发育不同阶段的表达分析第63页
   ·Ss-Sl2基因表达调控分析第63-65页
   ·Ss-Sl2基因沉默转化子的获得第65页
   ·Ss-Sl2基因沉默转化子的表型第65-69页
     ·Ss-Sl2基因沉默转化子的形态特征第65-67页
     ·Ss-Sl2基因沉默转化子菌丝生长与致病力第67页
     ·Ss-Sl2基因沉默转化子维持细胞完整性能力分析第67-69页
   ·Ss-Sl2基因沉默转化子中黑色素合成相关基因的表达第69页
 3 结论与讨论第69-72页
   ·结论第69-70页
   ·讨论第70-72页
第四章 Ss-Sl2蛋白作用机理研究第72-91页
 1 材料与方法第72-78页
   ·材料第72-73页
     ·菌株及培养方法第72页
     ·质粒及载体第72-73页
     ·酶、培养基及其它试剂第73页
   ·方法第73-78页
     ·免疫共沉淀第73页
     ·蛋白质LC-MS/MS质谱分析第73页
     ·酵母双杂交相关载体的构建第73-74页
     ·酵母感受态的制备第74-75页
     ·酵母转化方法第75-76页
     ·蛋白质保守结构域分析第76页
     ·Ss-Gpd和Ss-Hex1基因沉默载体的构建第76-78页
     ·Ss-Gpd和Ss-Hex1基因沉默转化子的获得第78页
     ·沉默转化子的表型分析第78页
 2 结果与分析第78-88页
   ·Ss-Sl2互作蛋白的筛选第78-79页
   ·Ss-Sl2互作蛋白的验证第79-80页
   ·Ss-Sl2互作蛋白在Ss-Sl2沉默转化子中的表达分析第80-81页
   ·核盘菌GAPDH蛋白结构分析第81页
   ·Ss-Gpd基因沉默转化子的获得第81-82页
   ·Ss-Gpd基因沉默转化子中Ss-Sl2的表达情况第82页
   ·Ss-Gpd基因沉默转化子的表型分析第82-83页
   ·核盘菌Hex1蛋白结构分析第83-84页
   ·Ss-Hex1基因沉默转化子的获得第84-85页
   ·Ss-Hex1基因沉默转化子中Ss-Sl2的表达情况第85页
   ·Ss-Hex1基因沉默转化子的表型分析第85-88页
     ·Ss-Hex1基因沉默转化子菌落形态第85-86页
     ·Ss-Hex1基因沉默转化子维持细胞完整性能力分析第86-88页
 3 结论与讨论第88-91页
   ·结论第88页
   ·讨论第88-91页
第五章 结论与展望第91-94页
参考文献第94-109页
致谢第109-110页
附录1:各种培养基、溶液、试剂及药品配方第110-115页
附录2:已发表的相关文章第115页

 
 
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