| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 研究背景综述 | 第10-53页 |
| 第一节、解偶联蛋白家族概述 | 第11-27页 |
| 一、解偶联蛋白家族的发现 | 第11页 |
| 二、哺乳动物中的解偶联蛋白 | 第11-15页 |
| 1. 哺乳动物UCPs简介 | 第11-12页 |
| 2. UCPs基因的定位以及结构 | 第12-14页 |
| 3. 哺乳动物UCPs的组织分布 | 第14页 |
| 4. UCPs的结构 | 第14-15页 |
| 三、哺乳动物UCPs调节以及生物学功能 | 第15-27页 |
| 1. 解偶联蛋白活性的调节 | 第16-21页 |
| 2. 解偶联蛋白UCPs的生物学功能 | 第21-25页 |
| 3. UCPs表达的调控 | 第25页 |
| 4. UCPs半衰期的调控 | 第25-27页 |
| 第二节 线粒体与氧化磷酸化 | 第27-37页 |
| 一、线粒体与氧化磷酸化 | 第27-32页 |
| 1. 线粒体的发现 | 第27页 |
| 2. 线粒体的结构 | 第27-29页 |
| 3. 线粒体的功能 | 第29-32页 |
| 二、氧化磷酸化的偶联机制——化学渗漏假说 | 第32-35页 |
| 1. 化学渗漏假说的主要内容 | 第32-33页 |
| 2. 线粒体氧化磷酸化的调控 | 第33-34页 |
| 3. 氧化磷酸化抑制剂 | 第34-35页 |
| 三、氧极谱(Oxygen Polargraph)的原理 | 第35-37页 |
| 1. 极谱法 | 第35页 |
| 2. Clark氧电极的构造 | 第35-37页 |
| 第三节、文昌鱼与基因倍增 | 第37-42页 |
| 一、文昌鱼及其进化地位 | 第37-39页 |
| 二、2R假说的历史 | 第39-40页 |
| 三、UCPs蛋白进化的假说 | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-53页 |
| 第二章、实验部分 | 第53-85页 |
| 第一节、文昌鱼UCP蛋白的分子克隆以及呼吸测定 | 第54-75页 |
| 一、引言 | 第54页 |
| 二、材料与方法 | 第54-67页 |
| 1. 材料 | 第54-55页 |
| 2. RNA的提取 | 第55页 |
| 3. 逆转录合成第一条cDNA链 | 第55-56页 |
| 4. 文昌鱼UCP片段的克隆 | 第56-58页 |
| 6. 表达载体的构建 | 第58-60页 |
| 7. 使用Mega Primer的方法进行点突变 | 第60-61页 |
| 8. 酵母感受态细胞的制备 | 第61-62页 |
| 9. 酵母感受态的转化及培养 | 第62-63页 |
| 10. 酵母线粒体的提取 | 第63-65页 |
| 11. Western免疫印迹 | 第65页 |
| 12. 线粒体呼吸的检测 | 第65-66页 |
| 13. 酵母线粒体的质子渗漏曲线 | 第66-67页 |
| 14. 生物信息学以及数据分析 | 第67页 |
| 三、实验结果 | 第67-75页 |
| 1. 从文昌鱼中得到一段长2922bp的转录产物,编码着一个与哺乳动物UCP的同源的蛋白 | 第67-69页 |
| 2. 文昌鱼UCP与哺乳动物UCPs高度同源,在序列上与UCP2和UCP3更为相近 | 第69-70页 |
| 3. 文昌鱼UCP和哺乳动物UCP1和UCP2在酵母线粒体中的表达 | 第70-71页 |
| 4. 文昌鱼UCP具有比较温和的解偶联功能,不受GDP调节 | 第71-73页 |
| 5. 异源表达的文昌鱼UCP的质子渗漏曲线与哺乳动物的UCP2相似 | 第73-75页 |
| 第二节 UCP家族进化的正向选择与UCP1的结构与功能研究 | 第75-85页 |
| 一、引言 | 第75页 |
| 二、实验结果 | 第75-83页 |
| 1. UCP家族系统进化树的构建 | 第75-78页 |
| 2. 使用点突变的方法研究UCP1结构与功能之间的关系 | 第78-79页 |
| 3. 利用酵母异源表达系统检测UCP1突变的解偶联活性 | 第79-83页 |
| 三、讨论 | 第83-85页 |
| Publications | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
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