| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-23页 |
| 1.1 米曲霉生物育种及ARTP在生物育种中的应用 | 第14-16页 |
| 1.1.1 米曲霉生物育种 | 第14-15页 |
| 1.1.2 ARTP在生物育种中的应用 | 第15-16页 |
| 1.2 蛋白酶的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.2.1 蛋白酶的分类 | 第16-17页 |
| 1.2.2 蛋白酶的来源 | 第17-18页 |
| 1.2.3 蛋白酶的应用 | 第18-19页 |
| 1.3 发酵食品中耐盐蛋白酶的研究 | 第19-20页 |
| 1.4 蛋白酶分离纯化的研究 | 第20-21页 |
| 1.5 研究目的和研究内容及创新点 | 第21-23页 |
| 1.5.1 研究目的 | 第21-22页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第22页 |
| 1.5.3 创新点 | 第22-23页 |
| 第二章 利用ARTP技术选育高产蛋白酶米曲霉 | 第23-39页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料与仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.2.1 实验菌种 | 第23页 |
| 2.2.2 试剂与材料 | 第23页 |
| 2.2.3 设备与仪器 | 第23-24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-30页 |
| 2.3.1 菌株的活化与培养 | 第24页 |
| 2.3.2 生长曲线 | 第24-25页 |
| 2.3.3 ARTP诱变条件的建立 | 第25页 |
| 2.3.4 致死率曲线 | 第25页 |
| 2.3.5 诱变再生菌株的筛选 | 第25页 |
| 2.3.6 诱变再生菌株的复筛 | 第25-27页 |
| 2.3.7 遗传稳定性验证 | 第27页 |
| 2.3.8 菌落形态观察及生长速度比较 | 第27-28页 |
| 2.3.9 菌种鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3.10 SYBR Green荧光定量PCR | 第29-30页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第30-37页 |
| 2.4.1 生长曲线 | 第30页 |
| 2.4.2 致死率 | 第30-31页 |
| 2.4.3 ARTP诱变筛选结果 | 第31页 |
| 2.4.4 遗传稳定性验证 | 第31-33页 |
| 2.4.5 菌体形态学观察与生长 | 第33-34页 |
| 2.4.6 菌种鉴定 | 第34-35页 |
| 2.4.7 米曲霉总RNA纯度检测 | 第35-36页 |
| 2.4.8 内参基因和目的基因的熔解曲线分析 | 第36-37页 |
| 2.4.9 原始菌株与诱变菌株转录表达水平分析 | 第37页 |
| 2.5 本章小结 | 第37-39页 |
| 第三章 耐盐天冬氨酰氨肽酶的分离、纯化及耐盐分子机制初步研究 | 第39-54页 |
| 3.1 引言 | 第39-40页 |
| 3.2 实验材料和仪器设备 | 第40页 |
| 3.2.1 实验菌种 | 第40页 |
| 3.2.2 试剂与材料 | 第40页 |
| 3.2.3 设备与仪器 | 第40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-45页 |
| 3.3.1 酶活测定 | 第40-41页 |
| 3.3.2 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第41-42页 |
| 3.3.3 基质辅助激光解吸电离飞行时间/飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF-MS) | 第42页 |
| 3.3.4 生化特性分析 | 第42-43页 |
| 3.3.5 AAP和 NP I的动力学参数 | 第43-44页 |
| 3.3.6 蛋白质同源性建模 | 第44页 |
| 3.3.7 MD模拟 | 第44页 |
| 3.3.8 二级结构、酸性残基和内部残基疏水性 | 第44页 |
| 3.3.9 统计分析 | 第44-45页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第45-52页 |
| 3.4.1 分离、纯化、分子量测定和鉴定 | 第45-46页 |
| 3.4.2 生化特性分析 | 第46-49页 |
| 3.4.3 动力学参数 | 第49页 |
| 3.4.4 蛋白质同源建模 | 第49-50页 |
| 3.4.5 MD模拟 | 第50-51页 |
| 3.4.6 二级结构、酸性残基和内部残基疏水性 | 第51-52页 |
| 3.5 本章小结 | 第52-54页 |
| 第四章 米曲霉碱性蛋白酶的分离、纯化及其耐盐初步机制研究 | 第54-66页 |
| 4.1 引言 | 第54页 |
| 4.2 实验材料与仪器设备 | 第54-55页 |
| 4.2.1 材料与试剂 | 第54-55页 |
| 4.2.2 仪器与设备 | 第55页 |
| 4.3 实验方法 | 第55-57页 |
| 4.3.1 酶活测定 | 第55-56页 |
| 4.3.2 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第56页 |
| 4.3.3 基质辅助激光解吸电离飞行时间/飞行时间质谱(MALDI-TOF/ TOF-MS) | 第56页 |
| 4.3.4 生化特性 | 第56-57页 |
| 4.3.5 AP和 NPⅠ的动力学参数 | 第57页 |
| 4.3.6 蛋白质同源模型 | 第57页 |
| 4.3.7 MD模拟 | 第57页 |
| 4.3.8 二级结构、酸性残基和内部残基疏水性 | 第57页 |
| 4.3.9 数据分析 | 第57页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第57-64页 |
| 4.4.1 分离纯化、分子量测定与鉴定 | 第57-59页 |
| 4.4.2 生化特性 | 第59-61页 |
| 4.4.3 动力学参数 | 第61-62页 |
| 4.4.4 蛋白质同源性建模 | 第62页 |
| 4.4.5 MD模拟 | 第62-64页 |
| 4.4.6 二级结构、酸性残基和内部残基疏水性 | 第64页 |
| 4.5 本章小结 | 第64-66页 |
| 第五章 全文总结与展望 | 第66-68页 |
| 5.1 全文主要结论 | 第66-67页 |
| 5.2 存在问题与展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读硕士学位期间获得的研究成果 | 第77页 |
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