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α—乙酰乳酸脱羧酶的定向进化及低温条件下高活力突变酶的筛选

论文目录

中文摘要	第1-6页
英文摘要	第6-10页
一综述——酶分子的定向进化	第10-19页
1、酶分子定向进化简介	第10-11页
2、酶分子定向进化的历史	第11-13页
3、定向进化技术	第13-15页
4、定向进化的应用	第15-17页
5、筛选方法的发展	第17页
6、总结与展望	第17-19页
二前言	第19-26页
1、 α-乙酰乳酸与啤酒发酵的关系	第19-20页
2、 α-乙酰乳酸脱羧酶降低啤酒发酵中双乙酰含量的作用	第20-21页
3、 α-ALDC的研究过程	第21-23页
4、 α-ALDC的应用前景	第23-24页
5、本实验的目的意义和技术路线	第24-26页
三实验材料和方法	第26-37页
1、菌株和质粒	第26页
2、 PCR引物的设计合成	第26页
3、质粒提取	第26-28页
4、易错PCR	第28-29页
5、琼脂糖凝胶中DNA片段的回收纯化	第29-30页
6、感受态细胞的制备	第30页
7、限制性酶切、连接和转化	第30-31页
8、表达质粒的构建	第31-32页
9、 α-ALDC活性的检测	第32-33页
10、 96孔板微量比活初步筛选	第33-34页
11、粗测α-ALDC酶活	第34页
12、 α-ALDC的分离、纯化	第34-35页
13、酶学性质的测定	第35页
14、测序质粒的构建	第35页
15、琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE电泳	第35-36页
16、测序	第36-37页
四实验结果	第37-55页
1、易错PCR	第37-38页
2、载体和插入基因的制备	第38-39页
3、转化子的筛选及酶切鉴定	第39-41页
4、突变酶基因的表达	第41-42页
5、突变酶PBVL33的分离提纯	第42-44页
6、突变酶与天然酶的酶学性质比较	第44-46页
7、测序质粒的构建	第46-48页
8、突变酶与天然酶的基因测序结果比较	第48-50页
9、氨基酸序列组成及可能的二级结构	第50-55页
五讨论	第55-60页
1、易错PCR条件的确立	第55页
2、筛选方法	第55-56页
3、定向进化的结果	第56-60页
六结论	第60-61页
参考文献	第61-69页
附图	第69-71页
致谢	第71页

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