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当前位置:教育论文中心首页--博士论文--SARS病毒RdRp基因的RNA干扰研究
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SARS病毒RdRp基因的RNA干扰研究
 
     论文目录
 
图形目录第1-13页
表格目录第13-15页
中文摘要第15-18页
英文摘要第18-21页
第一章 SARS病毒RdRp基因的组装及其表达质粒的构建第21-52页
 摘要第22-23页
 1 引言第23-25页
 2 材料与方法第25-33页
   ·材料第25-28页
     ·合成的寡核苷酸片段第25-26页
     ·主要试剂第26-27页
     ·质粒载体第27-28页
     ·大肠杆菌菌种第28页
     ·大肠杆菌培养基第28页
   ·方法第28-33页
     ·SARS病毒RdRp基因的组装第28-30页
     ·RdRp基因真核表达质粒的构建第30-32页
     ·RdRp基因的序列分析第32-33页
 3 结果第33-37页
   ·SARS病毒RdRp基因的组装第33页
   ·pcDNA-RdRp表达质粒的构建第33-35页
   ·SARS病毒RdRp基因的序列分析第35-37页
 4 讨论第37-47页
   ·SARS病毒基因组的生物信息学分析第37-41页
     ·SARS病毒系统进化分析第37-38页
     ·SARS病毒核苷酸序列分析第38-41页
     ·SARS病毒蛋白质功能分析第41页
   ·组装RdRp基因的其他几套技术方案第41-43页
   ·本项技术的几个关键问题第43-45页
   ·组装PCR技术的拓展应用第45-47页
 小结第47-48页
 参考文献第48-52页
第二章 SARS病毒RdRp基因与EGFP基因表达质粒的构建和鉴定第52-92页
 摘要第53-54页
 1 引言第54-56页
 2 材料与方法第56-67页
   ·材料第56-60页
     ·合成的引物第56-57页
     ·主要试剂第57页
     ·质粒载体第57-59页
     ·细胞株第59页
     ·细胞培养液第59-60页
     ·大肠杆菌菌株第60页
     ·大肠杆菌培养基第60页
     ·仪器设备第60页
   ·方法第60-67页
     ·通用的基因克隆程序第60-63页
     ·Vero E6细胞的培养第63页
     ·Vero E6细胞的脂质体转染第63-64页
     ·Vero E6细胞的电穿孔法转化第64页
     ·Vero E6细胞中表达EGFP的观察第64-65页
     ·RNA的提取第65页
     ·RT-PCR分析第65-66页
     ·RNA专用试剂和耗材的处理第66-67页
 3 结果第67-81页
   ·表达质粒的构建第67-73页
     ·总体设计方案第67-69页
     ·表达质粒的构建第69-73页
   ·重组质粒的鉴定第73-78页
     ·重组质粒的酶切和PCR鉴定第73-77页
     ·重组质粒的序列鉴定第77-78页
   ·重组表达质粒的功能研究第78-81页
     ·靶基因在Vero E6细胞中的转录第78-79页
     ·重组质粒表达蛋白质的荧光显微镜分析第79-81页
 4 讨论第81-86页
   ·RNAi研究中报告基因的选择第81-84页
     ·常用的报告基因第81-82页
     ·绿色荧光蛋白第82-84页
   ·RNAi研究中载体的选择第84-86页
 小结第86-87页
 参考文献第87-92页
第三章 稳定表达SARS病毒Rdgp基因的细胞株的建立第92-118页
 1 引言第94-96页
 2 材料与方法第96-101页
   ·材料第96-98页
     ·真核表达质粒第96页
     ·细胞株第96页
     ·细胞培养液第96页
     ·细胞培养常用溶液第96-97页
     ·大肠杆菌菌种第97页
     ·大肠杆菌培养基第97页
     ·主要试剂第97-98页
   ·方法第98-101页
     ·细胞冻存第98页
     ·细胞复苏第98页
     ·细胞培养第98页
     ·细胞的转染第98页
     ·细胞的电转化第98页
     ·细胞转染效率的测定第98-99页
     ·单克隆细胞株的建立第99页
     ·哺乳动物细胞染色体的制备第99-100页
     ·质粒的制备第100页
     ·质粒的线性化处理第100-101页
 3 结果第101-110页
   ·细胞转染条件的优化第101-104页
     ·DNA和SF加量及其相互比例对转染效率的影响第101-102页
     ·转染时细胞密度对转染效率的影响第102-103页
     ·DNA-SF复合物与细胞共同孵育的时间对转染效率的影响第103页
     ·不同方法制备的DNA对转染效率的影响第103-104页
   ·不同细胞株对G418敏感性的检测第104-105页
   ·单克隆细胞株的建立第105-108页
   ·单克隆细胞株的鉴定第108-110页
 4 讨论第110-114页
   ·影响细胞转染效率的因素第110-112页
     ·细胞的种类第110页
     ·细胞的生长状态第110-111页
     ·DNA和转染试剂的比例和加量第111-112页
     ·DNA-转染试剂复合体与细胞共孵育的时间第112页
     ·血清和抗生素的添加第112页
   ·细胞株建立过程中的注意事项第112-114页
 小结第114-115页
 参考文献第115-118页
第四章 SARS病毒RdRp基因的RNA干扰第118-176页
 摘要第119-121页
 1 引言第121-123页
 2 材料与方法第123-139页
   ·材料第123-126页
     ·siRNA的模板DNA序列和PCR引物第123-125页
     ·主要试剂第125页
     ·质粒第125页
     ·细胞株第125页
     ·细胞培养液第125页
     ·常用溶液第125-126页
     ·实验动物第126页
     ·主要仪器设备第126页
   ·实验方法第126-139页
     ·siRNA的体外转录合成第126-130页
     ·siRNA的Cy3标记第130页
     ·siRNA表达盒的构建第130-134页
     ·细胞的培养、复苏、冻存第134页
     ·细胞的转染第134-136页
     ·细胞中EGFP和Cy3-siRNA的观察第136页
     ·转染效率和RNAi效果的荧光显微镜法测定第136页
     ·Real-time quantitative RT-PCR第136-137页
     ·流式细胞仪分析RNAi结果第137-138页
     ·小鼠体内的RNA干扰实验第138-139页
 3 结果第139-158页
   ·siRNA的体外RNAi实验第139-153页
     ·siRNA的体外转录合成第139-140页
     ·siRNA的Cy3标记第140页
     ·siRNA的转染效率第140-141页
     ·Vero E6细胞中RNAi效果的荧光显微镜法检测第141-143页
     ·Vero E6细胞中RNAi效果的定量PCR检测第143-149页
     ·Vero E6细胞中RNAi效果的流式细胞仪检测第149-152页
     ·3种检测方法得到的RNAi效果的比较第152页
     ·siRNA对内源基因表达的抑制作用第152-153页
   ·SEC的体外RNAi实验第153-156页
     ·SEC的构建第153-154页
     ·SEC在细胞中的RNAi作用第154-156页
   ·siRNA的小鼠体内RNA干扰第156-158页
 4 讨论第158-168页
   ·应用荧光显微镜计数法判断RNAi效果时的注意事项第158-159页
     ·显微镜对观察结果的影响第158页
     ·标记分子的荧光强度第158-159页
     ·其他第159页
   ·获得siRNA的方法第159-161页
     ·体外转录法合成siRNA第159页
     ·siRNA表达框第159-160页
     ·化学合成第160页
     ·“鸡尾酒”法第160页
     ·siRNA表达载体第160-161页
   ·体内RNAi研究涉及的靶基因第161-162页
   ·体内RNAi研究的基因导入途径第162-163页
     ·尾静脉注射第162页
     ·病毒感染体细胞第162页
     ·移植第162页
     ·通过转基因技术制备RNAi转基因动物第162-163页
     ·其他第163页
   ·基因导入的载体系统第163-166页
     ·病毒载体系统第163-164页
     ·非病毒载体系统第164-166页
   ·RNAi效果的判断方法第166页
   ·抑制SARS病毒RdRp基因表达的siRNA第166-168页
 小结第168-169页
 参考文献第169-176页
文献综述 SARS的研究进展第176-202页
 1 SARS的流行病学研究第177-180页
   ·流行情况第177页
   ·流行特点第177-178页
   ·传染源第178-179页
   ·传播途径第179页
   ·其他第179-180页
 2 SARS临床研究第180-189页
   ·临床基础研究第180-186页
   ·临床分期及其症状第186-187页
   ·临床治疗第187-188页
   ·中医药在SARS治疗中的作用第188-189页
 3 SARS冠状病毒的基础研究第189-199页
   ·冠状病毒简介第189-190页
   ·SARS冠状病毒的发现和确证第190-191页
   ·超微结构特征第191-194页
   ·SARS病毒的复制第194-195页
   ·SARS病毒的来源第195-196页
   ·SARS的分子生物学研究第196-199页
 4 SARS的防治展望第199-202页
   ·疫苗研究第199-200页
   ·药物开发第200-202页
参考文献第202-212页
致谢第212-213页
在读期间发表和待发表的论文第213-214页

 
 
论文编号BS1612258,这篇论文共214
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