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当前位置:教育论文中心首页--博士论文--瓶霉属Phialophora spp.来源的纤维素酶和半纤维素酶的基因克隆与表达
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瓶霉属Phialophora spp.来源的纤维素酶和半纤维素酶的基因克隆与表达
 
     论文目录
 
摘要第1-8页
Abstract第8-15页
第一章 绪论第15-30页
   ·木质纤维素的组成、结构及降解方式第15-16页
   ·糖苷水解酶第16-18页
   ·纤维素酶及半纤维素酶的研究进展第18-23页
     ·纤维素酶第18-20页
     ·半纤维素及其降解酶第20-23页
     ·碳水化合物结合结构域(CBD或CBM)的研究进展第23页
   ·木质素降解酶的研究进展第23-24页
   ·纤维素酶及半纤维素酶的应用第24-26页
     ·在饲料中的应用第24页
     ·在食品工业中的应用第24-25页
     ·在啤酒和葡萄酒酿造中的应用第25页
     ·在纺织和洗涤行业中的应用第25页
     ·在造纸和纸浆制造过程中的应用第25页
     ·在农业和基础研究中的应用第25-26页
     ·在生物能源方面的应用第26页
   ·嗜热微生物来源的纤维素酶和半纤维素酶第26-27页
   ·目前的研究趋势第27-29页
   ·本研究的目的和意义第29-30页
第二章 云南锡矿酸性废水中木质纤维素降解菌的分离、鉴定及其产酶分析第30-42页
   ·实验材料第30-31页
     ·样品采集第30页
     ·试剂和主要仪器第30页
     ·引物合成和DNA测序第30页
     ·培养基和溶液第30-31页
   ·实验方法第31-35页
     ·PDA平板划线筛选真菌第31页
     ·真菌基因组的提取第31页
     ·真菌的鉴定第31-32页
     ·菌株G5产酶初步筛选第32页
     ·不同碳源诱导下的产酶分析第32-34页
     ·酶液的性质测定第34页
     ·水解试验第34-35页
   ·结果与分析第35-40页
     ·酸性废水中真菌的分离和鉴定第35-36页
     ·酶活标准曲线第36页
     ·不同碳源对G5产纤维素酶的影响第36-37页
     ·酶液性质测定(以Avicel为碳源)第37-39页
     ·水解试验第39-40页
     ·讨论第40-42页
第三章 Phialophora sp.G5来源的纤维素酶基因的克隆和表达第42-85页
 第一节 内切葡聚糖酶EgG5和EgGH45克隆表达和性质研究第42-66页
   ·实验材料第42-43页
     ·菌株、载体和内切葡聚糖酶基因egG5、egGH45第42页
     ·引物合成和核酸测序第42页
     ·试剂盒、酶和生化试剂第42页
     ·主要仪器第42页
     ·试剂第42-43页
     ·培养基第43页
   ·实验方法第43-52页
     ·真菌来源的GH5和GH45内切葡聚糖酶基因的简并引物设计第43-44页
     ·基因组DNA的提取第44页
     ·RNA的提取第44-45页
     ·egG5和egGH45基因的克隆第45-48页
     ·序列及结构分析第48页
     ·EgG5缺失CBM和β-sheet突变第48页
     ·表达载体的构建第48-49页
     ·EgG5、EgG5-CBM、EgG5-Mut、EgGH45表达和纯化第49-51页
     ·酶学性质分析第51-52页
     ·EgG5和EgG5-CBM与微晶纤维素的结合实验第52页
     ·EgG5及EgG5-Mut圆二色光谱分析其二级结构第52页
   ·结果与分析第52-63页
     ·EgG5和EgGH45序列及结构分析第52-56页
     ·表达载体pPIC9-egG5及其突变体和pPIC9-egGH45的构建第56页
     ·目标基因在毕赤酵母中的诱导表达及纯化第56-57页
     ·内切葡聚糖酶的酶学性质分析第57-63页
   ·讨论第63-66页
 第二节 Phialophora SP.G5的外切纤维素酶CBH6A的克隆、表达和性质研究第66-77页
   ·实验材料第66页
     ·菌株、载体和外切葡聚糖酶基因第66页
     ·引物合成和核酸测序第66页
     ·试剂盒、工具酶和生化试剂第66页
     ·主要仪器第66页
     ·试剂第66页
     ·培养基配制第66页
   ·实验方法第66-69页
     ·基因的获得第66-68页
     ·序列及结构分析第68页
     ·表达载体的构建第68页
     ·pPIC9-cbh6A在毕赤酵母中的表达及纯化第68页
     ·酶学性质分析第68-69页
   ·结果与分析第69-75页
     ·序列及三维结构分析第69-70页
     ·表达载体的构建第70页
     ·CBH6A在毕赤酵母中的表达及纯化第70-71页
     ·重组CBH6A的酶学性质分析第71-75页
   ·讨论第75-77页
 第三节 Phialophora SP. G5来源葡萄糖苷酶基因的表达和性质研究第77-85页
   ·实验材料第77页
     ·菌株、载体和葡萄糖苷酶基因第77页
     ·引物合成和核酸测序第77页
     ·试剂盒、工具酶和生化试剂第77页
     ·主要仪器第77页
     ·试剂第77页
     ·培养基配制第77页
   ·实验方法第77-79页
     ·基因全长克隆第77-78页
     ·葡萄糖苷酶的表达与纯化第78-79页
     ·BglGH1的酶学性质分析第79页
   ·结果与分析第79-84页
     ·序列和结构分析第79-81页
     ·酵母表达载体pPIC9-bglGH1的构建第81页
     ·重组表达载体在毕赤酵母中的表达及纯化第81-82页
     ·葡萄糖苷酶BglGH1的酶学性质分析第82-84页
   ·讨论第84-85页
第四章 GH7β-1,4-葡聚糖酶BglG5的纯化和基因克隆第85-99页
   ·实验材料第85页
     ·菌株、载体第85页
     ·引物合成和核酸序列测定第85页
     ·试剂盒、工具酶和生化试剂第85页
     ·主要仪器第85页
     ·试剂第85页
     ·培养基配制第85页
   ·实验方法第85-89页
     ·β-1,4-葡聚糖酶BglG5的纯化第85-86页
     ·纯化蛋白的鉴定第86页
     ·纯化蛋白性质测定第86页
     ·模拟胃液下纯化酶的稳定性和对大麦-豆粕型饲料粘度影响第86-87页
     ·纯化酶对大麦麦芽汁粘度的影响第87页
     ·产物分析第87页
     ·纯化酶基因全长的获得第87-89页
   ·结果与分析第89-97页
     ·β-1,4-葡聚糖酶BglG5的纯化第89-91页
     ·质谱鉴定结果第91页
     ·纯化酶的性质测定第91-93页
     ·底物特异性和动力学分析及和其他酶的比较第93-94页
     ·纯化酶在SGF中的稳定性第94页
     ·水解产物分析第94页
     ·纯化酶BglG5对大麦-豆粕型饲料粘度的影响第94页
     ·纯化酶对麦芽汁过滤速率和粘度的影响第94页
     ·纯化酶基因克隆第94-97页
   ·讨论第97-99页
第五章 Phialophora sp.P13甘露聚糖酶和木聚糖酶的基因克隆与表达第99-119页
 第一节 甘露聚糖酶MAN5AP13的克隆和表达第99-111页
   ·实验材料第99-100页
     ·菌株、载体第99页
     ·引物合成和核酸序列测定第99页
     ·试剂盒、工具酶和生化试剂第99页
     ·主要仪器第99页
     ·试剂第99页
     ·培养基配制第99-100页
   ·实验方法第100-103页
     ·甘露聚糖酶基因man5AP13 DNA的获得第100页
     ·甘露聚糖酶基因man5AP13 cDNA的克隆第100-101页
     ·甘露聚糖酶MAN5AP13在毕赤酵母中的表达和纯化第101-102页
     ·酶活测定和性质分析第102页
     ·水解产物分析第102-103页
     ·在模拟胃液中的稳定性第103页
     ·在模拟胃液中对甘露聚糖(LBG)的降解能力第103页
   ·结果与分析第103-109页
     ·序列与结构分析第103-105页
     ·蛋白表达和纯化第105页
     ·性质测定第105-108页
     ·底物特异性和动力学分析第108页
     ·水解产物分析第108页
     ·重组酶在模拟胃液中的稳定性第108-109页
     ·重组酶MAN5AP13在模拟胃液条件下对甘露聚糖的降解能力第109页
   ·讨论第109-111页
 第二节 改进简并PCR克隆来源于Phialophora sp.P13的木聚糖酶基因第111-119页
   ·实验材料第111页
     ·菌株、载体第111页
     ·引物合成和核酸序列测定第111页
     ·试剂盒、工具酶和生化试剂第111页
     ·主要仪器第111页
     ·试剂第111页
     ·培养基配制第111页
   ·实验方法第111-114页
     ·RNA的提取和反转录第111-112页
     ·以cDNA为模板克隆木聚糖酶和内切葡聚糖酶保守区第112页
     ·基因全长的获得第112-113页
     ·表达载体的构建第113页
     ·木聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达和纯化第113页
     ·活性重组子的筛选和摇瓶水平的诱导第113页
     ·重组木聚糖酶的纯化第113-114页
     ·重组酶性质测定第114页
     ·底物特异性和动力学分析第114页
   ·结果与分析第114-118页
     ·序列与结构分析第114-116页
     ·蛋白表达和纯化第116页
     ·性质测定第116-118页
     ·底物特异性和动力学分析第118页
   ·讨论第118-119页
第六章 全文结论第119-121页
参考文献第121-135页
致谢第135-136页
作者简历第136-137页

 
 
论文编号BS1755758,这篇论文共137
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