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Bacillus subtilis 168碱性果胶酶基因在毕赤酵母中的优化、表达、特性以及应用的研究 |
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| 摘要 | 第1-7页 | | Abstract | 第7-14页 | | 第一部分 综述 | 第14-24页 | | ·果胶及果胶物质 | 第14-20页 | | ·果胶的结构 | 第14-15页 | | ·果胶酶的分类 | 第15-16页 | | ·果胶酶的酶学性质 | 第16-18页 | | ·碱性果胶酶在生物脱胶中的应用及意义 | 第18-20页 | | ·毕赤酵母表达系统 | 第20-23页 | | ·毕赤酵母表达系统的研究进展 | 第20-21页 | | ·相关表达载体 | 第21-22页 | | ·获得高拷贝数整合转化子的方法 | 第22页 | | ·毕赤酵母表达外源基因的优点 | 第22页 | | ·温度对毕赤酵母表达的影响 | 第22-23页 | | ·密码子的优化 | 第23页 | | ·本实验前期工作 | 第23页 | | ·实验目的 | 第23-24页 | | 第二部分 材料与方法 | 第24-36页 | | ·实验材料和仪器设备 | 第24-27页 | | ·实验菌株 | 第24页 | | ·培养基 | 第24-25页 | | ·质粒 | 第25页 | | ·引物 | 第25-26页 | | ·酶和试剂 | 第26页 | | ·仪器和设备 | 第26页 | | ·主要缓冲液 | 第26-27页 | | ·方法 | 第27-36页 | | ·细菌总DNA的抽提 | 第27页 | | ·目的基因的获得 | 第27-28页 | | ·载体的构建 | 第28页 | | ·毕赤酵母感受态细胞的制备及转化 | 第28页 | | ·果胶酶基因在毕赤酵母中的诱导表达 | 第28-29页 | | ·果胶酶的纯化 | 第29页 | | ·SDS-PAGE检测表达蛋白 | 第29页 | | ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第29-30页 | | ·酶的去糖基化 | 第30页 | | ·酶解液中还原性糖的测定蛋白浓度的测定 | 第30页 | | ·蛋白浓度的测定 | 第30-31页 | | ·酶学性质的测定 | 第31-32页 | | ·酶动力学常数Km、Vmax的测定 | 第32-33页 | | ·果胶酶密码子的优化 | 第33页 | | ·相同拷贝数转化子的获得及优化前后酶活力比较 | 第33页 | | ·功能性筛选高拷贝转化子 | 第33-34页 | | ·R-T PCR确定拷贝数 | 第34页 | | ·果胶酶发酵参数的优化 | 第34页 | | ·果胶酶对苎麻脱胶和织物煮练的应用 | 第34-35页 | | ·果胶酶对苎麻脱胶条件的优化 | 第35-36页 | | 第三部分 结果与分析 | 第36-50页 | | ·果胶酶pel168基因的获得与分析 | 第36页 | | ·毕赤酵母表达载体pHBM905A的构建 | 第36-37页 | | ·SDS-PAGE检测 | 第37页 | | ·重组果胶酶PEL168P的去糖基化处理 | 第37-38页 | | ·pel168基因在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达 | 第38-39页 | | ·果胶酶最适温度和热稳定性的测定 | 第39-40页 | | ·果胶酶最适pH值和pH稳定性的测定 | 第40-41页 | | ·金属离子和有机溶剂对果胶酶PEL168P的影响 | 第41-42页 | | ·培养温度对果胶酶PEL168P发酵的影响 | 第42-43页 | | ·果胶酶PEL168P动力学参数的测定 | 第43页 | | ·优化后pel168s基因的合成与分析 | 第43-45页 | | ·优化后对果胶酶酶活力的影响 | 第45页 | | ·高拷贝的筛选 | 第45-46页 | | ·R-T PCR测定毕赤酵母基因组中外源基因的拷贝数 | 第46-47页 | | ·不同浓度Ca~(2+)对果胶酶发酵的影响 | 第47页 | | ·果胶酶在生物脱胶上的应用 | 第47-49页 | | ·果胶酶对苎麻脱胶条件的优化 | 第49-50页 | | 第四部分 讨论与展望 | 第50-52页 | | 参考文献 | 第52-57页 | | 致谢 | 第57页 |
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论文编号BS1865258，这篇论文共57页
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