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当前位置:教育论文中心首页--博士论文--鱼腥蓝细菌PCC 7120蛋白激酶Pkn41、Pkn42的GAF结构域初探及pDU1衍生质粒的不稳定性研究
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鱼腥蓝细菌PCC 7120蛋白激酶Pkn41、Pkn42的GAF结构域初探及pDU1衍生质粒的不稳定性研究
 
     论文目录
 
缩略语表第7-8页
摘要第8-10页
ABSTRACT第10-11页
1 前言第12-37页
    1.1 鱼腥蓝细菌PCC 7120简介第12-14页
    1.2 信号转导系统第14-29页
        1.2.1 丝氨酸/苏氨酸及酪氨酸蛋白激酶-蛋白磷酸酶系统第14-16页
        1.2.2 组氨酸蛋白激酶-反映调控子双组分信号转导系统第16-18页
        1.2.3 两种信号转导系统的关联第18页
        1.2.4 GAF结构域第18-29页
    1.3 鱼腥蓝细菌PCC 7120中的信号转导系统第29-34页
        1.3.1 鱼腥蓝细菌PCC 7120中的双组分信号转导系统第29-30页
        1.3.2 鱼腥蓝细菌PCC 7120中的蛋白激酶与蛋白磷酸酶第30-31页
        1.3.3 鱼腥蓝细菌PCC 7120中的GAF结构域第31-32页
        1.3.4 HstK家族第32-34页
    1.4 鱼腥蓝细菌PCC 7120的复制型穿梭载体第34-36页
        1.4.1 携带蓝细菌复制子的pDU1第34-36页
        1.4.2 革兰氏阴性细菌光谱复制型质粒RSF1010第36页
    1.5 研究的目的与意义第36-37页
2 材料与方法第37-60页
    2.1 菌株与培养第37-38页
    2.2 蓝细菌表达菌株的构建及表型观察第38-47页
        2.2.1 Pkn41-GAF、Pkn42-GAF表达质粒的构建第38-42页
        2.2.2 其它GAF表达质粒的构建第42-43页
        2.2.3 点突变Pkn41-GAF表达质粒的构建第43-46页
        2.2.4 三亲本杂交第46-47页
        2.2.5 表型观察第47页
    2.3 PRL25T衍生质粒拷贝数的测定第47-52页
        2.3.1 qPCR引物的设计第47-48页
        2.3.2 qPCR模板的制备第48-49页
        2.3.3 qPCR的体系及程序第49-50页
        2.3.4 qPCR标准曲线的绘制第50-52页
        2.3.5 相对质粒拷贝数的测定第52页
    2.4 大肠杆菌表达菌株的构建及X射线晶体衍射第52-57页
        2.4.1 大肠杆菌Pkn41-GAF表达质粒的构建第52-54页
        2.4.2 天然蛋白的表达第54-55页
        2.4.3 硒代甲硫氨酸衍生物的表达第55页
        2.4.4 蛋白的纯化第55-56页
        2.4.5 蛋白的结晶第56-57页
    2.5 其它技术第57-60页
        2.5.1 Western点杂交第57-58页
        2.5.2 蛋白的部分酶解第58页
        2.5.3 二甲亚砜还原酶酶活测定第58-60页
3 结果与分析第60-97页
    3.1 PKN41、PKN42的GAF结构域表达菌株的构建及表型观察第60-65页
        3.1.1 Pkn41、Pkn42的GAF结构域分析第60页
        3.1.2 pRLnr41、pRLnr42菌株的构建第60-61页
        3.1.3 pRLnr41、pRLnr42表达菌株的表型观察第61-64页
        3.1.4 Pkn41-GAF-HT的确证第64-65页
    3.2 各种GAF表达菌株的构建及表型观察第65-68页
        3.2.1 对照GAF表达菌株的构建第65-66页
        3.2.2 HstK家族GAF表达菌株的构建第66页
        3.2.3 点突变Pkn41-GAF表达菌株的构建第66-68页
        3.2.4 各GAF表达菌株的表型分析第68页
    3.3 复制型质粒拷贝数的研究第68-79页
        3.3.1 相对质粒拷贝数测定方法探索第69-71页
        3.3.2 GAF表达菌株的质粒拷贝数及对应表型第71-76页
        3.3.3 其它表达菌株的质粒拷贝数及对应表型第76-79页
    3.4 HT-PKN41-GAF的X射线晶体衍射第79-97页
        3.4.1 天然HT-Pkn41-GAF的表达纯化第79-81页
        3.4.2 天然HT-Pkn41-GAF的结晶第81-85页
        3.4.3 酶解Pkn41-GAF-HT的结晶第85-86页
        3.4.4 Pkn41-GAF、Pkn42-GAF的配体分析第86-91页
        3.4.5 亚克隆HT-Pkn41-GAF的结晶第91-93页
        3.4.6 天然HT-Pkn41-GAF结构的分子置换与同型置换第93-94页
        3.4.7 HT-Pkn41-GAF硒代衍生物的结晶第94-97页
4 讨论第97-105页
参考文献第105-115页
附录第115-124页
    附表1 PKN41-GAF-HT的质谱验证第115-122页
    附表2 PKN41-GAF-HT上方不明条带的质谱检测第122-124页
致谢第124页

 
 
论文编号BS2638358,这篇论文共124
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