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当前位置:教育论文中心首页--硕士论文--人Ⅲ型胶原蛋白肽在嗜热链球菌中的高效表达及发酵优化
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人Ⅲ型胶原蛋白肽在嗜热链球菌中的高效表达及发酵优化
 
     论文目录
 
摘要第4-5页
ABSTRACT第5页
第1章 绪论第10-19页
    1.1 课题背景及研究目的意义第10-11页
    1.2 胶原蛋白概述第11-17页
        1.2.1 胶原蛋白的分类与分布第11-12页
        1.2.2 胶原蛋白的结构第12-13页
        1.2.3 胶原蛋白的应用第13-14页
        1.2.4 重组胶原蛋白的研究第14-17页
    1.3 研究内容和技术路线第17-19页
        1.3.1 主要研究内容第17页
        1.3.2 本文的技术路线第17-19页
第2章 实验材料与实验方法第19-35页
    2.1 实验材料第19-24页
        2.1.1 目的基因第19页
        2.1.2 试剂与药品第19-20页
        2.1.3 仪器设备第20-21页
        2.1.4 试剂盒及酶第21页
        2.1.5 宿主菌和载体质粒第21页
        2.1.6 培养基的配制第21-22页
        2.1.7 主要试剂及其配制第22-24页
    2.2 构建含有col Ⅲ片段的重组质粒第24-27页
        2.2.1 优化设计人Ⅲ型胶原蛋白肽基因第24页
        2.2.2 重组质粒的构建与鉴定第24-25页
        2.2.3 质粒DNA的提取与鉴定第25页
        2.2.4 质粒DNA的酶切与连接第25-26页
        2.2.5 大肠杆菌感受态细胞制备与转化第26-27页
    2.3 构建嗜热链球菌工程菌第27-29页
        2.3.1 制备嗜热链球菌感受态细胞第27-28页
        2.3.2 嗜热链球菌感受态细胞的电转化第28页
        2.3.3 工程菌菌液PCR鉴定第28-29页
        2.3.4 PCR产物序列通测第29页
    2.4 胶原蛋白肽的表达验证与纯化第29-32页
        2.4.1 筛选最优细胞破碎方法第29-30页
        2.4.2 工程菌蛋白质表达鉴定第30-31页
        2.4.3 目标胶原肽Western Blot鉴定第31页
        2.4.4 目标胶原肽镍离子亲和层析第31-32页
    2.5 目标胶原肽的表达优化第32-35页
        2.5.1 比较嗜热链球菌空菌与工程菌的生长第32页
        2.5.2 考马斯亮蓝法测蛋白质浓度第32页
        2.5.3 菌液OD_(600)下的分光光度值与目标胶原肽浓度的关系第32-33页
        2.5.4 优化培养基第33页
        2.5.5 优化培养条件第33-35页
第3章 构建嗜热链球工程菌第35-46页
    3.1 引言第35页
    3.2 本章实验内容第35-36页
    3.3 构建连接质粒pSBlc3-col Ⅲ-nisⅠ第36-38页
        3.3.1 col Ⅲ与nisⅠ片段的查找、修饰与合成第36-38页
        3.3.2 连接质粒双酶切鉴定第38页
    3.4 构建重组质粒pMG36e-col Ⅲ-nisⅠ第38-40页
        3.4.1 重组质粒琼脂糖电泳鉴定第39页
        3.4.2 重组质粒双酶切鉴定第39-40页
    3.5 构建嗜热链球工程菌第40-45页
        3.5.1 嗜热链球菌生长曲线第40-41页
        3.5.2 重组质粒电转入嗜热链球菌第41-42页
        3.5.3 菌液PCR结果第42页
        3.5.4 全序列通测第42-45页
    3.6 本章小结第45-46页
第4章 胶原蛋白肽的表达、鉴定、纯化与发酵优化第46-61页
    4.1 引言第46页
    4.2 本章实验内容第46-47页
    4.3 目标胶原肽的表达、鉴定与纯化第47-52页
        4.3.1 筛选最优细胞破碎法第47页
        4.3.2 目标胶原肽的蛋白电泳第47-49页
        4.3.3 目标胶原蛋白肽纯化与鉴定第49-52页
    4.4 嗜热链球空菌与工程菌生长曲线比较第52-53页
    4.5 优化培养基与培养条件第53-60页
        4.5.1 考马斯亮蓝标准曲线第53-54页
        4.5.2 菌液OD_(600)下的分光光度值与蛋白质浓度的关系第54-55页
        4.5.3 葡萄糖浓度对工程菌生长的影响第55-56页
        4.5.4 蛋白胨浓度对菌体生长的影响第56页
        4.5.5 酵母提取物浓度对菌体生长的影响第56-57页
        4.5.6 接菌量浓度对菌体生长的影响第57-58页
        4.5.7 培养温度对菌体生长的影响第58页
        4.5.8 红霉素浓度对菌体生长的影响第58-59页
        4.5.9 优化后目标胶原蛋白肽的表达量第59-60页
    4.6 本章小结第60-61页
结论第61-63页
参考文献第63-68页
附录第68-72页
攻读硕士学位期间发表的论文及其它成果第72-74页
致谢第74页

 
 
论文编号BS3915108,这篇论文共74
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